慢性萎縮性胃炎動物模型研究進展

劉?；?秦曉光 龍俊華 李 梅

（甘肅中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，甘肅 蘭州 730000）

慢性萎縮性胃炎（chronic atrophic gastritis，CAG）是指胃黏膜局限性或廣泛性的固有腺體萎縮、數(shù)量減少、黏膜層變厚為主要病理改變的一種慢性疾病[1]，臨床主要表現(xiàn)為胃脘痞滿、飽脹、反酸、噯氣等。最常見的病因主要為幽螺門桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染[2]，發(fā)病機制目前尚不清楚。在中醫(yī)學(xué)中，歷代醫(yī)家根據(jù)其臨床表現(xiàn)，將慢性萎縮性胃炎歸于“痞證”范疇。慢性萎縮性胃炎是消化系統(tǒng)最常見的疾病之一，世界衛(wèi)生組織將CAG定為胃癌癌前病變[3]。經(jīng)研究表明，慢性萎縮性胃炎的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，并且以老年人最為多見[4]。查閱近幾年相關(guān)文獻發(fā)現(xiàn)：慢性萎縮性胃炎動物模型復(fù)制方法較多，但存在造模周期長、可重復(fù)性差、耗時耗力等問題。本文對慢性萎縮性胃炎動物模型復(fù)制方法進行相應(yīng)的綜述，從而更好地總結(jié)出一種造模周期短、省時省力的造模方法，進而更好地提供實驗參考依據(jù)。

1 病證結(jié)合造模

1.1 脾虛型CAG模型 劉曉穎等[5]采用脫氧膽酸鈉和阿司匹林水溶液交替飲用加免疫損傷法，聯(lián)合耗氣破氣（川厚樸、枳實、大黃以3∶3∶2比例，100%煎劑隔日灌胃，3 mL/只）加饑飽失常法，同時隔日喂飼料，共4周。

1.2 肝郁型CAG模型 鄒世潔等[6]在CAG造模的基礎(chǔ)上，從第8周開始，加用鉗子夾大鼠尾部，使之保持激怒、爭斗狀態(tài)，每天30 min，同時每3周0.1%腎上腺素腹側(cè)皮下注射2次，0.1 mL/只，造模時間28～44周。 任建[7]通過干頂、刺激Wistar大鼠情志法，饑飽失常法等復(fù)制慢性胃炎肝郁型模型。實驗發(fā)現(xiàn)，慢性胃炎肝郁證組大鼠的黏膜皺璧變化明顯，有顯著的差異（P＜0.05）。

1.3 腎虛型CAG模型 陳小野等[8]對Wistar大鼠采用脫氧膽酸鈉和阿司匹林水溶液交替飲用加免疫損傷，在CAG造模的基礎(chǔ)上，從實驗第6周開始，加用甲基硫氧嘧啶（MTU），以0.08%濃度加入脫氧膽酸鈉溶液或阿斯匹林溶液中自飲，造模時間30～46周。

1.4 濕熱型CAG模型 徐珊等[9]采用MNNG配合酒精造模不變的基礎(chǔ)上，從實驗第7周開始，大鼠飼料換為高脂、高糖飼料喂養(yǎng)，同時每天將大鼠置入造模箱內(nèi)（恒溫干燥箱內(nèi)置超聲霧化器和濕溫度表），調(diào)節(jié)箱內(nèi)溫度（33±2） ℃，相對濕度 （95±3） %，每天1次2 h，共4周。

2 病因造模

慢性萎縮性胃炎的發(fā)病可能與幽螺門桿菌（Hp）感染、飲食習(xí)慣、免疫因素、膽汁或十二指腸液反流、體質(zhì)因素、遺傳因素等有關(guān)。

2.1 幽螺門桿菌（Hp）培養(yǎng)法 在60%～90%的慢性萎縮性胃炎患者的胃黏膜中可培養(yǎng)出幽門螺桿菌。大量研究證實，幽門螺桿菌是慢性胃炎的重要致病因素[10－11]。曾志榮[12]在建立幽門螺桿菌感染大鼠模型時，采用了含有cagA基因和vacA基因的Hp悉尼菌株（Sydney Strain 1，SS1），成功地建立了幽門螺桿菌長期感染大鼠模型。唐旭東[13]采用幽門螺桿菌感染大鼠及水楊酸鈉乙醇混合溶液灌胃的綜合方法，成功地建立幽門螺桿菌感染CAG大鼠模型。研究表明找到適合感染菌株，并在接種幽門螺桿菌前給予損傷胃黏膜及改變胃內(nèi)PH值等預(yù)處理措施增加模型病理變化程度是解決大鼠感染模型的關(guān)鍵。幽螺門桿菌作為慢性萎縮性胃炎的重要致病因素，雖然可成功造模，但病理性質(zhì)不穩(wěn)定且造模周期長[14]。

