靈芝孢子油抗腫瘤活性機(jī)制研究進(jìn)展

郭原，周亞杰，馮鵬，馮敏

（南京中科藥業(yè)有限公司，江蘇 南京 210008）

0 引言

靈芝，是中醫(yī)藥的瑰寶。不管是古代醫(yī)藥典范之作還是現(xiàn)代的藥理臨床均證明：靈芝具有延年益壽、防病治病之功效。東漢時期的《神農(nóng)本草經(jīng)》、明代著名醫(yī)藥學(xué)家李時珍的《本草綱目》都對靈芝的功效有詳細(xì)且極為肯定的記載?，F(xiàn)代藥理學(xué)與臨床實(shí)踐進(jìn)一步證實(shí)了靈芝的藥理作用。

靈芝孢子是靈芝在生長成熟時期從菌蓋彈射出來的極為細(xì)小的顆粒，是靈芝的生殖細(xì)胞。靈芝孢子油是通過超臨界二氧化碳流體萃取技術(shù)從破壁的靈芝孢子中提取的油狀脂質(zhì)物，集成了靈芝孢子的多種活性成分。世界靈芝研究專家發(fā)表了越來越多的論文，證明三萜類化合物是靈芝孢子粉的主要藥理成分，是靈芝孢子發(fā)揮抗炎、鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗衰老、毒殺腫瘤細(xì)胞、抗缺氧等作用的主要功效成分。本文對近5年來靈芝孢子油在抗腫瘤機(jī)理方面的研究狀況作一分析，以期為下一步靈芝孢子油的研究提供線索。

1 抗腫瘤活性及機(jī)制

靈芝三萜類化合物是從靈芝中分離到的一種具有藥理活性的主要苦味成分，多數(shù)為高度氧化的羊毛甾烷衍生物，依據(jù)其結(jié)構(gòu)和官能團(tuán)的不同，又可分為靈芝酸，靈芝孢子酸等10多種由于化學(xué)結(jié)構(gòu)的多樣性，使三萜類化合物有較廣泛的藥理活性，靈芝孢子油中的靈芝三萜對多種腫瘤細(xì)胞的生長和轉(zhuǎn)移都有抑制作用。

1.1 口腔粘膜癌抗癌機(jī)理

蔡研等[1]通過建立金黃地鼠頰囊動態(tài)癌變模型，對所取標(biāo)本進(jìn)行病理檢驗(yàn)，并采用免疫組化技術(shù)檢測bcl-2和survivin在兩組動物模型中的表達(dá)變化，結(jié)果表明服用靈芝三萜后，在DMBA誘導(dǎo)下產(chǎn)生的細(xì)胞凋亡抑制基因表達(dá)含量增高的趨勢有所降低，小鼠頰囊癌變的發(fā)生率明顯降低，且惡性程度也有所降低。凋亡調(diào)節(jié)基因Bcl-2，survivin的下調(diào)說明靈芝三萜對金黃地鼠頰黏膜癌變的抑制作用可能與控制腫瘤細(xì)胞的生長有關(guān)。

1.2 乳腺癌抗癌機(jī)理

焦春偉[2]等探討靈芝孢子油對人惡性乳腺癌細(xì)胞MT-1凋亡的影響，結(jié)果表明：靈芝孢子油對MT-1細(xì)胞有明顯的抑制作用，且呈濃度依賴，并能增加caspase-3酶的活性。

宋玉仙[3]等通過觀察靈芝孢子油對人乳腺癌MCF-7細(xì)胞增值、遷移及凋亡的影響，發(fā)現(xiàn)不同濃度的靈芝孢子油對MCF-7的增殖和遷移均有一定程度的抑制作用，且呈時間、劑量依賴性；靈芝孢子油能顯著誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞凋亡；RT-PCR結(jié)果顯示，靈芝孢子油能上調(diào)Bax同時下調(diào)Bcl-2和VEGF的mRNA表達(dá)水平。

