冠心病患者冠脈血流儲(chǔ)備分?jǐn)?shù)與循環(huán)微粒的關(guān)系

從國(guó)彬 張 濤 王恩漫 閆 哲 李向陽(yáng)

(商丘醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校，河南 商丘 476000)

經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入(PCI)可以迅速改善缺血冠狀動(dòng)脈的血液供應(yīng)，是有效治療冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病(CHD)急、慢性心肌組織缺血〔ST段抬高心肌梗死(STEMI)、非STTEMI(non-STEMI)與不穩(wěn)定型心絞痛(UA)〕的常用方法〔1〕。然而，PCI可以導(dǎo)致一系列血管并發(fā)癥，包括血管夾層、再狹窄，甚至死亡。所有這些都可能是由于術(shù)后內(nèi)皮功能障礙和血小板活化引起的〔2,3〕。因而，就患者是否需行PCI治療的靶控技術(shù)：冠脈血流儲(chǔ)備分?jǐn)?shù)(FFR)應(yīng)運(yùn)而生。但是，F(xiàn)FR把控是否與內(nèi)皮功能相關(guān)目前未見報(bào)道，本研究探討FFR與同樣反映內(nèi)皮功能的循環(huán)微粒(MPs)的關(guān)系及對(duì)內(nèi)皮功能的影響。

1 資料與方法

1.1研究對(duì)象 對(duì)照組選取來(lái)商丘市第一人民醫(yī)院健康體檢的30例志愿者,年齡35～65歲。實(shí)驗(yàn)組選取2016年6～12月就診于商丘市第一人民醫(yī)院心內(nèi)科行冠脈造影(CAG)提示中-重度(同時(shí)測(cè)量其FFR)的CHD患者50例，年齡38～62歲，同時(shí)排除患有糖尿病、高血壓、腎衰竭、嚴(yán)重感染性疾病等影響MPs含量疾病的患者。參與者均簽署知情同意書，且本研究已通過(guò)商丘市第一人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審核。兩組年齡、性別比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

1.2MPs提取及分析與FFR的關(guān)系 抽取參與者空腹靜脈血，按參考文獻(xiàn)〔4〕提取MPs：靜脈血進(jìn)行離心(4℃ 4 000 r/min，10 min)后提取上層血漿后再次離心(4℃ 11 000 r/min，2 min)，離心結(jié)束后取上層乏血小板血漿2 ml進(jìn)行最后一次離心(4℃ 13 000 r/min，45 min)。最后將MPs(白色顆粒)沉淀于離心管底部，用100 μl的RPMI1640培養(yǎng)基混懸，用聚氰基丙烯酸正丁酯(BCA)蛋白濃度測(cè)定試劑盒測(cè)定MPs濃度后備用。

表1 兩組一般臨床資料

與對(duì)照組比較：1)P<0.05

1.3離體大鼠血管的制備 SD大鼠購(gòu)買于第三軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，斬頭處死大鼠，開胸取大鼠胸主動(dòng)脈并置于預(yù)冷并通氣(95% O2與 5% CO2的混合氣)的Kreb平衡液(NaCl 119.0 mmol/L,NaHCO325.0 mmol/L，葡萄糖11.1 mmol/L,CaCl21.6 mmol/L,KCl 4.7 mmol/L,KH2PO41.2 mmol/L和MgSO41.2 mmol/L,pH7.4)內(nèi)，顯微鏡下仔細(xì)剔除動(dòng)脈周圍組織后備用。

1.4MPs對(duì)血管舒張功能的影響 將制備的大鼠胸主動(dòng)脈剪為3～4 mm的血管環(huán)并連接至含有Kreb平衡液(37℃，通氣)的BL-420E+生物機(jī)能試驗(yàn)系統(tǒng)上。血管平衡1.5 h后將等量的兩組MPs孵育血管環(huán)30 min，用苯腎上腺素(10-6mol/L)刺激血管收縮至平臺(tái)期，然后依次加入10-7～10-4mol/L 的乙酰膽堿促進(jìn)血管舒張，記錄血管舒張結(jié)果，比較兩組MPs對(duì)血管舒張功能影響的差異(實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白組檢測(cè)血管內(nèi)皮的完整性)。

1.5MPs對(duì)一氧化氮(NO)生成的影響 將制備好的大鼠胸主動(dòng)脈剖開并放入DMEM1640培養(yǎng)基中并放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)平衡1 h，加入等量的兩組MPs孵育0.5 h后取上清培養(yǎng)基用NO檢測(cè)試劑盒(南京建成生物科技有限公司)進(jìn)行檢測(cè)，稱量血管環(huán)干重用于計(jì)算NO含量(μmol/g 蛋白)。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS10.0 軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)和方差分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組一般臨床資料 兩組體質(zhì)指數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，實(shí)驗(yàn)組高密度脂蛋白較對(duì)照組明顯偏低(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)組總膽固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白含量較對(duì)照組明顯偏高(P<0.05)。見表1。

2.2兩組MPs水平比較 實(shí)驗(yàn)組MPs含量〔(4.63±1.52)mg/ml〕較對(duì)照組〔(2.61±0.64)mg/ml〕明顯升高(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組MPs含量與FFR呈負(fù)相關(guān)(P<0.000 1)。見圖1。

