銀杏內(nèi)酯B對(duì)缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞保護(hù)作用研究

孫立峰+張寶英+孟劍鋒+李亮+彭輝

【摘要】目的 研究和分析銀杏內(nèi)酯B對(duì)缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞保護(hù)作用。方法 對(duì)乳鼠的心肌細(xì)胞進(jìn)行分離和培養(yǎng)，建立空白對(duì)照組，缺氧復(fù)氧組，銀杏內(nèi)酯B組，每組中設(shè)立10個(gè)復(fù)孔，在實(shí)施6小時(shí)的干預(yù)之后，使用倒置光學(xué)纖維鏡對(duì)細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行觀察。結(jié)果 銀杏內(nèi)酯B組的心肌細(xì)胞的生存狀態(tài)與形態(tài)與缺氧復(fù)氧組相比有明顯的改善，銀杏內(nèi)酯B組的存活率高于缺氧復(fù)氧組，組間的數(shù)據(jù)對(duì)比，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論 銀杏內(nèi)酯B能夠?qū)θ毖鯊?fù)氧損傷心肌細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用，提高了存活率，減少細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象，從而降低凋亡率。

【關(guān)鍵詞】銀杏內(nèi)酯B；缺氧復(fù)氧；保護(hù)作用；心肌細(xì)胞

【中圖分類號(hào)】R542.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B 【文章編號(hào)】ISSN.2095-6681.2017.25..02

銀杏屬于較為古老的植物，而銀杏內(nèi)酯B則是在銀杏葉中提取的藥物。銀杏內(nèi)酯B能夠?qū)ι窠?jīng)系統(tǒng)起到較大程度上的保護(hù)作用，具有很強(qiáng)的抗氧化和抗炎的作用[1]。同時(shí)銀杏內(nèi)酯B對(duì)細(xì)胞損傷還可以起到一定的抑制作用，保護(hù)細(xì)胞。本文將會(huì)分析銀杏內(nèi)酯B對(duì)缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞保護(hù)作用，詳細(xì)報(bào)告匯總?cè)缦隆?/p>

1 資料與方法

1.1 一般資料

實(shí)驗(yàn)藥物主要包括銀杏內(nèi)酯B、小牛血清、DMEM培養(yǎng)基與細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒。實(shí)驗(yàn)對(duì)象選擇1到3天的乳鼠。

1.2 方法

首先對(duì)乳鼠的心肌細(xì)胞進(jìn)行分離和培養(yǎng)，然后建立空白對(duì)照組、缺氧復(fù)氧組以及銀杏內(nèi)酯B組，每組中可以設(shè)立10個(gè)復(fù)孔，在實(shí)施6小時(shí)的干預(yù)之后，使用倒置光學(xué)纖維鏡對(duì)細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行觀察。實(shí)驗(yàn)操作的具體操作方法為：在無菌的條件下對(duì)乳鼠進(jìn)行開胸，并取出心臟，并對(duì)心室組織進(jìn)行剪取，對(duì)乳鼠的心肌細(xì)胞進(jìn)行消化制備，并對(duì)其進(jìn)行100%濕度培養(yǎng)，培養(yǎng)環(huán)境注意溫度控制在37攝氏度，濃度為5%的二氧化碳，培養(yǎng)時(shí)間為72小時(shí)。之后將培養(yǎng)基丟棄掉，在每個(gè)孔中加入2 mL的無糖臺(tái)氏液；在等待15 min之后，將出氣管與進(jìn)氣管夾閉，使此時(shí)的狀態(tài)為缺氧狀態(tài)。在2小時(shí)之后將缺氧盒打開，再將培養(yǎng)皿取出，此情況則為復(fù)氧。之后再對(duì)細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行詳細(xì)的觀察，使用PBS溶液對(duì)其進(jìn)行沖洗，一直到細(xì)胞間隙能夠在顯微鏡下清晰顯示，再將其放置在通風(fēng)處，等待其晾干之后再使用顯微鏡對(duì)細(xì)胞的形態(tài)進(jìn)行全面詳細(xì)的觀察，并做相應(yīng)的記錄。

1.3 判定指標(biāo)

使用MTT對(duì)OD值進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算細(xì)胞的存活率，細(xì)胞的存活率為實(shí)驗(yàn)組的OD值與對(duì)照組OD的比例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所收集數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以“x±s”表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)（%），例（n）表示，采用x2檢驗(yàn)；以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

銀杏內(nèi)酯B組的心肌細(xì)胞的生存狀態(tài)與形態(tài)與缺氧復(fù)氧組相比有明顯的改善，銀杏內(nèi)酯B組、缺氧復(fù)氧組與空白對(duì)照組的存活率分別為（87.33±5.31）%、（45.42±2.35）%、（96.52±3.56）%，銀杏內(nèi)酯B組的存活率高于缺氧復(fù)氧組，組間的數(shù)據(jù)對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

3 討 論

灌注損傷術(shù)與梗塞再通之后最容易出現(xiàn)的并發(fā)癥就是缺血，具有相當(dāng)復(fù)雜的病理機(jī)制，目前臨床醫(yī)學(xué)方面對(duì)此還尚未得到明確[2]。

銀杏內(nèi)酯B屬于從中藥銀杏葉中提取的活性成分，是一種血小板活化因子拮抗劑，有抗炎與抗氧化等一系列的作用[3]。銀杏內(nèi)酯B能夠提高細(xì)胞的存活率，通過抑制細(xì)胞的損傷來達(dá)到保護(hù)缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的作用，同時(shí)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)也能夠起到一定的保護(hù)作用。此外銀杏內(nèi)酯B能夠?qū)ρ趸偷兔芏弱サ鞍滓鸬囊幌盗醒装Y反應(yīng)起到一定的抑制作用，起到防止心肌細(xì)胞損傷的作用[4]。

此次研究結(jié)果顯示，銀杏內(nèi)酯B組、缺氧復(fù)氧組與空白對(duì)照組的存活率分別為（87.33±5.31）%、（45.42±2.35）%、（96.52±3.56）%，空白對(duì)照組的存活率最高，同時(shí)銀杏內(nèi)酯B組的存活率高于缺氧復(fù)氧組，組間的數(shù)據(jù)相對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）?？梢钥闯鲢y杏內(nèi)酯B組的心肌細(xì)胞的生存狀態(tài)與形態(tài)與缺氧復(fù)氧組相比有明顯的改善，銀杏內(nèi)酯B組的存活率高于缺氧復(fù)氧組。

綜上所述，銀杏內(nèi)酯B能夠?qū)θ毖鯊?fù)氧損傷心肌細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用，提高了存活率，減少細(xì)胞凋亡的現(xiàn)象，從而降低凋亡率，具有很高的應(yīng)用價(jià)值，值得推廣應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)

[1] 程 怡.α7煙堿型乙酰膽堿受體激動(dòng)劑后處理對(duì)大鼠離體心肌細(xì)胞缺氧—復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D].北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2014.12（32）：157-160.

[2] 龔 婉，肖 揚(yáng)，張 萌，等.丹參總酚酸及三七總皂苷配伍對(duì)缺氧復(fù)氧損傷心肌細(xì)胞的保護(hù)作用研究[J].中國中藥雜志，2013，23（07）：1046-1051.

[3] 閔 清，白育庭，余 薇，等.黃芪多糖對(duì)乳鼠心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用[J].中國藥理學(xué)通報(bào)，2010，30（12）：1661-1664.

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本文編輯：李 豆endprint