雞傳染性支氣管炎病毒分型與診斷防治的研究進展

余 娟 ，徐 敏 ，劉明成 ，歐長波 ，劉興友

（1.河南科技學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003；2.河南科技學(xué)院新科學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003；3.新鄉(xiāng)學(xué)院，河南 新鄉(xiāng) 453003）

雞傳染性支氣管炎 （infectious bronchitis，IB）是由冠狀病毒屬的傳染性支氣管炎病毒（infectious bronchitis virus，IBV）引起的一種急性、高度接觸性呼吸道傳染病，給養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。傳染性支氣管炎病毒是冠狀病毒的典型，由于其基因組大而易發(fā)生突變，產(chǎn)生許多抗原性及致病性的變異株，造成病毒臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，給該病的診斷及防治帶來了較大困難。以下主要從雞傳染性支氣管炎病毒分型、檢測技術(shù)及綜合防治方面的研究進展進行綜述。

1 雞傳染性支氣管炎病毒的分型

IBV毒株的分型對IB的防控、病原的探究及病毒的進化研究有重要意義。對此，國內(nèi)外學(xué)者展開了大量的研究，IBV的分型方法有很多種，以下就臨床分型、血清分型、分子生物學(xué)分型進行綜述。

1.1 臨床分型

IBV臨床分型主要是依據(jù)IBV感染雞群后，不同毒株導(dǎo)致靶器官的臨床癥狀來劃分的。1931年Schalk等[1]首次報道了呼吸道型IB，臨床表現(xiàn)主要以張口呼吸、咳嗽、氣管啰音等呼吸道癥狀為特征；1995年杜元釗等[2]從中國膠東地區(qū)發(fā)現(xiàn)1株IBV變異株主要侵害后備母雞的輸卵管，從而導(dǎo)致產(chǎn)蛋障礙綜合征；Wintefield等于1962年首次發(fā)現(xiàn)了腎型IBV，典型癥狀是腎腫大、蒼白、腎小管和輸尿管充滿尿酸鹽[1]。1986年Elhouadfi等在摩洛哥首次分離到嗜腸型IBV，該毒株臨床上易造成腸道損傷；1995年以來在我國江蘇、山東等地先后出現(xiàn)了一種以腺胃腫脹、潰瘍?yōu)樘卣鞯腎BV，臨床表現(xiàn)雞群生長緩慢、消瘦和腹瀉，主要病變?yōu)橄傥副跇O度增厚、腺胃腫脹、乳頭出血和潰瘍，并伴有膿性分泌物[3]；1991 年在英國發(fā)現(xiàn)了一種 IB 變異型（4/91或 793/B）毒株[4]，該毒株會引起深層肌肉壞死，導(dǎo)致蛋用種雞死亡率升高，剖檢表現(xiàn)為氣管炎癥、腎腫脹、胸肌蒼白，嚴(yán)重的出血、水腫等病變。學(xué)者們根據(jù)不同的臨床癥狀將IBV主要分為：呼吸道型、生殖障礙型、腎型、嗜腸型、腺胃型。

1.2 血清分型

血清分型是以IBV抗原性的差異為基礎(chǔ)，以IBV毒株及雞體獲得的特異性血清抗體之間的反應(yīng)進行分型，常規(guī)方法主要有病毒中和試驗（VNT）、血凝抑制試驗（HI）、ELISA、間接熒光抗體試驗（IFA）等。 Johmson 等[5]通過采用氣管環(huán)培養(yǎng)物，進行病毒中和試驗將IBV分為10個血清型。隨后Ignjatovic J[6]將從澳大利亞分離到的36株IBV野毒株與11個參考毒株分為20個不同的血清型。國內(nèi)學(xué)者對IBV的血清分型也開展了大量的試驗研究。江國托等[7]用雞胚氣管環(huán)培養(yǎng)物進行VNT試驗，將國內(nèi)的8株IBV野毒株主要分為2個血清型。劉興友等[8]以間接熒光抗體試驗（IFA）為基礎(chǔ)，將檢測結(jié)果是陽性的毒株再進行血清學(xué)試驗，鑒定出有3株與Holte株相關(guān)性較大，有6株與Gray株相關(guān)性大?？底粑牡萚9]通過系統(tǒng)交叉HI試驗將4株IBV地方分離株分為2個血清型。汪洋[10]將從黑龍江、北京、河南等地的17個IBV分離株、2個疫苗株和1個IBV強毒株一起進行S1基因的測序，并將S1基因差異較大的6個毒株進行VNT試驗分出3個血清型。由此可知，國內(nèi)外IBV毒株血清學(xué)分型復(fù)雜多樣。由于血清分型僅說明了IBV中和抗原位點的差異，不能反映IBV基因組的變異機制，隨著病毒的不斷突變，還將產(chǎn)生更多的血清型，使得血清學(xué)分型的方法在實際應(yīng)用中受到限制。

