一例蛋雞Ⅰ亞群禽腺病毒與大腸桿菌混合感染的診斷

宋鋒+薛凌壯+祖立闖

摘要：2017年4月，山東省濱州市某蛋雞場雛雞發(fā)生一種以心包積液、肝炎為主要病變特征的疫病，經(jīng)過發(fā)病情況、臨床特征和病理變化等臨床診斷以及細菌學檢測、病毒學檢測等實驗室診斷，最終確診為雞Ⅰ亞群禽腺病毒與大腸桿菌混合感染。

關(guān)鍵詞：蛋雞；大腸桿菌；Ⅰ亞群禽腺病毒；混合感染；診斷

禽腺病毒（Fowl adenovirus，F(xiàn)AV）屬于禽腺病毒科禽腺病毒屬，根據(jù)FAV群特異性抗原不同可分為3個群。自2015年以來，山東、江蘇、河南、河北、遼寧、吉林、安徽、浙江、湖北和山西等地的雞群相繼發(fā)生一種由Ⅰ亞群禽腺病毒引起的以心包積液和包涵體肝炎為主要特征的急性傳染病，且近2年來該病在我國的發(fā)生有日益擴大的趨勢，對養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展帶來嚴重威脅。大腸桿菌?。╟olibacillosis）是指由致病性大腸桿菌（pathogenic Escherichia coli）的某些血清型及其毒素引起的一種腸道傳染性疾病，是雞群常見的細菌性疫病之一，每年都給養(yǎng)禽業(yè)造成一定的經(jīng)濟損失。2017年4月，山東省濱州市某蛋雞場雛雞發(fā)生一種以心包積液、肝炎為主要病變特征的疫病，經(jīng)過臨床和實驗室診斷確診為雞大腸桿菌與I亞群禽腺病毒混合感染，現(xiàn)將整個診斷過程介紹如下。

1發(fā)病情況

2017年4月22日，濱州市某蛋雞場將所飼養(yǎng)的3，000只8日齡雛雞斷喙，雛雞斷喙前精神、飲食和糞便均正常。上午斷喙完成后，下午雛雞開始發(fā)病，發(fā)病后陸續(xù)出現(xiàn)雞只死亡，至晚上僅存活46只，病死率高達98.47%。

2臨床癥狀

雛雞發(fā)病急、死亡快，死亡前僅表現(xiàn)出精神萎靡、縮頸閉眼、翅垂蹲臥及張口呼吸等臨床特征。

3病理變化

剖檢病死雞可見肝臟腫大，局部甚至整個肝臟色淡，呈黃色，有出血點；心包內(nèi)有多量淡黃色積液且積液清澈、透亮；肺臟淤血、出血；個別雞腎臟腫大出血；氣管環(huán)輕微出血；其他臟器未見明顯異常。

4細菌學檢測

4.1病料樣品鏡檢

無菌采集病死雞的肝臟、心臟等病料樣品進行涂片，經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢觀察可見大量革蘭氏陰性、中等大小的桿菌。

4.2細菌分離培養(yǎng)與鏡檢

將無菌采集病死雞的肝臟、心臟等病料樣品分別接種于血清瓊脂培養(yǎng)基平板和麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板，37℃培養(yǎng)24h后，在血清瓊脂培養(yǎng)基上生長出灰白色、光滑、邊緣整齊和中等大小圓形菌落，在麥康凱培養(yǎng)基上為紅色菌落。取單菌落進行涂片，經(jīng)革蘭氏染色、鏡檢觀察可見均為革蘭氏陰性、中等大小的桿菌。

4.3生化試驗

將分離菌株分別接種各種生化鑒定管（購于杭州天和微生物試劑有限公司），結(jié)果顯示分離菌株能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、半乳糖、木糖和阿拉伯糖等產(chǎn)酸產(chǎn)氣，不能發(fā)酵甘露糖，不產(chǎn)生H2S，吲哚試驗為陽性，V-P和枸櫞酸鹽利用試驗為陰性，符合大腸桿菌的生化特性。

4.4藥敏試驗

利用K-B涂布法測定分離菌株對磷霉素、氟苯尼考、阿莫西林、丁胺卡那、新霉素、環(huán)丙沙星、強力霉素、多粘菌素和頭孢曲松共9種藥敏紙片（均購自北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司）的藥物敏感性，顯示分離菌株對磷霉素、丁胺卡較敏感，對其它7種藥物低敏感或耐藥。

