非小細(xì)胞肺癌患者血漿和組織中尾加壓素Ⅱ的表達及臨床意義

高鴻敏,杜玉國,高進遼

肺癌居惡性腫瘤死因的第一位，病死率上升幅度居各類腫瘤之首[1]。非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的80%以上，且目前缺乏有效的早期診斷手段，患者就診時多為中晚期，預(yù)后極差[2]。尋找早期診斷的標(biāo)記物及治療的新靶點是該領(lǐng)域的研究重點之一。尾加壓素Ⅱ(urotensin-Ⅱ， UⅡ)是一種新型血管活性肽，其除了具有很強的縮血管作用外，還具有促進氣道平滑肌及腫瘤細(xì)胞增殖和刺激血管生成的作用[3],在肺癌、腎上腺皮質(zhì)癌、腎透明細(xì)胞癌、嗜鉻細(xì)胞瘤等組織中均有表達[4-7]，且具有一定的種屬差異性。UⅡ作為強有力的有絲分裂原刺激劑在NSCLC發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮的病理生理作用值得進一步探究。本研究探究UⅡ在NSCLC血漿與組織中的表達情況?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1臨床資料 選擇2009年1月—2011年1月陸軍總醫(yī)院收治的NSCLC 75例的血漿和手術(shù)切除組織標(biāo)本作為肺癌組。入選標(biāo)準(zhǔn)：①均經(jīng)病理學(xué)確診為NSCLC的患者；②入選前均未進行過放療及化療等抗腫瘤治療；③不伴有高血壓、嚴(yán)重動脈粥樣硬化、腦梗死等心、腦、腎和代謝、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病；④取材前均取得患者及家屬同意，符合倫理要求。男51例，女24例，年齡40～81(62.88±5.28)歲；TNM分期：Ⅰ期15例，Ⅱ期27例，Ⅲ期28例，Ⅳ期5例;遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(包括同側(cè)或?qū)?cè)非原發(fā)腫瘤所在葉的肺內(nèi)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處臟器)39例，其中雙側(cè)肺轉(zhuǎn)移8例，骨轉(zhuǎn)移15例，肝轉(zhuǎn)移4例，兩個以上部位多發(fā)轉(zhuǎn)移12例；無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移36例。組織病理學(xué)分類參照WHO標(biāo)準(zhǔn)(2015年)[8]，其中大細(xì)胞癌15例，腺癌29例，鱗癌31例;匹配的血漿標(biāo)本在獲取組織標(biāo)本前清晨采空腹血2 ml，血標(biāo)本加入含10% EDTA、抑肽酶的抗凝試管中，充分混勻后4℃下2000 r/min離心15 min，分離出血漿，-70℃冰箱保存待測。選擇2012年1月—2015年1月陸軍總醫(yī)院體檢的健康者30例為健康對照組，男18例，女12例，年齡38～76(59.94±6.06)歲。選擇同期住院肺良性病變38例作為肺良性病變組，男24例，女14例，年齡37～85(61.87±6.12)歲，其中慢性阻塞性肺疾病17例，肺炎14例，支氣管擴張4例，肺間質(zhì)纖維化3例。選擇我院2009—2011年胸外科手術(shù)切除的33例肺炎性假瘤作為組織良性對照組，入選病例均不伴有高血壓、嚴(yán)重動脈粥樣硬化、腦梗死等心、腦、腎系統(tǒng)和代謝、內(nèi)分泌疾病。4組性別、年齡等方面比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1血漿組：采用放射免疫分析法(RIA)測定每個血漿標(biāo)本中UⅡ的含量。UⅡ放射免疫試劑盒由美國SIGMA公司提供。按試劑盒說明書進行操作。主要儀器：695B-γ自動計數(shù)儀。

1.2.2組織組：采用免疫組化法觀察75例NSCLC組織及33例肺炎性假瘤組織中UⅡ的表達情況。以細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞，未見著色細(xì)胞者為陰性。切片中隨機觀察4個高倍視野，每個視野觀察100個細(xì)胞，記錄陽性細(xì)胞數(shù)所占觀察細(xì)胞總數(shù)百分比，并取4個高倍視野陽性細(xì)胞百分比平均值,平均陽性細(xì)胞百分比>25 %確定為陽性[9]。

2 結(jié)果

2.1血漿和組織UⅡ含量 NSCLC組、肺良性病變組、健康對照組血漿UⅡ含量分別為(4.019±0.928)、(2.995±0.922)、(2.126±0.689)pmol/L。NSCLC組和肺良性病變組血漿UⅡ含量高于健康對照組，且NSCLC組高于肺良性病變組(P<0.05，P<0.01)。NSCLC組和肺炎性假瘤組UⅡ表達陽性率分別為60.0%(45/75)和12.1%(4/33)。NSCLC組UⅡ表達陽性率高于肺炎性假瘤組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=12.857，P<0.01)。

2.2不同病理類型NSCLC血漿和組織UⅡ含量比較 腺癌組、鱗癌組、大細(xì)胞肺癌組血漿UⅡ含量分別為(4.049±0.875)、(3.228±0.845)、(2.767±1.338)pmol/L。腺癌組、鱗癌組血漿UⅡ含量高于大細(xì)胞肺癌組，且腺癌組高于鱗癌組(P<0.05，P<0.01)。免疫組化標(biāo)記顯示，UⅡ主要分布于NSCLC細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色顆粒，其中腺癌組UⅡ陽性表達率高達100%(29/29)；鱗癌組UⅡ陽性表達率為38.7%(12/31)；大細(xì)胞癌組UⅡ陽性表達率為40.0%(6/15)。見圖1。腺癌組UⅡ陽性表達率高于鱗癌組、大細(xì)胞癌組(P<0.01)，而鱗癌組和大細(xì)胞肺癌組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.3NSCLC血漿和組織中UⅡ表達與有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移及TNM分期的關(guān)系 NSCLC組中有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者、無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者血漿UⅡ含量分別為(3.875±1.966)、(3.273±1.485)pmol/L。NSCLC組有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者血漿UⅡ含量明顯高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者(P<0.05)。NSCLC組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者組織中UⅡ表達陽性率分別為13.3%(2/15)、51.9%(14/27)、85.7%(24/28)、80.0%(4/5)。NSCLC組中Ⅰ期UⅡ表達陽性率明顯低于Ⅲ、Ⅳ期(P<0.05)；Ⅰ期與Ⅱ期比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期兩兩比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

UⅡ在血管收縮和內(nèi)皮功能不良相關(guān)疾病如心力衰竭、高血壓、腎臟疾病、重度子癇、慢性阻塞性肺疾病急性加重期、糖尿病血管并發(fā)癥和動脈粥樣硬化中發(fā)揮一定的作用[10-16]。近年來研究還發(fā)現(xiàn)，UⅡ及其受體(UT-R)廣泛分布于多種腫瘤細(xì)胞株和腫瘤組織中，與腎癌、嗜鉻細(xì)胞瘤等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，但具體作用機制尚未完全闡明，可能與其促細(xì)胞增殖、血管生成作用有關(guān)。

