老年潰瘍性結(jié)腸炎患者炎癥細(xì)胞因子、T淋巴細(xì)胞亞群和凝血功能變化

施煜燕 周建波

(余姚市人民醫(yī)院消化內(nèi)科，浙江 余姚 315400)

潰瘍性結(jié)腸炎是原因不明的一種慢性非特異性炎癥性腸病，其發(fā)病率呈不斷上升趨勢，嚴(yán)重影響生活質(zhì)量〔1〕。潰瘍性結(jié)腸炎具體發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，認(rèn)為主要與遺傳、免疫、環(huán)境及感染等多種因素相關(guān)〔2〕。研究顯示，炎癥因子、凝血功能和細(xì)胞免疫功能與潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)〔3～5〕。本研究探討老年潰瘍性結(jié)腸炎患者細(xì)胞炎癥因子、T淋巴細(xì)胞亞群和凝血功能的變化及意義。

1 資料與方法

1.1臨床資料 選擇余姚市人民醫(yī)院于2010年1月至2014年12月收治的老年潰瘍性結(jié)腸炎患者125例作為觀察組，依據(jù)《中國炎癥性腸病診斷治療規(guī)范的共識(shí)意見》〔6〕中相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合潰瘍性結(jié)腸炎診斷標(biāo)準(zhǔn)，且為活動(dòng)期；②年齡70～85歲；③自愿加入研究，簽訂知情同意書者。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并風(fēng)濕性疾病、感染、內(nèi)分泌疾??；②合并腫瘤者；③合并肺、腎、肝功能嚴(yán)重異常者；④精神疾病者。觀察組男78例、女47例，年齡70～85〔平均(76.83±4.15)〕歲，按照病情嚴(yán)重程度分為輕度39例、中度55例、重度31例。另選同期健康體檢老年人50例作為對照組，男31例、女19例，年齡70～85〔平均(77.12±4.36)〕歲。

1.2主要試劑和儀器 ①細(xì)胞炎癥因子試劑盒：人白細(xì)胞介素(IL)-6、人腫瘤壞死因子(TNF)-α、人C反應(yīng)蛋白(CRP)試劑盒，上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司；②外周T淋巴細(xì)胞：美國BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀配套試劑；③凝血功能指標(biāo)試劑盒：人纖維蛋白原(FIB)、人部分凝血活酶時(shí)間(APTT)，南京基蛋生物科技有限公司試劑盒。全自動(dòng)生化分析儀(日立7600型)，流式細(xì)胞儀(美國BD FACSCalibur)。

1.3細(xì)胞炎癥因子測定 所有研究對象于清晨空腹抽取外周靜脈血3 ml，以離心半徑15 cm，離心轉(zhuǎn)速3 000 r/min，離心時(shí)間10 min，分離血清，于24 h內(nèi)測定。采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清IL-6、TNF-α和CRP含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書標(biāo)準(zhǔn)測定。

1.4外周血T淋巴細(xì)胞測定 所有研究對象于清晨空腹抽取外靜脈血3 ml，置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，一次加入CD3+、CD4+、CD8+抗體10 μl，放置于室溫條件下避光孵育30 min，然后加入溶血素200 μl于每管中，于室溫條件下避光放置15 min，裂解紅細(xì)胞。觀察溶液澄清透明后，加入1 ml預(yù)冷磷酸鹽緩沖液(PBS)中，再放置于室溫條件下以15 cm為離心半徑、3 000 r/min為轉(zhuǎn)速、12 min為離心時(shí)間，分離血清，然后再滴加100 μl的1%多聚甲醛溶液中固定，測定外周血T淋巴細(xì)胞亞群，應(yīng)用美國BD公司的流式細(xì)胞儀及配套試劑。

1.5凝血功能指標(biāo)測定 所有研究對象于清晨空腹抽取外周靜脈血，加入0.2 ml枸櫞酸鈉抗凝管中，以離心半徑15 cm，離心轉(zhuǎn)速3 000 r/min，離心時(shí)間10 min，分離血漿，于24 h內(nèi)測定，采用全自動(dòng)生化分析儀測定FIB、APTT、PLT。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0軟件行χ2、t及F檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清細(xì)胞炎癥因子水平比較 觀察組血清IL-6、TNF-α和CRP水平明顯高于對照組(均P<0.05)。重度組血清IL-6、TNF-α和CRP水平明顯高于輕度組和中度組，且中度組明顯高于輕度組(均P<0.05)，見表1。

