新疆紅芪多糖的含量測定及抗氧化活性研究

阿依夏古麗·巴卡斯， 白 杰， 海仁古麗·麥麥提， 海力茜·陶爾大洪

(新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院， 烏魯木齊 830011)

新疆紅芪(Hedysarumaustrosibiricumb.Fedtsch)為豆科(Leguminose) 植物巖黃芪 (HedysarumLinn.)的根，主要含有多糖類、黃酮類、苯丙素類等化學(xué)成分[1-3]，具有降血壓、調(diào)節(jié)血糖、補(bǔ)氣固表、利尿托毒、排膿生肌、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等作用[4-7]，臨床上用于治療糖尿病腎病以及肝硬化[8-10]。本研究采用采用紫外分光光度法測新疆紅芪多糖含量，通過3種抗氧化模型測定新疆紅芪多糖的抗氧化活性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器FW-100型高速萬能粉碎機(jī)(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司，藥篩(浙江上虛市五四儀器廠)，HWS-78型水浴鍋(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)，10L-5A 型離心機(jī)(上海菲恰爾分析儀器有限公司)，R1001-VN型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)，UV-2550 型紫外-可見分光光度儀(日本島津)。

1.2試劑乙醇(天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號20160512)，苯酚(天津市晨?；瘜W(xué)試劑公司，批號20140819)，1,1-二苯基-2-苦基肼/DPPH(南京都來生物技術(shù)有限公司，批號20130826)。

1.3藥材新疆紅芪(Hedysarumaustrosibiricumb.Fedtsch)2015年8月采自新疆阿勒泰，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院生藥教研室烏麗婭·沙塔爾教授鑒定為豆科植物(Leguminose)巖黃芪 (HedysarumLinn.)的根。

2 方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的配制量取5%葡萄糖溶液2 mL，置于100 mL容量瓶，加蒸餾水定容，得濃度為0.1 mg/mL的對照品溶液，備用。

2.2樣品的制備取新疆紅芪粉末，按提取工藝(藥液比為1∶30 g/mL，提取溫度為90℃，提取次數(shù)為1次，提取時(shí)間為3 h)提取，過濾提取液，濃縮，冷卻，加入80%乙醇低溫靜置24 h，以4 000 r/min離心15 min，收集紅芪粗多糖，干燥，備用。

2.3供試品溶液的制備稱取紅芪粗多糖0.101 3 g，用水定容至50 mL容量瓶，量取l mL，用水定容至10 mL容量瓶，備用。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備量取對照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL，加1.0 mL5%苯酚，再加5.0 mL濃硫酸，邊加邊搖，室溫放30 min，測定490 nm處吸光度，以濃度(Y)為縱坐標(biāo)，吸光度(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行回歸，得回歸方程為：Y=15.45X-0.057 8 ，r=0.996 9，多糖濃度在0.019 8～0.058 7 mg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

2.5方法學(xué)考察

2.5.1 精密度實(shí)驗(yàn) 分別量取“2.1” 項(xiàng)下對照品溶液0.4 mL，共6份，按“2.4”項(xiàng)下方法測定，吸光度分別為0.736、0.735、0.736、0.734、0.735，平均吸光度為0.734，RSD值為0.3%，表明方法精密度良好。

2.5.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 分別量取“2.3” 項(xiàng)下取供試品溶液2.0 mL，共6份，按“2.4”項(xiàng)下方法測定，吸光度分別為0.241、0.237、0.240、0.241、0.235、0.235，平均吸光度為0.238，RSD值為1.3%，表明方法重復(fù)性良好。

2.5.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 量取“2.3” 項(xiàng)下取供試品溶液2.0 mL，分別于1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h時(shí)測定吸光度，不同時(shí)間點(diǎn)的吸光度分別為0.241、0.239、0.232、0.240、0.234、0.230，平均吸光度為0.236，RSD值為1.0%，表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.6樣品的含量測定分別量取“2.3” 項(xiàng)下供試品溶液2.0 mL，共3份，按“2.4”項(xiàng)下方法測定，吸光度分別為0.372、0.367、0.363，平均吸光度為0.367，多糖含量為13.77%。

2.7抗氧化活性測定

2.7.1 DPPH自由基清除率測定 量取2 mL濃度為2×10-4mol/L的DPPH溶液共10份，再分別量取2 mL 50、30、15、5、0.5 mg/mL樣品溶液共5份，以相同濃度的VC為陽性對照，分別加入1 mL無水乙醇，搖勻，避光反應(yīng)30 min，測定517 nm處吸光度A517，DPPH自由基清除率%=A0-(Ai-Aj)/A0×100%，公式中：Ai為DPPH溶液+樣品溶液(或?qū)φ掌啡芤?+無水乙醇的吸光度,Aj為無水乙醇+樣品溶液(或?qū)φ掌啡芤?+無水乙醇的吸光度，A0為DPPH溶液+樣品溶劑+無水乙醇的吸光度。根據(jù)公式計(jì)算紅芪多糖的IC50為0.208 8 μg/mL，VC的IC50為2.394 0 μg/mL。

2.7.2 羥自由基清除率測定 量取2.0 mL濃度為2.0 mmol/L的FeSO4和2.0 mL 1 mmol/L的H2O2，分別加入具塞試管中，再加3 mL 6.0 mmol/L的水楊酸，搖勻，37℃水浴加熱10 min在490 nm 處分別測吸光度(A0)。將待測樣品中量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別加具賽試管中，分別依次加0.8，0.6，0.4，0.2，0.0 mL超純水，搖勻，同樣，水浴加熱測吸光度(Ax)，通過測定不同濃度的紅芪多糖，VC分別對羥自由基清除率，根據(jù)公式計(jì)算不同濃度下的待測溶液的清除率(·OH清除率%=A0-Ax/A0×100%)。根據(jù)公式計(jì)算紅芪多糖的IC50為0.104 4 μg/mL，VC的IC50為4.788 0 μg/mL。

2.7.3 銅離子還原能力的測定 量取不同濃度的樣品溶液各5 mL，加1.25 mL 濃度為0.01mol/L 的CuSO4和1.25 mL濃度為7.5 mmol/L的新亞銅，用0.2 mol/L的NH4Ac(pH=7.0)緩沖液定容至10 mL，搖勻，靜置30 min，測定450 nm處吸光度，[相對總還原百分率%=(A-A0)/(Amax-A0)×100%，公式中：A為樣品的A450nm值；A0為樣品濃度為0時(shí)的Amax值；Amax為在1次測量內(nèi)最大的吸光度值]。通過測定不同濃度的紅芪多糖，VC分別對羥自由基清除率，根據(jù)公式計(jì)算不同濃度下的待測溶液的清除率(·OH清除率%=A0-Ax/A0×100%)。根據(jù)公式計(jì)算紅芪多糖的IC50為0.069 6 μg/mL，VC的IC50為7.182 0 μg/mL。

3 討論

新疆紅芪中多糖的提取方法包括傳統(tǒng)的回流法、水提醇沉法和現(xiàn)代提取方法等，傳統(tǒng)的提取方法操作簡單、對設(shè)備要求低，提高了多糖收率。通過3個(gè)抗氧化活性實(shí)驗(yàn)證明新疆紅芪多糖具有較好的抗氧化活性。因此，新疆紅芪可以作為抗氧化藥物的原料，具有進(jìn)一步開發(fā)利用價(jià)值，可作為潛在天然抗氧化劑應(yīng)用于食品和醫(yī)藥工業(yè)中。