2.3兩組血管舒張功能、NO生成水平比較 與對(duì)照組(89.83%±11.74%)、空白組(90.83%±10.51%)比較，實(shí)驗(yàn)組最大血管舒張值〔FFR≥0.8組：69.67%±9.42%；FFR<0.8組：47.84%±10.33%〕顯著降低(P<0.05)，且FFR<0.8組最大血管舒張值較FFR≥0.8組明顯降低(P<0.05)。與空白組〔(2.23±0.61)μmol/g〕及對(duì)照組〔(2.46±0.73)μmol/g〕比較，實(shí)驗(yàn)組NO生成水平〔FFR≥0.8組：(1.46±0.47) μmol/g；FFR<0.8組：(0.77±0.23) μmol/g〕明顯減少(P<0.05)，且FFR<0.8組較FFR≥0.8組更低(P<0.05)。

圖1 實(shí)驗(yàn)組MPs與FFR相關(guān)性

3 討 論

本研究提示中-重度冠脈狹窄的CHD患者體內(nèi)的MPs含量與FFR呈負(fù)相關(guān)，且MPs抑制血管舒張功能和NO生成的能力與FFR呈負(fù)相關(guān)。CAG被認(rèn)為是CHD診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。CAG能夠發(fā)現(xiàn)冠脈的具體狹窄的部位、狹窄程度，然而，是否冠脈狹窄一定有心肌缺血及支架植入的指征，CAG的結(jié)果無(wú)法做出精確評(píng)估。FFR是在冠脈循環(huán)達(dá)到最大充血狀態(tài)時(shí)，通過(guò)測(cè)量冠狀動(dòng)脈病變遠(yuǎn)端的壓力與主動(dòng)脈根部壓力的比值反映心肌缺血情況，原則上FFR>0.8時(shí)狹窄冠脈無(wú)須支架干預(yù)。目前FFR可檢測(cè)左主干病變、多支病變、彌漫長(zhǎng)病變、分叉病變等。尤其是多支病變，F(xiàn)FR可識(shí)別心肌缺血相關(guān)靶病變，通過(guò)干預(yù)缺血相關(guān)靶病變，真正實(shí)現(xiàn)“功能學(xué)”血運(yùn)重建。

MPs在血液高凝狀態(tài)下、炎癥反應(yīng)及內(nèi)皮功能受損時(shí)含量升高，而升高的MPs又可以反過(guò)來(lái)刺激和加重高凝狀態(tài)、炎癥反應(yīng)和內(nèi)皮功能受損〔5，6〕。MPs可以抑制內(nèi)皮型NO合酶(eNOS)的表達(dá)，進(jìn)而抑制離體心臟血管的新生〔7，8〕。主動(dòng)脈瓣重度狹窄患者瓣膜口狹窄所形成的切應(yīng)力及血流動(dòng)力學(xué)改變會(huì)增加體內(nèi)MPs含量，MPs不僅僅可以因內(nèi)皮損傷而產(chǎn)生增加，而且升高的MPs可以進(jìn)一步加重心臟瓣膜損傷〔9，10〕。鑒于MPs與內(nèi)皮功能受損、炎癥反應(yīng)、高凝狀態(tài)的相互關(guān)系，尤其是中-重度冠脈狹窄(FFR<0.8)時(shí)，CHD患者冠脈內(nèi)皮功能異常、血液呈高凝狀態(tài)。本研究提示嚴(yán)重的心肌缺血(較低的FFR值)可以導(dǎo)致MPs含量的升高；CHD患者的MPs抑制血管舒張功能和NO的生成，而且MPs抑制血管舒張功能和NO生成的能力與FFR呈負(fù)相關(guān)，提示嚴(yán)重的心肌缺血(較低的FFR值)時(shí)MPs影響血管功能的能力較強(qiáng)。

1Monnink SH,Tio RA,Veeger NJ,etal.Exercise-induced ischemia after successful percutaneous coronary intervention is related to distal coronary endothelial dysfunction〔J〕.J Investig Med,2003;51(4):221-6.

2Thanyasiri P,Kathir K,Celermajer DS,etal.Endothelial dysfunction and restenosis following percutaneous coronary intervention〔J〕.Int J Cardiol,2007;119(3):362-7.

3Izzo P,Macchi A,De Gennaro L,etal.Recurrent angina after coronary angioplasty:mechanisms,diagnostic and therapeutic options〔J〕.Eur Heart J Acute Cardiovasc Care,2012;1(2):158-69.

4Han WQ,Chang FJ,Wang QR,etal.Microparticles from patients with acute coronary syndrome impair vasodilatation by inhibiting the Akt/eNOS-Hsp90 signaling pathway〔J〕.Cardiology,2015;132(4):252-60.

5Nagy JA,Benjamin L,Zeng H,etal.Vascular permeability,vascular hyperpermeability and angiogenesis 〔J〕.Angiogenesis,2008;11(2):109-19.

6Deanfield JE,Halcox JP,Rabelink TJ.Endothelial function and dysfunction:testing and clinical relevance 〔J〕.Circulation,2007;115(10):1285-95.

7Marti CN,Gheorghiade M,Kalogeropoulos AP,etal.Endothelial dysfunction,arterial stiffness,and heart failure〔J〕.J Am Coll Cardiol,2012;60(16):1455-69.

8Moens AL,Claeys MJ,Timmermans JP,etal.Myocardial ischemia/reperfusion-injury,a clinical view on a complex pathophysiological process 〔J〕.Int J Cardiol,2005;100(2):179-90.

9Diehl P,Nagy F,Sossong V,etal.Increased levels of circulating microparticles in patients with severe aortic valve stenosis〔J〕.Thromb Haemost,2008;99(4):711-9.

10Ahn YS,Jy W,Horstman LL,etal.Cell-derived microparticles:a mediator of inflammation in aortic valve stenosis 〔J〕?Thromb Haemost,2008;99(4):657-8.