高效液相色譜儀基本原理、應(yīng)用及故障排除

俞兆程

（武威市環(huán)境保護監(jiān)測站 甘肅武威 733000）

1 高效液相色譜儀基本原理

高效液相色譜是色譜法的一個重要分支，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相,通過高壓泵進入裝有固定相的色譜柱，在柱內(nèi)各成分按照極性大小順序被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。

2 高效液相色譜儀的應(yīng)用

液相色譜法的分離機理是基于混合物中各組分對兩相親和力的差別。根據(jù)固定相的不同，可分為液固色譜、液液色譜和鍵合相色譜。高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法的區(qū)別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需用高壓輸送流動相。由于高效液相色譜法具有分離效能高、選擇性好、靈敏度高、分析速度快、適用范圍廣、色譜柱可反復(fù)使用的特點，在我國各項科學(xué)研究和檢測工作當(dāng)中都有廣泛的應(yīng)用。為保證高效液相色譜儀在物質(zhì)研究工作中的作用效果，在完成物質(zhì)溶液制備工作之后，還需要采取常規(guī)的方法對所配置的溶液實施簡單檢測，明確溶液的基本物理性質(zhì)，配合適當(dāng)?shù)念A(yù)處理技術(shù)開展溶液色譜檢測工作。與單一物質(zhì)檢測設(shè)備相比，高效液相色譜儀具備分辨率高、反應(yīng)速度快和色譜柱利用性強等優(yōu)勢，能夠彌補其他儀器設(shè)備在物質(zhì)檢測時潛藏的弊端，使得其在我國生物化學(xué)工程、食品工程和環(huán)境現(xiàn)狀分析等事業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用。

3 高效液相色譜儀常見故障排除

3.1 流動相氣泡故障

對流動相氣泡故障來說，出現(xiàn)這一故障的原因在于流動相濾頭長時間浸泡在水或乙酸銨等緩沖液當(dāng)中，造成過濾器中霉菌大量繁殖。如果不能采取適當(dāng)措施控制這一現(xiàn)狀，必然導(dǎo)致過濾器堵塞，流動相中出現(xiàn)氣泡的可能性大大提升。針對于這一故障，在高效液相色譜儀使用之前，應(yīng)將其過濾器浸泡在5%的硝酸溶液當(dāng)中，并利用超聲破進行過濾器清晰。消除過濾器中污垢，從而減少流動相中氣泡含量，保證流動相在物質(zhì)溶液檢測過程中的作用效果。

3.2 柱壓過高故障

色譜柱作為高效液相色譜儀中重要組成部分，保證色譜柱內(nèi)部壓強的穩(wěn)定性，不僅能夠提升高效液相色譜儀運行效果，還能夠改善高效液相色譜儀運行弊端，使得物質(zhì)溶液檢測工作順利開展。但是該儀器設(shè)備在長時間運行過程中很有可能出現(xiàn)色譜柱內(nèi)部壓強過高的問題，造成基線漂移，檢測準確性下降，影響溶液檢測試劑作用效果。而且高效液相色譜儀出現(xiàn)柱壓過高故障的原因主要有緩沖液鹽分沉積和樣品污染沉積這兩方面，這就應(yīng)針對各項原因制定分類解決措施，避免柱壓過高這一故障延伸[2]。對于緩沖液鹽分沉積來說，應(yīng)利用40℃—50℃的純水對色譜柱進行全面沖洗，盡可能保證色譜柱中壓強降到規(guī)定的范圍內(nèi)。對于樣品污染沉積來說，不僅需要利用純水沖洗色譜柱，還需要應(yīng)用適當(dāng)濃度的甲醇溶液對色譜柱進行二次沖洗，控制樣品污染對高效液相色譜儀中色譜柱產(chǎn)生的影響，使得色譜柱在相應(yīng)檢測中的作用效果得以提升。

3.3 物質(zhì)溶液色譜檢測效果不佳

眾所周知，高效液相色譜儀的作用為物質(zhì)溶液色譜檢測。因此，在對相應(yīng)溶液進行綜合檢測工作時，就應(yīng)保證高效液相色譜儀中各個零部件處于相互配合的狀態(tài)，減少高效液相色譜儀在運行時出現(xiàn)問題的可能，確保物質(zhì)溶液檢測工作順利開展。但是在完成物質(zhì)溶液綜合檢測工作之后，還有可能出現(xiàn)色譜檢測效果不佳這一弊端，而出現(xiàn)這一問題的原因主要表現(xiàn)在色譜柱污染和柱頭填料塌陷這兩方面上。對于色譜柱污染來說，需利用純水對色譜柱進行反響沖洗，之后采用甲醇進行物質(zhì)沖洗。重復(fù)進行這兩步工作，在解決色譜柱污染問題的同時，避免物質(zhì)溶液檢測之后出現(xiàn)色譜效果不佳等問題[3]。對于柱頭填料塌陷這一故障來說，應(yīng)及時清除色譜柱中遭受污染的填料，并在新填料裝入時輔助一定濃度的甲醇溶液，同時保證色譜柱中填料的密實性，有效控制儀器設(shè)備檢測效果不佳對高效液相色譜儀作用效果產(chǎn)生的影響。

3.4 檢測器峰型不規(guī)則

在對物質(zhì)容易實施綜合檢測時，可能會因為高效液相色譜儀運行狀態(tài)和檢測器作用效果不佳而出現(xiàn)檢測器峰型不規(guī)則的問題。如果不能對這一故障實施有效排除，必然導(dǎo)致物質(zhì)溶液綜合檢測效果變差，對于溶液檢測真實性也有極大的影響。從檢測器峰型不規(guī)則的角度出發(fā)，了解到高效液相色譜儀在物質(zhì)溶液檢測時出現(xiàn)的不規(guī)則峰型主要有基線漂移、無峰、峰變寬、雙峰和前沿峰等問題。而且不同奉行的誘發(fā)原因也存在很大的差異。這就應(yīng)從各類檢測器峰型不規(guī)則的原因制定針對性排除措施，控制外在因素對檢測器峰型產(chǎn)生的影響。在排除檢測器峰型不規(guī)則問題的同時，一以保證高效液相色譜儀在物質(zhì)溶液綜合檢測中的作用效果得以彰顯。

結(jié)語

綜上所述，了解到高效液相色譜儀在我國各項研究工程中起到非常重要的作用。為此就應(yīng)加強高效液相色譜儀研究力度，以保證物質(zhì)監(jiān)測工作人員對這一儀器設(shè)備有一個全面的掌握。對于高效液相色譜儀在運行過程中出現(xiàn)的故障來說，還應(yīng)結(jié)合高效液相色譜儀運行模式和其他方面因素制定故障排除策略，確保高效液相色譜儀在各項研究工程中的作用效果有進一步提高。