食品中常見有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測方法

◎ 郭 巍

（黑龍江譜尼測試科技有限公司，黑龍江 哈爾濱 150000）

有機(jī)磷農(nóng)藥由于其具有良好的病蟲害防治、易降解和農(nóng)藥殘留時間短等優(yōu)勢而被廣泛應(yīng)用于我國水果和蔬菜的生長過程中，且隨著我國城市化進(jìn)程的不斷增快，我國城市對于農(nóng)產(chǎn)品的需求量不斷增加，這在一定程度上促使了農(nóng)民對于農(nóng)藥的使用。調(diào)查顯示，我國有機(jī)磷農(nóng)藥在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)如瓜果、蔬菜上的使用站到了所有農(nóng)藥使用比例的75%左右。但是，由于有機(jī)磷農(nóng)藥自身的毒性十分大、對環(huán)境的污染大、在食品中有殘留等特點(diǎn)，以及我國民眾對于食品安全重視程度的日益增加，促使我國相關(guān)部門以及食品生產(chǎn)機(jī)構(gòu)必須對有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，從而更好地確保食品安全。下文將主要針對食品有機(jī)磷農(nóng)藥檢測的前期準(zhǔn)備以及檢測方法進(jìn)行探討，以期為我國食品有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測提供參考。

1 提取

1.1 提取劑的選擇

有機(jī)磷農(nóng)藥內(nèi)的分子屬于中等急性分子，根據(jù)相似相溶原理，有機(jī)磷的提取劑選擇主要有丙酮、二氯甲烷、烴類化合物、乙酸乙酯以及其他溶劑，而在通常的實驗過程中，提取劑一般選擇乙腈，這主要是由于乙腈具有優(yōu)良的有機(jī)磷溶解性能極易與水互溶等特點(diǎn)，乙腈還可以溶解其他類型的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)。與乙腈相比，其他溶劑或多或少都有其缺陷，如石油醚不但能夠溶解有機(jī)磷，還容易導(dǎo)致實驗員麻醉；二氯甲烷具有毒性；丙酮的水溶性較低，而且也具有一定的毒性。因此，經(jīng)過大量的實驗證明，食品有機(jī)磷殘留檢測中提取劑選擇性能優(yōu)異的乙腈[1]。

1.2 提取方式的選擇

在檢測過程中，利用乙腈對食品有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行提取時，就需要采用一定的提取方式，被檢測物品溶解后將溶解后的溶液進(jìn)行提取，然后對其提取物進(jìn)行毒性機(jī)理分析和研究。提取方法的不同往往對提取時間和單次樣品處理量等參數(shù)具有很大影響。提取方法有很多種，而經(jīng)常應(yīng)用于食品類產(chǎn)品的農(nóng)藥殘留提取方法主要有：勻漿法、超聲法、加速溶解法、浸泡法、微波萃取法和機(jī)械振蕩法等。

通常情況下，利用勻漿法和渦旋法對食品有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行提取檢測工作時，兩個方法的處理量較小，即檢測過程中一次只能處理一個樣品，這就容易導(dǎo)致食品有機(jī)磷農(nóng)藥殘留提取中出現(xiàn)能耗大、效率低等特點(diǎn)，所以利用這兩種方法對食品有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測時對實驗的要求較高。對于過夜浸泡法來講，耗能較小，但是時間較長，這比較適用于對檢測時間要求不高的檢測。索氏提取法對于溶劑的使用較少，但缺點(diǎn)是提取時間較長。超聲法及電動振蕩法對于人工的消耗不大，而且所提取的樣品質(zhì)量較高，提取效率也比較快。因此，在實際檢測中，常用超聲法及電動振蕩法來對食品有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行提取[2]。

2 凈化

2.1 常見樣品凈化方法

在實際檢測時，為了確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，常在檢測階段前對樣品進(jìn)行凈化處理，即對基體中容易對結(jié)果產(chǎn)生影響的雜質(zhì)進(jìn)行凈化處理。研究發(fā)現(xiàn)，對檢測結(jié)果出現(xiàn)干擾的雜質(zhì)一般包括水、酯類化合物、色素、碳水化合物及酚類物質(zhì)等。在食品檢測過程中，常利用FPD檢測器，該檢測器對含N、P等化合物的檢測準(zhǔn)確性較高，所以在對食品有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測時，常用其作為檢測器械。