張京[4]等通過不同劑量的靈芝孢子油分別刺激體外培養(yǎng)的人源高惡性乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231細(xì)胞及MDA-MB-231細(xì)胞制作的荷廇小鼠，結(jié)果表明靈芝孢子油可在體內(nèi)和體外抑制人源高惡性乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的EGFR蛋白表達(dá)，且有劑量依賴性；均可在體內(nèi)和體外抑制VEGF RNA表達(dá)，增強(qiáng)血管生成抑制因子TSP-1RNA表達(dá)。

1.3 肺腺癌抗癌機(jī)理

呂明明[5]等通過CCK-8法檢測靈芝孢子油對A549細(xì)胞得體外抗腫瘤作用，結(jié)果表明靈芝孢子油顯著促進(jìn)原代腫瘤細(xì)胞凋亡，對原代腫瘤細(xì)胞中凋亡相關(guān)蛋白baxmRNA有明顯上調(diào)作用，對bcl-2 mRNA有明顯下調(diào)作用。

王亞平[6]等通過觀察靈芝孢子油對人肺腺癌細(xì)胞LTEP-a2增值、凋亡與miR-16及其靶基因表達(dá)得影響，發(fā)現(xiàn)靈芝孢子油呈劑量、時間性地抑制人肺腺癌LTEP-a2細(xì)胞的增殖，同時細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化。Annexin-V/PI雙染檢測提示，靈芝孢子油在低濃度下就可促進(jìn)細(xì)胞凋亡；靈芝孢子油可顯著上調(diào)LTEP-a2細(xì)胞中miR-16的表達(dá)并相應(yīng)下調(diào)bcl2和VEGF基因的表達(dá)。

唐文[7]等研究發(fā)現(xiàn)靈芝孢子油中得靈芝酸GA-T可以抑制人類實(shí)體瘤無胸腺的小鼠體內(nèi)的生長。結(jié)果表明靈芝孢子油明顯抑制高轉(zhuǎn)移性肺癌細(xì)胞系（95-d）得增殖，同時誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡并且阻滯細(xì)胞周期在G1期。此外，降低線粒體膜電位（Δψm）和細(xì)胞色素c的釋放也是誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡得關(guān)鍵因素。數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明，蛋白質(zhì)p53和Bax基因隨著時間得延長在95-d細(xì)胞的表達(dá)增多，而bcl-2的表達(dá)沒有明顯改變；因此bcl-2/Bax表達(dá)的比例下降.

1.4 肝癌抗癌機(jī)理

孫琳[8]等探討了靈芝孢子油對人肝癌細(xì)胞株HepG2的影響及其機(jī)制，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，靈芝孢子油對體外培養(yǎng)的肝癌HepG2細(xì)胞有抑制增殖作用，且具有劑量、時間相關(guān)性；靈芝孢子油能降低HepG2細(xì)胞遷移速度；HepG2細(xì)胞凋亡率隨靈芝孢子油濃度增加而增加；VEGF、Bcl-2和BaxmRNA表達(dá)下調(diào)，p53的mRNA無顯著變化；靈芝孢子油也能改變Toll樣受體mRNA的表達(dá)情況；靈芝孢子油處理后，HepG2細(xì)胞骨架改變，偽足減少，并且出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)。

金玲[9]等研究了靈芝孢子油軟膠囊抗肝癌作用及對肝癌小鼠免疫功能的影響，高、中劑量靈芝孢子油均可顯著提高荷瘤小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞吞噬功能及特異性細(xì)胞免疫功能、可顯著提高荷瘤小鼠的血清溶血素水平、能顯著提高荷瘤小鼠血清生物調(diào)節(jié)因子IFN-γ和TNF-α水平（P＜0.05）。

