離子色譜檢測全血中的亞硝酸鹽及其代謝產(chǎn)物

李曉瑩 遼陽市疾病預(yù)防控制中心 檢驗(yàn)科 （遼寧 遼陽 111000）

亞硝酸鹽是一種致毒性、致死性很強(qiáng)的物質(zhì)，它進(jìn)入人體在血中代謝的游離與血紅蛋白高效結(jié)合奪取血液中的氧，使中毒者很快窒息死亡[1]。亞硝酸鹽的致死劑量一般為3g，而可引起中毒癥狀的最低劑量為0.3g。血液是檢測亞硝酸鹽及其代謝產(chǎn)物最為敏感的指標(biāo)，對于血液亞硝酸鹽含量檢測方法也有很多種，常見的一般使用的是化學(xué)分光光度、極譜法以及離子色譜法[2]。本文主要探究離子色譜法檢測全血中的亞硝酸鹽以及代謝產(chǎn)物濃度的實(shí)驗(yàn)效力，評價這種方法的靈敏度和準(zhǔn)確性是否可用于臨床輔助診斷，現(xiàn)報告如下。

1.資料與方法

1.1 臨床資料

ICS-5000+型離子色譜儀（配備KOH淋洗液自動發(fā)生器、AS自動進(jìn)樣器，美國ThermoFisher公司），entrifuge 5430型高速離心機(jī)（德國艾本德公司）[3]，SK-1型快速混勻器（金壇市順華儀器有限公司），Milli-pore Direct Q-5超純水儀（美國密理博公司）。乙睛（色譜純，德國Merck公司），標(biāo)準(zhǔn)品（水劑，以N計100mg/L，國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心）[4]，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 方法

將Dionex OnGuard Ⅱ Ag柱和Na柱分別用10mL去離子水活化，Dionex OnGuard Ⅱ RP柱分別用5mL二甲醇、10mL二去離子水活化，流速均為2mL/min，活化時間均為30min[5]。靜脈抽取5mL中毒患者血液，置于15mL塑料離心管中，加入2mL乙睛沉淀蛋白，加入去離子水7mL，振蕩、混勻，5min后置于高速離心機(jī)以7800r/min的轉(zhuǎn)速離心10min，取上清液分別經(jīng)過活化的Dionex OnGuardⅡRP柱、Dionex OnGuardⅡAg/Na柱及有機(jī)相性針式濾器，棄去前而3mL，流出液后開始收集濾液。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 22.0對所得資料進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料采用t檢驗(yàn)，計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，兩組比較P＜0.05表示有顯著統(tǒng)計學(xué)差異。

2.結(jié)果

血中蛋白的沉淀選擇乙腈更好，因?yàn)橐译娼殡姵?shù)較乙醇、甲醇等更小，所以沉淀更快，用2mL的乙腈就可以將95%蛋白質(zhì)從1mL血液中沉淀析出，對樣品的pH值幾乎無干擾。

血中成分復(fù)雜，需要梯度分離。使用不同物質(zhì)去除不同離子，C18柱很好地去除有機(jī)物、Na柱很好地去除銀離子、Ag柱很好地去除Cl-。

色譜測定結(jié)果顯示，當(dāng)NO2-的濃度在0.256～20.31mL/h，線性關(guān)系最為良好，線性方程為Y=0.0312X+0.4892，相關(guān)系數(shù)r為0.9871。測的的檢出限為0.16μg/mL，總回收率為96.3%～104.5%。

3.討論

亞硝酸鹽中毒在生活、公安案例中出現(xiàn)率不低。法醫(yī)人員對尸體的鑒定首先需要測定血中亞硝酸鹽的濃度[6]?？诜喯跛猁}中毒的患者在清洗胃內(nèi)容物時，需將胃內(nèi)容物過C18柱，留取有效檢驗(yàn)成分，去除油脂、有機(jī)代謝消化干擾物[7]。對于檢測樣品的淋洗劑的選擇也有所將就，本次實(shí)驗(yàn)在比較了10余種洗劑后，首選了Na柱來清除干擾離子，充分淋洗待檢測離子，使其成為最佳流動相，Na柱清洗后的游離子干擾因素最少，檢測準(zhǔn)確程度最佳。當(dāng)患者亞硝酸鹽中毒后一段時間，患者可能排除分泌物，而尿液可將部分排出而檢測不到，但不能因此判斷患者沒有中毒，需要進(jìn)一步進(jìn)行血常規(guī)的化驗(yàn)來檢測血中是否含有中毒物，使用離子色譜法檢測血中的含量[8,9]。

綜上所述，離子色譜法高效、便捷、重復(fù)性良好、回收率優(yōu)、安全性高，適合較大批量樣品的檢測工作。在食品檢測中，離子色譜法也常被應(yīng)用于檢測食物、水等亞硝酸鹽含量，所耗費(fèi)用并不高，結(jié)果準(zhǔn)確率高，可靠性好，為臨床檢驗(yàn)提供科學(xué)準(zhǔn)確的診斷依據(jù)。

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