2.2 熱鹽水法 生活方式、飲食習(xí)慣與慢性萎縮性胃炎的發(fā)生具有不可分割的關(guān)系。張瀝等[15]通過臨床研究報道，長期過熱過鹽飲食可導(dǎo)致胃黏膜萎縮。陶梅等[16]對大鼠采用熱水（55℃蒸餾水，2.5 mL/只）灌胃法，32周后光鏡下大量上皮細胞脫落，細胞破損，局灶性糜爛，電鏡下腺體和腺體細胞萎縮，胞質(zhì)內(nèi)細胞器減少。慢性胃炎造模成功。陶梅等[17]對大鼠25℃15%鹽水連續(xù)灌胃24周，24周后大鼠胃黏膜光鏡結(jié)果顯示：胃黏膜腺體明顯縮小，黏膜肌層的平滑肌呈束狀增生插入黏膜固有層中。李艷等[18]用55℃15%氯化鈉灌胃，每日1次，2.5 mL/次，共12周。第12周末，模型組胃標(biāo)本病檢均符合慢性萎縮性胃炎表現(xiàn)，造模成功。過熱過咸飲食造成的慢性萎縮性胃炎符合我國人群本病的發(fā)病特點[19]，雖然是一種穩(wěn)定而便捷的大鼠慢性萎縮性胃炎模型復(fù)制方法，但是實驗室大多提供的是適宜大鼠日常飲用的自來水，由于實驗條件限制無法達到所需熱水溫度，并且造模周期較長。

3 聯(lián)合法造模

3.1 脫氧膽酸鈉為主 劉磊等[20]采用大鼠自由飲用脫氧膽酸鈉和低濃度無水乙醇，并配高濃度無水乙醇灌胃及饑飽失常（2天飽食，1天禁食），13周后造模成功。翦林宏等[21]使用脫氧膽酸鈉配合酒精造模，成功率高（100%）。馮秀雪[22]綜合酒精、水楊酸鈉、脫氧膽酸鈉和氨水，22周后成功建立CAG模型。脫氧膽酸鈉配合酒精的造模方法，必須注意配置脫氧膽酸鈉溶液時每天應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，但酒精對胃黏膜刺激性較大，并且造模周期長，大鼠易出現(xiàn)老化現(xiàn)象并且死亡率較高。

3.2 MNNG誘導(dǎo)劑 陸為民等[23]先用去離子水配成1 g/L的儲備液（每周配制1次），4℃冰箱避光保存，用前以自來水稀釋為50 μg/mL的溶液，裝入避光飲水瓶讓大鼠自由飲用，鹽酸雷尼替丁膠囊0.03 g/kg灌胃，配合饑飽失常（2天足量喂食，1天禁食）多因素綜合法造模，20周后通過相關(guān)病理結(jié)果觀察，確保造模成功。彭繼升等[24]以120 μg/mL的N-甲基-N-硝基-N-亞硝基基胍 （MNNG）溶液灌胃為基礎(chǔ)，配合自由飲用濃度為0.05%氨水溶液，進食含0.03%鹽酸雷尼替丁大鼠飼料，進行造模。32周后病理切片顯示慢性萎縮性胃炎黏膜表現(xiàn)，造模成功。朱萱萱等[25]以濃度為167 μg/mL的N-甲-N-硝基-亞硝基胍（MNNG）稀釋液給大鼠自由飲用，同時以0.017 mol/L濃度的MNNG l mL/只灌胃，共8周。結(jié)果大鼠胃黏膜形成潰瘍，在潰瘍底部見大量中性粒細胞浸潤，伴腺體上皮細胞輕度-中度ATP。

雖然目前多采用以MNNG誘導(dǎo)劑為主的綜合造模法，但普遍存在造模周期長、費用昂貴、造模劑量不統(tǒng)一、病理改變時間出現(xiàn)不同等問題[26]。若劑量過低易造成淺表性胃炎模型，過高則造成癌模型。目前對MNNG的劑量使用尚未形成統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。使用MNNG時應(yīng)注意：因MNNG試劑在光照下成分易發(fā)生分解，所以給大鼠飲用時，將配置好的溶液必須裝入避光的飲水瓶內(nèi)，每24 h更換1次，并記錄每天飲用量。查閱大量文獻，MNNG試劑使用時都是用蒸餾水配置，但實際操作時蒸餾水并不能完全溶解MNNG，而二甲基亞砜（DMSO）能將其完全溶解。

3.3 水楊酸鈉為主 張淑琴等[27]以200 mL/L水楊酸鈉溶液給大鼠灌胃，1次/日，2 mL/次，灌胃前后1 h禁食水。前3周自由進食水，后3周自由飲水，1日足量喂食，1日禁食；隔日在溫水中游泳10 min。6周后，CAG模型復(fù)制成功。邵學(xué)輝[28]以200 mL/L水楊酸鈉溶液和300 mL/L乙醇混合溶液給大鼠灌胃，1次/日，2.5 mL/次，灌胃前1h禁食水。配合前4周過度勞倦法和后4周隔日喂食不禁水法。8周后模型復(fù)制成功。以水楊酸鈉為主的造模方法，雖然造模周期短，但灌胃前后1 h需禁食水，操作不方便。

4 結(jié)論

關(guān)于慢性萎縮性胃炎動物模型的復(fù)制方法眾多，包括：病證結(jié)合造模法、幽螺門桿菌感染造模法、熱鹽水法、脫氧膽酸鈉配合酒精造模法、MNNG誘發(fā)大鼠CAG模型、水楊酸鈉為主造模法，但均存在造模周期長、不便于實際操作等問題。查閱文獻，目前多采用以MNNG誘導(dǎo)劑為主的綜合造模法，存在造模周期長、費用昂貴、造模劑量不統(tǒng)一等問題，缺乏統(tǒng)一的參考標(biāo)準(zhǔn)，故在以后的實驗研究中應(yīng)繼續(xù)努力研究出造模周期短、死亡率低、成功率高、省時省力，更成熟穩(wěn)定的造模方法。