H5+H7禽流感疫苗免疫抗體檢測試驗(yàn)報(bào)告

邢清潔，景建江，楊雪珍，郝建敏

（1.內(nèi)丘縣動物疫病預(yù)防控制中心，河北內(nèi)丘054200；2.邢臺縣動物疫病預(yù)防控制中心，河北邢臺054001）

2017年秋防集中免疫，內(nèi)丘縣180余萬只雞全部使用了禽流感H5N1Re8株+H7N9 H7 Re1株滅活疫苗 （以下簡稱H5+H7）免疫，免疫注射結(jié)束后，為科學(xué)評估H5+H7疫苗臨床使用的安全性和免疫效果，我們對其中的80個(gè)養(yǎng)雞場共計(jì)3.68萬只雞按每戶20只雞抽檢1600份進(jìn)行了跟蹤調(diào)查及抗體檢測化驗(yàn)。結(jié)果表明，首次免疫注射30天后H7抗體可以達(dá)到6以上，加強(qiáng)免疫后的H5N1Re8抗體達(dá)到8以上，臨床使用安全，現(xiàn)將檢測結(jié)果報(bào)告如下：

1　試驗(yàn)雞群選擇

隨機(jī)選擇注射過H5+H7疫苗的80個(gè)3000只以上存欄雞場，為了解疫苗對產(chǎn)蛋雞生產(chǎn)性能的影響，年齡選擇均為120～400日齡的產(chǎn)蛋雞群。要求雞群健康無發(fā)病史，雞群按常規(guī)免疫程序免疫，在本次免疫之前未使用過含有H7N9流感的疫苗，且本次使用H7N9疫苗免疫后滿30天左右雞，每場采血20份，每羽采血量1ml，分離血清后冷凍保存?zhèn)錂z。

2　疫苗及監(jiān)測試劑

內(nèi)丘縣疫苗使用的為國家統(tǒng)一招標(biāo)采購的H5+H7疫苗，生產(chǎn)廠家包括哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司、青島易邦生物工程有限公司及廣東永順生物制藥股份有限公司三個(gè)廠家，注射劑量為每羽0.5ml，注射部位為胸部或大腿外側(cè)。采樣單設(shè)計(jì)包括雞日齡、注苗時(shí)間、注苗量、不良反應(yīng)描述、曾經(jīng)使用過的禽流感疫苗等幾項(xiàng)關(guān)鍵數(shù)據(jù)。檢測用試劑為哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)公司生產(chǎn)，禽流感病毒H5亞型Re8株病毒血凝抑制試驗(yàn)抗原，批號為2016005；禽流感病毒H7亞型病毒血凝抑制試驗(yàn)抗原，批號為2017004。

3　監(jiān)測方法及結(jié)果

血凝抑制試驗(yàn)使用96孔V型135度微量反應(yīng)板進(jìn)行，檢測方法按 《高致病禽流感診斷技術(shù)》國家標(biāo)準(zhǔn) （GB／T18936-2003）方法進(jìn)行檢測。為保證結(jié)果的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)中設(shè)陽性對照、陰性對照，并對配制的4單位病毒均進(jìn)行回歸試驗(yàn)。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)（按log2表述，如4則代表為4 log2）。檢測項(xiàng)目為H5N1-Re8抗體及對應(yīng)血清的H7抗體。

經(jīng)對1600份血清化驗(yàn)，其中H5N1-Re8血清血凝抑制抗體均達(dá)到8以上，H7血清血凝抑制抗體平均達(dá)到6以上。

以上80個(gè)養(yǎng)雞場經(jīng)實(shí)地調(diào)查注射疫苗后一周內(nèi)產(chǎn)蛋率下降均不超過5%，一周后即恢復(fù)正常。

4　結(jié)果分析

4.1通過以上實(shí)驗(yàn)證明，H5+H7疫苗田間使用免疫應(yīng)答性顯著，臨床使用安全。按要求抗體水平達(dá)到4以上即可抵抗高致病禽流感的侵襲，首次免疫H7抗體即可達(dá)到6以上說明H7N9流感疫苗免疫效果可靠。

4.2本試驗(yàn)對H5N1使用檢測試劑抗原為H5N1-Re8株，與使用的H5+H7疫苗中H5N1-Re8株對應(yīng)。 H5N1-Re8抗體水平都在8以上（本次試驗(yàn)為提高效率實(shí)驗(yàn)只做到8，實(shí)際抗體效價(jià)可能更高）。盡管抗體效價(jià)較高，但不能反應(yīng)是本次疫苗注射的效果，因?yàn)槭褂肏5+H7疫苗前這些養(yǎng)雞戶執(zhí)行的是本次秋防前的免疫程序，按程序均使用過2次以上的禽流感H5N1-Re6.7.8株疫苗。檢測數(shù)據(jù)反映出的是H5N1-Re8加強(qiáng)免疫后抗體水平。分析H5+H7疫苗免疫后H5N1-Re8的抗體效價(jià)還有待于雞群完全使用單一的H5+H7疫苗后抽血檢測方可。

4.3為提高結(jié)果的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)中對4單位病毒配比比例準(zhǔn)確性至關(guān)重要，每次試驗(yàn)一定要對配好的4單位病毒進(jìn)行凝集性回歸試驗(yàn)。

4.4檢測中發(fā)現(xiàn)個(gè)別雞場H7抗體效價(jià)有比平均值偏高1～2個(gè)滴度的情況，調(diào)查顯示這些戶注射疫苗量都超過0.5ml，說明疫苗注射量明顯影響抗體效價(jià)。因此，為了提高保護(hù)率，有必要首免后30天內(nèi)再進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫。