食品金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)質(zhì)量控制研究

◎ 張麗娜

（四川省雅安市食品藥品檢驗(yàn)所，四川 雅安 625000）

金黃色葡萄球菌，也稱(chēng)“金葡菌”，是人類(lèi)感染疾病的主要致病菌，所以國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各類(lèi)食品金黃色葡萄球菌的控制有明確說(shuō)明。作為食品微生物檢驗(yàn)人員，提高金黃色葡萄球菌的檢測(cè)能力，抓住質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)至關(guān)重要。

1 材料與設(shè)備

實(shí)驗(yàn)對(duì)象：雅安市29個(gè)品種預(yù)包裝食品樣品。

菌株：金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26003]，購(gòu)自上海魯微科技有限公司。

培養(yǎng)基及材料：Baird-Parker瓊脂平板（批號(hào)：3106026）、BairdParker瓊脂成品平板（批號(hào)：G0161Y）、腦心浸出物肉湯（BHI）（批號(hào)：3106063）、血平板、凍干血漿均購(gòu)自廣東環(huán)凱微生物科技有限公司。

儀器設(shè)備：VITEK 2 COMPACT（全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)）儀，梅里埃診斷產(chǎn)品（上海）有限公司；BSC-1500IIA2-X型生物安全柜，濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司；SPX-150型生化培養(yǎng)箱，上海迅博實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠(chǎng)；BKQP系列壓力蒸汽滅菌器，臨龍江壓力容器制造有限公司；HBM-400B型無(wú)菌均質(zhì)器，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司；BK-FL熒光顯微鏡，重慶奧特光學(xué)儀器有限責(zé)任公司。

2 操作方法

2.1 樣品的稀釋及培養(yǎng)

嚴(yán)格按照GB 4789.10-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 金黃色葡萄球菌定量檢驗(yàn)》平板計(jì)數(shù)法操作。

2.2 初步鑒定

染色鏡檢：挑取Baird-Parker平板上可疑單個(gè)菌落進(jìn)行革蘭氏染色，鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭陽(yáng)性球菌，無(wú)芽孢排列呈不規(guī)則的葡萄狀，亦可呈單個(gè)、成雙或短鏈狀排列。

血漿凝固酶試驗(yàn)：嚴(yán)格按照GB 4789.10-2016中5.5.2操作，同時(shí)做陰性和陽(yáng)性對(duì)照。

血平板：同時(shí)劃線(xiàn)接種到血平板（36±1）℃培養(yǎng)18～24 h后觀(guān)察菌落形態(tài)，金黃色葡萄球菌菌落較大，圓形、光滑凸起、濕潤(rùn)、金黃色（有時(shí)為白色），菌落周?chē)梢?jiàn)完全透明溶血圈。

2.3 鑒定復(fù)核

所有可疑的革蘭氏陽(yáng)性菌，都選取新鮮的培養(yǎng)物制備菌懸液上VITEK 2 COMPACT全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)鑒定。

3 結(jié)果

29個(gè)品種在Baird-Parker平板上有可疑菌落4個(gè)，革蘭氏陽(yáng)性球菌2種，血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性0份，同時(shí)在血平板上無(wú)菌落生長(zhǎng)，結(jié)果顯示這29個(gè)品種的預(yù)包裝食品全部符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

4 討論

4.1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的質(zhì)量控制

（1）臨用現(xiàn)制的Baird-Parker平板在制備時(shí)溫度不宜超過(guò)45 ℃，以防冷凝水過(guò)多，平板制備好后可以在生物安全柜里將蓋子斜靠在邊上，等冷凝水揮，發(fā)也可提前制備好后置于36 ℃培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)1 d，這樣既可以除去多余的水分，又可以做到無(wú)菌培養(yǎng)。

（2）稀釋液應(yīng)滅菌后再分裝，以免先分裝再滅菌帶來(lái)的體積誤差。

（3）進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，要準(zhǔn)確吸取毫升量，稀釋菌液要充分混合，第一步溶解菌球和奶粉產(chǎn)品時(shí)先可以采用拍擊均質(zhì)器混勻，后續(xù)梯度稀釋可以用渦旋儀進(jìn)行混勻[1]。另外，如果是冷藏后的檢品，樣品檢驗(yàn)時(shí)，應(yīng)等待樣品達(dá)到室溫后再添加稀釋液，因?yàn)闇囟妊杆偕仙龝?huì)導(dǎo)致細(xì)胞破裂，影響檢測(cè)結(jié)果。

（4）Baird-Parker平板涂布時(shí)，L涂布棒應(yīng)均勻涂布整個(gè)平板，注意不要觸及平板邊緣，避免涂到平板邊緣造成菌落蔓延生長(zhǎng)，并造成最后的計(jì)數(shù)偏低的情況。另外，經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，建議在計(jì)數(shù)時(shí)采用Baird-Parker成品培養(yǎng)基，因?yàn)槌善放囵B(yǎng)基更平整、光滑、干燥，更有利于稀釋液的吸收。