檢測儀器選定后，在對食品進(jìn)行有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測時，其具體的凈化方法如下。①對于水果和蔬菜等食品的凈化而言，其主要雜質(zhì)就是所包含的水分，因為水果和蔬菜含有大量的水分，而對其水果和蔬菜進(jìn)行凈化的步驟主要有過濾、鹽析、靜置分層、蒸發(fā)、過膜等。在過膜凈化時，膜厚一般是0.25 μm。②對于含脂類物質(zhì)較多的食品，凈化主要是針對脂類進(jìn)行的，由于脂類物質(zhì)都是由大分子構(gòu)成，而大分子一般對于檢測儀器還具有一定的損害，所以要先去除大分子物質(zhì)，其具體流程：過濾、蒸發(fā)、定容、過膜及其他等。這里，過膜厚度也是0.25 μm。③對于中草藥類的凈化工作，其凈化步驟十分繁瑣，具體如下：過濾、蒸發(fā)、定容、過SPE柱，然后再經(jīng)過蒸發(fā)和定容。④對于茶葉的凈化，具體步驟如下：浸泡、過濾、鹽析、靜置、分層、取液、蒸發(fā)、定容。

2.2 常見除雜試劑與除雜方法

對于不同樣品而言，其所受到雜質(zhì)的影響也各不相同，樣品自身所攜帶的雜質(zhì)對于結(jié)果的影響也各有不同，所以其對于結(jié)果的干擾和影響也各不相同，所以在食品有機(jī)磷殘留檢測過程中往往會出現(xiàn)檢測結(jié)果準(zhǔn)確度要求不同的情況。

3 常見的食品有機(jī)磷殘留檢測方法

3.1 色譜法

色譜法檢測技術(shù)是一種常見的應(yīng)用于食品農(nóng)藥殘留檢測中的定量檢測方法，其優(yōu)點(diǎn)是檢測對象靈活多變、實用性強(qiáng)且具有高精度的分離效果，其檢測準(zhǔn)確性較高，最常用的檢測方法有氣相色譜法（GC）和高效液相色譜法（HPLC）。

氣相色譜法（GC）主要是針對易揮發(fā)而不易分解的有機(jī)物進(jìn)行分離、分解和分析的色譜技術(shù)，該技術(shù)是在20世紀(jì)80年代發(fā)現(xiàn)并被廣泛應(yīng)用于食品農(nóng)藥殘留檢測中的，由于其色譜柱的材質(zhì)隨著科技進(jìn)步而不斷發(fā)生升級和進(jìn)步，所以其在食品有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用優(yōu)勢十分明顯。該方法的具體實施步驟如下：①將提純和濃縮后的有機(jī)磷農(nóng)藥引入氣相色譜柱內(nèi)，促使不同有機(jī)磷農(nóng)藥固相分離。②根據(jù)分離結(jié)果繪制出相應(yīng)的氣相色譜圖。③根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和峰值圖來對比分析，得出檢測結(jié)果。研究發(fā)現(xiàn)，不同色譜柱的材質(zhì)也會在一定程度上對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，如利用不同極性的固定相來對有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行分離，可檢測范圍在0.05～10 ng，而隨著色譜柱材質(zhì)的升級，近年來常用毛細(xì)管柱來替代原有的填充柱，這樣就可以在一定程度上提高檢測儀器的靈敏性和分辨率，該過程對檢測的前期處理要求十分嚴(yán)格。隨著氣相色譜法應(yīng)用的不斷普及，其在食品、化妝品以及血液檢測中都發(fā)揮著不可替代的作用。

高效液相色譜法（HPLC）是液相色譜和氣相色譜相結(jié)合的一種的新型的分析方法，該方法主要是便于實現(xiàn)自動化，且分析過程中有機(jī)磷農(nóng)藥不易汽化、穩(wěn)定性較高，其檢測準(zhǔn)確性及穩(wěn)定性都要比氣相色譜分析法好。有專家學(xué)者對蘋果殘留的有機(jī)磷農(nóng)藥進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)檢測結(jié)果可以精確到1.0 μg左右。通常情況下，對有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測時，一般會采用色譜柱C18，且利用甲醇和乙腈來作為反相色譜。該方法由于兼用了液相色譜和氣相色譜法，所以其檢測結(jié)果會更有針對性[3]。