5病毒學檢測

5.1臨床病料樣品PCR檢測

利用病毒基因組DNA/RNA提取試劑盒（美國AXYGEN公司產(chǎn)品）提取臨床病料樣品的病毒基因組DNA/RNA。利用山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院設(shè)計合成的Fav-I、雞新城疫病毒（NDV）、雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）、H9亞型禽流感病毒（AIV-H9）、雞傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）、禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生病毒（REV）和禽呼腸孤病毒（ARV）特異性檢測引物（詳見表1），對臨床病料樣品的病毒基因組DNA/RNA進行PCR/RT-PCR檢測，PCR擴增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測顯示，只有Fav-I檢測引物的PCR擴增產(chǎn)物在位于約430bp處均具有特異性條帶，與預期大小相符。

5.2病毒分離

將發(fā)病雞的心臟、肝臟和腎臟等組織用滅菌生理鹽水按照1：10比例勻漿研磨，反復凍融3次后，12，000rpm離心10分鐘，上清液經(jīng)0.22μm過濾除菌后，卵黃囊途徑接種10枚7日齡SPF雞胚（購自濟南斯帕法斯家禽有限公司），0.2mL/胚，37℃孵育，接種后72～96h雞胚集中死亡，剖檢雞胚可見明顯的心包積液，肝臟有出血點和壞死點及腎臟充血腫大等典型癥狀，收取24～144h致死雞胚的卵黃液-20℃保存。

5.3分離毒株的PCR檢測

按照5.1的方法對分離毒株進行PCR檢測，結(jié)果顯示只有Fav-I引物擴增為陽性，其余引物擴增均為陰性。

6綜合診斷結(jié)果

綜合發(fā)病隋況、臨床特征和病理變化等臨床診斷以及細菌學檢測、病毒學檢測等實驗室診斷結(jié)果，綜合確診為Ⅰ亞群禽腺病毒和大腸桿菌混合感染。

7小結(jié)與體會

腺病毒病是一個老病，Ⅰ亞群FAV引起包涵體肝炎、心包積液一肝炎綜合征，宿主非常廣泛，主要發(fā)生于3～5周齡雜交雞、麻雞，也可見于肉雞、種雞和蛋雞。發(fā)病雞群多于3周齡開始出現(xiàn)死亡，4～5周齡達到死亡高峰，死亡率為20%～75%，最高可達80%。商品肉鴨也能感染發(fā)病，發(fā)病日齡多集中在15～25日齡。除雞、鴨外，鴿子、觀賞鳥也有發(fā)病。Ⅰ亞群FAV現(xiàn)在越來越受到重視，逐漸納入免疫程序，但目前我國尚無正規(guī)的商品化Ⅰ亞群FAV疫苗。Ⅱ亞群FAV主要引起火雞出血性腸炎，雞脾臟腫大，較少見。Ⅲ亞群FAV主要引起蛋禽的產(chǎn)蛋下降，已經(jīng)納入免疫程序，近年來流行率較低。

Ⅰ亞群FAV的感染往往為隱性感染，大部分為無癥狀感染，病毒長期存在于正常禽類的上呼吸道、消化道和肝臟等部位，呈帶毒狀態(tài)，正常情況下不發(fā)病，應(yīng)激因素或與其它致病原的混合感染均可誘其發(fā)病，表現(xiàn)出典型的臨床癥狀。筆者2015年經(jīng)診過2例4日齡、5日齡發(fā)病，兩個病例雞雛均來自同一孵化場的蛋雛雞雞群，及時注射抗體后，死亡率分別為19.17%（1150/6000）和18.67%（560/3000）。2016年經(jīng)診20，000只肉雜雞，5日齡開始發(fā)病，至48日齡出售共死亡3，000只，死亡率為15.0%。此病例中3，000只雞雛死亡2954只，死亡率高達98.47%，應(yīng)該由斷喙應(yīng)激、斷喙后快速升溫引起的熱應(yīng)激以及大腸桿菌的混合感染所致。

大腸桿菌為條件性致病菌，當外界環(huán)境因素突變后極易誘發(fā)，故在養(yǎng)殖場采取以加強日常飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生為主的綜合措施，可有效避免該病的發(fā)生。目前大腸桿菌病是獸醫(yī)臨床中最常見的一種細菌病，雖有多種藥物可用于該病的治療，但抗菌藥物的長期、大量濫用導致了耐藥性、藥物殘留、環(huán)境污染、食品安全等一系列問題，本研究中的大腸桿菌分離菌株在9種常見藥物中已對7種藥物表現(xiàn)出低敏感或耐藥，分離菌株已表現(xiàn)出了一定的耐藥性，應(yīng)加強重視。endprint