2.2兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較 觀察組CD3+、CD4+和CD4+/CD8+明顯低于對照組(P<0.05)。重度組CD3+、CD4+和CD4+/CD8+明顯低于輕度組和中度組，中度組CD3+、CD4+和CD4+/CD8+明顯低于輕度組(P<0.05)。見表2。

2.3兩組凝血功能指標(biāo)比較 觀察組FIB和PLT明顯高于對照組，APTT明顯低于對照組(均P<0.05)。不同嚴(yán)重程度潰瘍性結(jié)腸炎凝血功能指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。見表3。

表1 兩組血清細(xì)胞炎癥因子水平比較

與重度組比較：1)P<0.05；與中度組比較：2)P<0.05，下表同

表2 兩組外周血T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

表3 兩組凝血功能指標(biāo)比較

3 討 論

潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，認(rèn)為主要由多因素參與，本文主要從炎癥反應(yīng)、凝血功能及細(xì)胞免疫功能等方面探討〔9～11〕。IL-6是免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，在潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制及隨后的潰瘍性結(jié)腸炎相關(guān)結(jié)腸腫瘤形成中，主要通過STAT3信號(hào)通路發(fā)揮重要作用。有研究顯示，活動(dòng)期潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-6水平明顯高于非活動(dòng)性潰瘍性結(jié)腸炎，且隨著病情程度加重其水平明顯升高〔12〕。TNF-α是慢性非特異性炎癥性腸病病理進(jìn)程中的一種關(guān)鍵細(xì)胞因子，能夠通過啟動(dòng)細(xì)胞毒性、凋亡和急性期反應(yīng)及表達(dá)凝血因子和黏附分子等過程發(fā)揮重要作用。TNF-α血清水平與克羅恩病和潰瘍性結(jié)腸炎的臨床活動(dòng)相關(guān)，近年來抗TNF抗體廣泛應(yīng)用于慢性非特異性炎癥性腸病治療，且取得良好臨床效果及證實(shí)TNF-α在結(jié)腸炎癥致病中具有關(guān)鍵意義〔13〕。CRP主要是由活化巨噬細(xì)胞分泌的一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，是機(jī)體炎癥反應(yīng)的敏感指標(biāo)。在自身免疫性疾病、心血管疾病及機(jī)體防御反應(yīng)中扮演重要角色〔14〕。本潰瘍性結(jié)腸炎患者血清IL-6、TNF-α和CRP水平明顯升高，且隨著病情加重升高越明顯。

潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，而免疫因素特別是CD4+T淋巴細(xì)胞等細(xì)胞亞群所起的重要作用廣泛認(rèn)可〔15〕。CD8+T淋巴細(xì)胞作用不明顯或者低于CD4+T淋巴細(xì)胞，一般在臨床應(yīng)用檢測水平不易被檢測出。研究報(bào)道顯示，潰瘍性結(jié)腸炎細(xì)胞免疫功能存在明顯異?！?6〕。本研究表明，潰瘍性結(jié)腸炎患者CD3+、CD4+和CD4+/CD8+水平降低，且隨著病情加重降低越明顯。

潰瘍性結(jié)腸炎常處于一種高凝狀態(tài)，其表現(xiàn)主要為微循環(huán)障礙和微血栓形成，是造成潰瘍性結(jié)腸炎惡化的一個(gè)重要原因。由于腸黏膜微血栓形成，由于缺血壞死，甚者會(huì)致使腸黏膜潰瘍的形成，加重了潰瘍性結(jié)腸炎患者結(jié)直腸黏膜的病變〔17〕。研究顯示，潰瘍性結(jié)腸炎患者纖溶和凝血異常與疾病的活動(dòng)性相關(guān)，F(xiàn)IB、APTT和PLT成為炎癥活動(dòng)程度的預(yù)測指標(biāo)，但凝血功能指標(biāo)與疾病的嚴(yán)重程度無明顯相關(guān)性〔18〕。本研究表明，潰瘍性結(jié)腸炎患者凝血功能指標(biāo)存在明顯異常，但與疾病嚴(yán)重程度無明顯相關(guān)性。綜上所述，老年潰瘍性結(jié)腸炎患者存在炎癥反應(yīng)、高凝狀態(tài)及細(xì)胞免疫功能下降，且炎癥因子和外周血T淋巴細(xì)胞亞群可對疾病病情判斷有指導(dǎo)意義。

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