目前國內(nèi)外尚無同時報道UⅡ在NSCLC血漿和組織中表達的文獻。Morimoto等[5]研究報道，UⅡ在腎上腺皮質(zhì)瘤組織中高度表達，但在瘤旁正常腎上腺皮質(zhì)組織中UⅡ表達極弱甚至檢測不到，還發(fā)現(xiàn)，UⅡ及其受體在腎上腺皮質(zhì)腺瘤和腎上腺皮質(zhì)癌組織中表達差異無顯著性，且UⅡ免疫反應(yīng)強弱程度與腎上腺皮質(zhì)癌組織病理學(xué)分型無顯著相關(guān)性。由此推測，對于腎上腺皮質(zhì)腫瘤，UⅡ可能不具有惡性化潛能。本研究結(jié)果表明，NSCLC組血漿UⅡ含量高于健康對照組和肺良性病變組；UⅡ主要分布于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中，呈棕黃色顆粒，NSCLC組組織陽性表達率亦明顯高于肺炎性假瘤組，血漿和組織表達趨勢基本一致。提示NSCLC細(xì)胞可自身合成、分泌UⅡ，并通過自分泌和(或)旁分泌的方式，直接或間接維持和促進腫瘤細(xì)胞增殖，并有可能作為腫瘤產(chǎn)物抑制宿主免疫反應(yīng)，更有利于腫瘤細(xì)胞逃避免疫監(jiān)視。

本研究發(fā)現(xiàn)腺癌患者血漿和組織UⅡ含量均高于其他類型NSCLC，尤其是UⅡ在腺癌組織中的陽性表達率最高。提示UⅡ的表達與病理類型相關(guān)，血漿和組織UⅡ表達趨勢一致，且NSCLC尤其是腺癌中可能有自分泌環(huán)路的存在，UⅡ能激活自分泌和(或)旁分泌生長刺激信號通路，刺激腫瘤細(xì)胞增殖及分化。Federico等[17]報道UⅡ在結(jié)腸癌細(xì)胞中高度表達，結(jié)腸癌主要以腺癌為主，提示UⅡ在腺癌中具有特異性高表達，是否可作為一種新的肺腺癌腫瘤標(biāo)記物值得深入研究。本研究結(jié)果顯示，NSCLC組有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者血漿UⅡ含量高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，Ⅰ期患者組織中UⅡ表達陽性率低于Ⅲ、Ⅳ期，但Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。提示有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的NSCLC患者血漿和組織UⅡ表達水平較無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組明顯增高，且陽性表達水平與臨床分期及預(yù)后相關(guān)，臨床分期越晚，浸潤范圍越廣，UⅡ陽性表達水平越高，臨床預(yù)后也就越差。

UⅡ可能是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤轉(zhuǎn)移相關(guān)因子，參與了肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。劉振玉等[18]報道，UⅡ在肺癌組織中的表達量高于對照組，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的晚期肺癌患者高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者，但UⅡ水平與肺癌病理類型無關(guān)。本研究結(jié)果與其不一致?？紤]原因為，腺癌具有高度浸潤和破壞性生長特征，易侵犯血管和淋巴管壁，而出現(xiàn)較多的血行及淋巴轉(zhuǎn)移。轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者死亡的主要原因,惡性腫瘤細(xì)胞無限侵襲性增殖及其轉(zhuǎn)移依賴于血管生成，這些新生成的血管將不斷生長的腫瘤和循環(huán)系統(tǒng)直接連接起來，使其供給腫瘤生長需要的物質(zhì)。UⅡ作為近年新發(fā)現(xiàn)的血管活性肽，具有血管活性及促進有絲分裂的雙重作用，相比較其他惡性腫瘤，對NSCLC尤其是腺癌的侵襲性生長和轉(zhuǎn)移的惡性潛能明顯增加，可以作為監(jiān)測肺腺癌惡性生長的一個分子標(biāo)志物，檢測UⅡ表達對肺癌的診斷及預(yù)后評價有一定的實用價值。

UⅡ特異性受體拮抗劑的研究對了解UⅡ及其受體的生理特性，探索其治療作用十分重要。研究證實，UⅡ受體拮抗劑Palosuran(ACT-058362)能提高糖尿病小鼠生存率，增加胰島素分泌，延緩血糖、糖化血紅蛋白和血脂升高[19]，但其在肺癌診治的研究目前尚未見報道，相信隨著其受體拮抗劑的深入研究，對NSCLC尤其是腺癌的治療有重要意義。

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