1.3 分子生物學(xué)分型

分子生物學(xué)分型采用分子生物學(xué)技術(shù)依據(jù)病毒基因組或某些基因片段的差異進行的基因分型。目前常用的分型技術(shù)有RT-PCR、寡核苷酸指紋圖譜分析、RFLP、序列測定等，RFLP與RT-PCR結(jié)合技術(shù)是最常用的以限制性內(nèi)切酶酶切位點為基礎(chǔ)的基因分型方法。江國托等[11]對來自我國華東、華南、華北、華中等不同地區(qū)的14株IBV分離株用HaeⅢ、XbaI等限制性內(nèi)切酶酶切，采用RFLP技術(shù)將我國IBV流行株劃分為6個基因型，存在4個變異基因型。尹燕博等[12]用RT-PCR/RFLP技術(shù)對4株IBV標(biāo)準(zhǔn)株和5株國內(nèi)地方分離株進行分析，根據(jù)3種限制性內(nèi)切酶的酶切圖譜將9株IBV毒株分為3個基因型。磨美蘭等[13]對3個IBV標(biāo)準(zhǔn)株和5個地方分離株的S1基因進行RT-PCR及RFLP分析研究，通過酶切圖譜分析得出5個基因型。這些研究表明，我國IBV流行株因地區(qū)的不同存在著差異，通過分子生物學(xué)分型可以分析國內(nèi)IBV流行株與標(biāo)準(zhǔn)株的免疫基因上的差異，為研究新型IB疫苗奠定了基礎(chǔ)。

2 雞傳染性支氣管炎病毒的檢測技術(shù)

2.1 血清學(xué)檢測技術(shù)

目前，實驗室用的常規(guī)檢測技術(shù)有血凝抑制（HI）試驗、瓊脂擴散試驗、免疫組化和免疫熒光試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗 （ELISA）等。1976年Alexander等建立了IB的血凝抑制試驗方法，建立了一種簡單、快速的IB血清學(xué)檢測技術(shù)。但血凝抑制試驗進行血清學(xué)分型沒有標(biāo)準(zhǔn)的抗血清，且具有較高的不穩(wěn)定性，因此在生產(chǎn)應(yīng)用中主要用來判定疫苗免疫效果。瓊脂擴散試驗用于IB的定性和定量檢測，操作簡單，但其敏感性差，穩(wěn)定性不好易導(dǎo)致結(jié)果多變。免疫組化和免疫熒光試驗檢測時間較長，對試驗設(shè)備要求較高，因其具有高特異性，能準(zhǔn)確定位，常應(yīng)用于研究工作。酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）操作簡單，特異性高和靈敏性好，結(jié)果容易判定，對試驗條件要求低，是目前最常用的血清學(xué)檢測技術(shù)，實踐中廣泛用于特異性抗原和抗體的檢測。

2.2 分子生物學(xué)檢測技術(shù)