張國清[10]等研究了靈芝孢子油與環(huán)磷酰胺合用對肝癌實(shí)體瘤(HepS)的增效減毒作用及免疫功能的機(jī)制，靈芝孢子油與CTX合用對肝癌實(shí)體瘤鼠瘤重明顯減小，抑瘤率為45.0%，胸腺系數(shù)未見明顯變化；血液中的WBC明顯升高，T淋巴細(xì)胞酯酶染色率明顯增加；吞噬指數(shù)K和吞噬系數(shù)a明顯增高；具有增強(qiáng)炭粒吞噬廓清能力和促進(jìn)DTH反應(yīng)的作用。 CTX與靈芝孢子油合用可提高靈芝孢子油的抑瘤作用，同時可減輕CTX的不良反應(yīng)，改善和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。

1.5 前列腺癌抗癌機(jī)理

張?jiān)ッ鱗11]研究靈芝孢子油對雙氰睪酮誘導(dǎo)的前列腺癌LNCaP增殖、雄激素受體AR的激活和轉(zhuǎn)錄活性及相關(guān)激酶的影響，結(jié)果表明靈芝孢子油明顯降低DHT刺激的LNCaP細(xì)胞的增殖活性，同時靈芝孢子油降低了DHT誘導(dǎo)的前列腺癌LNCaP細(xì)胞中AR和蛋白激酶D的磷酸化活性，而對其本底蛋白的表達(dá)水平無影響。熒光素酶報(bào)告基因活性檢測進(jìn)一步表明靈芝孢子油明顯抑制DHT誘導(dǎo)的LNCaP細(xì)胞中AR的轉(zhuǎn)錄激活活性。

1.6 卵巢癌抗癌機(jī)理

梁慧超[12]研究了靈芝孢子油在卵巢癌治療過程中增強(qiáng)化療藥物療效，減低藥物不良反應(yīng)的機(jī)制。結(jié)果表明靈芝三萜高劑量、中劑量、低劑量組與空白對照組比較，ABCB1的表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示靈芝三萜可以影響人卵巢上皮癌細(xì)胞ABCB1基因和蛋白水平的表達(dá)。同時提示靈芝三萜可能通過影響人卵巢上皮癌細(xì)胞ABCB1的表達(dá)，增強(qiáng)順鉑對人卵巢上皮癌細(xì)胞的殺傷力。

2 增強(qiáng)免疫力

蔣兆健[13]等觀察了靈芝孢子油注射液的免疫增強(qiáng)作用，研究表明靈芝孢子油注射液可顯著提高正常小鼠和H22荷瘤小鼠的廓清指數(shù)K、吞噬系數(shù)α和脾臟系數(shù)；靈芝孢子油注射液可顯著提高正常小鼠和H22荷瘤小鼠由2，4-二硝基氟苯（DNFB）引起的遲發(fā)性過敏反應(yīng)，說明靈芝孢子油注射液具有顯著的免疫增強(qiáng)作用，可提高血清IFN-γ水平。

陳鐵暉[14]等探索了靈芝孢子油膠囊對機(jī)體免疫功能的影響，研究表明中高劑量組的靈芝孢子油能促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)小鼠自然殺傷細(xì)胞的活性，同時能促進(jìn)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)和小鼠抗體生成細(xì)胞增殖，提高小鼠血清溶血素水平，增強(qiáng)小鼠碳廓清能力。

袁誠[15]等以H22荷瘤小鼠為研究對象，研究了靈芝孢子油口服乳得免疫增強(qiáng)作用，結(jié)果顯示靈芝孢子油口服乳具有顯著的增強(qiáng)免疫作用，可提高H22荷瘤小鼠的生物調(diào)節(jié)因子IL-1、TNF-α、INF-γ的水平。

3 結(jié)論

孫青[16]等探討靈芝孢子油對老齡小鼠的免疫保護(hù)作用，結(jié)果顯示靈芝孢子油中高劑量對小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力、抗體生成細(xì)胞數(shù)、抗體體積、單核-巨噬細(xì)胞碳廓清能力等都有明顯的增強(qiáng)作用。