（5）觀(guān)察時(shí)間需要逐步進(jìn)行，避免雜菌或菌落蔓延造成計(jì)數(shù)的偏差。因?yàn)槿绻麡悠分写嬖谧冃螚U菌污染，到48 h觀(guān)察結(jié)果時(shí)，金黃色葡萄球菌的菌落被變形桿菌的擴(kuò)散生長(zhǎng)而覆蓋，所以，培養(yǎng)到24 h時(shí)先觀(guān)察一次并計(jì)數(shù)，36 h觀(guān)察，直至48 h再觀(guān)察計(jì)數(shù)。

（6）在鑒定復(fù)核時(shí)，選取新鮮的培養(yǎng)物制備適宜濃度的菌懸液后再上VITEK 2 COMPACT（全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)）儀器進(jìn)行鑒定試驗(yàn)。

4.2 標(biāo)準(zhǔn)菌株的質(zhì)量控制

標(biāo)準(zhǔn)菌株在評(píng)價(jià)檢驗(yàn)結(jié)果的可靠性及檢驗(yàn)過(guò)程的質(zhì)量控制中發(fā)揮著不可替代的作用[2]。金黃色葡萄球菌的血漿凝固酶試驗(yàn)原理為病原性葡萄球菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，使血漿中纖維蛋白原變?yōu)椴蝗苄岳w維蛋白，附于細(xì)菌表面，生成凝塊[3]。所以，在做樣的同時(shí)帶著以陽(yáng)性（金黃色葡萄球菌）和陰性（表皮葡萄球菌）菌株的肉湯培養(yǎng)物對(duì)照試驗(yàn)更能清楚地判定陰陽(yáng)性。

4.3 培養(yǎng)基及試劑的質(zhì)量控制

培養(yǎng)基是微生物試驗(yàn)的基礎(chǔ)，直接影響微生物試驗(yàn)結(jié)果，使用前必須進(jìn)行培養(yǎng)基適應(yīng)性試驗(yàn)，待其選擇性、生長(zhǎng)性和特異性等質(zhì)控指標(biāo)達(dá)標(biāo)后方可用于檢驗(yàn)。另外，關(guān)鍵試劑也是影響檢驗(yàn)結(jié)果的一個(gè)重要因素。關(guān)鍵試劑包括革蘭氏染色液、凍干血漿和凝固酶血漿試劑等。凝固酶血漿試劑應(yīng)每次與表皮葡萄球菌和金黃色葡萄球菌做陰陽(yáng)對(duì)照[4]，此外還應(yīng)注意所用試劑和成品培養(yǎng)基在貯存時(shí)的避光、冷藏等要求，保證試劑和培養(yǎng)基的穩(wěn)定性。

4.4 人為因素的質(zhì)量控制

檢測(cè)人員作為食品微生物檢驗(yàn)工作的主體，在食品微生物檢驗(yàn)質(zhì)量控制工作中起著重要的作用。因此，檢測(cè)人員應(yīng)有較強(qiáng)的責(zé)任感和使命感，認(rèn)真把控實(shí)驗(yàn)中的每個(gè)環(huán)節(jié)，熟悉國(guó)家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定并嚴(yán)格遵照?qǐng)?zhí)行，更好地控制食品微生物的檢驗(yàn)質(zhì)量。

4.5 硬件設(shè)施的質(zhì)量控制

食品微生物檢測(cè)中，實(shí)驗(yàn)儀器是必備的硬件設(shè)備。因此，應(yīng)嚴(yán)格按照本單位制定的儀器操作規(guī)程及維護(hù)規(guī)程，在每次使用完詳細(xì)填寫(xiě)記錄，保證檢測(cè)結(jié)果的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和可溯源性。

5 結(jié)語(yǔ)

本文旨在總結(jié)金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)時(shí)的質(zhì)量控制關(guān)鍵點(diǎn)，并提出建議，從而提高檢驗(yàn)人員的檢測(cè)能力，提升實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)水平。

[1]陳學(xué)強(qiáng)，周 浩，劉 華，等.金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)人員比對(duì)和質(zhì)量控制[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2017，4（27）：1063-1064.

[2]楊豐旭.標(biāo)準(zhǔn)菌株在食品微生物檢驗(yàn)中的重要作用[J].食品安全導(dǎo)刊，2017（2）：96.

[3]石琳，李學(xué)興，梁偉，等.100份食品樣品中金黃色葡萄球菌的檢測(cè)情況[J].食品安全導(dǎo)刊，2017（1）：139-140.

[4]袁 平，馬群飛，楊毓環(huán)，等.金黃色葡萄球菌定量檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)結(jié)果分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，10（22）：2506-2507.