IBV分子生物學(xué)檢測技術(shù)主要有RT-PCR、核酸探針、限制性酶切片段長度多態(tài)性（RFLP）、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增 （LAMP）等。但核酸探針技術(shù)和RFLP技術(shù)檢測步驟較繁瑣，成本高，提供的信息量有限，所以不能廣泛應(yīng)用。LAMP技術(shù)是2000年由日本學(xué)者公布的基因檢測技術(shù)，該檢測技術(shù)具有高特異性、操作簡單、對試驗設(shè)備要求低的特點，因此生產(chǎn)實踐中應(yīng)用前景較好。RT-PCR技術(shù)是目前應(yīng)用最為廣泛的分子生物學(xué)檢測技術(shù)，具有敏感性強、簡便、快速的優(yōu)點。王紅寧等對四川IBV地方分離株采用RT-PCR技術(shù)進行S1基因和N基因擴增，結(jié)果證明RT-PCR檢測技術(shù)具有敏感、特異、快速等優(yōu)點，可以廣泛用于不同來源及不同血清型IBV的檢測。謝芝勛[15]等采用RTPCR技術(shù)同時檢測了10個不同血清型的IBV毒株，也證明了RT-PCR技術(shù)的高特異性，且對不同毒株的IBV都具有廣泛的適用性，并具有重要的實用價值和實踐意義。

3 雞傳染性支氣管炎的綜合防治

采取科學(xué)飼養(yǎng)與衛(wèi)生防控和疫苗免疫相結(jié)合的綜合防治措施是目前預(yù)防雞傳染性支氣管炎的有效手段。

3.1 科學(xué)飼養(yǎng)與衛(wèi)生防控

由于雞傳染性支氣管炎是一種急性、高度接觸性傳染病，給集約化養(yǎng)雞場造成巨大損失的呼吸道傳染病。雞群感染該病后易帶毒且排毒期較長，因此，平時應(yīng)加強飼養(yǎng)管理，控制好雞舍內(nèi)的溫度、濕度、通風(fēng)等環(huán)境條件，調(diào)整好飼養(yǎng)密度，盡量減少雞群應(yīng)激；科學(xué)配制飼料，合理補給微量元素和維生素；做好飼養(yǎng)期內(nèi)雞場消毒和帶雞消毒工作。

3.2 疫苗免疫

在生產(chǎn)實踐中最有效的控制IB的措施仍是疫苗免疫。目前常用的IBV疫苗主要是弱毒活疫苗和滅活疫苗，弱毒活疫苗能夠刺激機體的免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生較好的免疫保護，具有使用方便、成本低的優(yōu)點。其中，H120、H52疫苗株主要針對呼吸道型支氣管炎的預(yù)防，對某些腎型IB也有一定的交叉保護，對大多數(shù)血清型的IBV毒株都有較高的免疫效價[16]，是國內(nèi)使用廣泛的2個疫苗株。Ma5疫苗株用于1日齡以上雛雞和蛋雞的免疫[17]。M41株在生產(chǎn)實踐中主要用于二次免疫[18]。但是，活疫苗易引起雞嚴(yán)重的上呼吸道炎癥，具有潛伏感染性，對疫苗的免疫保護效價有較大的影響，因此活毒疫苗不能徹底控制IB。1999年王紅寧等[19]對我國的IB進行了流行病學(xué)調(diào)查研究，發(fā)現(xiàn)國內(nèi)IBV毒株 19.7%為Mass型、9.3%為 Gray型、3.9%為Hotle型、21.1%為T型，還有43.4%的變異株，并提出用不同血清型毒株多價滅活疫苗預(yù)防IB更科學(xué)，率先研制出的多價油乳劑滅活苗，免疫后對雞無副作用，并且進行2次以上的加強免疫，可以有效地預(yù)防IB。

4 小結(jié)

雞傳染性氣管炎是養(yǎng)雞場經(jīng)常暴發(fā)的疾病，給養(yǎng)殖業(yè)造成較大的危害。近年來隨著IBV的變異，國內(nèi)IBV的分型也越來越多。目前比較有效的預(yù)防方法，還是采取綜合防治措施，加強飼養(yǎng)管理，做好空舍期和飼養(yǎng)期雞舍的消毒工作，合理控制溫度、濕度、通風(fēng)等環(huán)境條件，減少雞群應(yīng)激的危害。針對IBV病毒的變異，要根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍胁∏闆r，參考實驗室診斷，選擇符合當(dāng)?shù)氐囊呙缰赀M行免疫接種，科學(xué)地制定符合本地流行病特點的免疫程序。