3.2 快速免疫檢測分析法

快速免疫檢測分析法就是將檢測技術(shù)與免疫技術(shù)相結(jié)合的一種高效、高精度的微量測定方法，其在藥物、激素以及食品農(nóng)藥殘留檢測中應(yīng)用都十分普遍。該方法中常用的檢測手段主要包括熒光免疫法、放射免疫法、酶免疫法及流動注射免疫法。

3.2.1 熒光免疫法

熒光免疫法是將待檢測食品殘留農(nóng)藥的含量與處于游離態(tài)的熒光標(biāo)記物之間的含量進(jìn)行對比分析，該方法主要需要使用特定的熒光素對結(jié)果進(jìn)行顯色來分析其檢測效果。

3.2.2 放射免疫法

放射免疫法就是將混合樣品培養(yǎng)后對其同位素進(jìn)行追蹤和觀察，檢測后對沒有與抗體進(jìn)行結(jié)合的農(nóng)藥含量進(jìn)行標(biāo)定。研究發(fā)現(xiàn)，在利用放射免疫法對毒草的毒性進(jìn)行測試時，其測定區(qū)域較寬泛，且操作簡便，檢測后不需要再經(jīng)過純化處理。

3.2.3 酶免疫分析法

酶免疫分析法主要是利用了抗原和抗體結(jié)合的特異性，但是其與抗原、抗體檢測的不同之處在于該檢測對象換成了酶和輔酶材料，該方法的優(yōu)點(diǎn)在于成本低、檢測效率高且容量較大，但是與其他檢測方法相比，該檢測方法的前期資金投入較大，且其高靈敏度的抗體制備難度較大。因此，酶免疫分析法只適用于特定結(jié)構(gòu)的單殘留物質(zhì)檢測和分析，而對于未知?dú)埩粑锏臋z測局限性比較大。

3.2.4 流動注射免疫法

流動注射免疫法的特點(diǎn)主要是抗體需要固定在可更換的一次性膜上。

簡而言之，免疫法檢測是一種操作簡便、靈敏度高且效率高的一種生物檢測方法，免疫法對有機(jī)磷農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測時，其核心在于制備出有機(jī)磷抗體，雖然其檢測對象和檢測精確度還有待檢驗，但是目前我國各主要食品農(nóng)藥檢測機(jī)構(gòu)常用免疫法來對農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測和分析。

3.3 酶抑制法

酶抑制法的原理就是利用酶的活性在有機(jī)磷以及其他物質(zhì)的影響下導(dǎo)致其活性受到干擾和抑制。在檢測過程中，若檢測樣品內(nèi)不含有有機(jī)磷農(nóng)藥殘留，那么酶的活性就不會受到影響，若有有機(jī)磷農(nóng)藥殘余時，再結(jié)合pH值、吸光度、熒光度以及其他參數(shù)變量來對有機(jī)磷農(nóng)藥存留進(jìn)行分析和研究。例如，在利用分光光度計進(jìn)行吸光度測試時，需要根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來判斷有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的狀況，在實際研究檢測過程中，利用乙酞膽堿酶作為催化酶，利用其活性來對有機(jī)磷的存在進(jìn)行檢測，并根據(jù)吸光度來對其含量進(jìn)行定量分析。由于該方法對于樣品的前處理要求較低，且能夠確保樣品在極短的時間內(nèi)獲得檢測結(jié)果，所以適用于一些需要快速檢測的樣品，且容易在食品檢測和生產(chǎn)企業(yè)進(jìn)行推廣。但是，該檢測方法也存在著檢測準(zhǔn)確性不高且藥品回收率低等缺點(diǎn)，所以還需要后期的進(jìn)一步優(yōu)化。

4 結(jié)語

我國政府和民眾對于食品安全的重視程度逐年提高，政府監(jiān)管機(jī)構(gòu)以及企業(yè)自身對于食品內(nèi)有機(jī)磷農(nóng)藥殘留物的檢測也對后期政策執(zhí)行和生產(chǎn)起著指導(dǎo)性的作用。因此，建立健全有機(jī)磷農(nóng)藥檢測機(jī)制，規(guī)范有機(jī)磷農(nóng)藥的使用和食品安全，對我國食品安全具有積極的影響和意義。

[1]王福璇.食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢測的前處理方法[J].農(nóng)技服務(wù),2017，34（7）：153-154.

[2]杜衛(wèi)俠.食品中常見有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的檢測方法[J].食品安全導(dǎo)，2016（6）：59.

[3]池浩超.淺析食品中有機(jī)磷農(nóng)藥檢測方法[J].生物技術(shù)世界，2014（12）：4.