奶牛魏氏梭菌病的診斷和防治

曹民川 王進峰 周麗梅 唐振興（陜西省銅川市動物疫病預防控制中心 727000）

奶牛魏氏梭菌病是一種急性傳染病，是由于感染魏氏梭菌而引起。該病發(fā)病率較低，但死亡率較高，往往呈急性發(fā)病。發(fā)病年齡上，成年奶牛多發(fā)，而犢?；静粫l(fā)生。病牛臨床主要特征是突然發(fā)病、死亡以及實質(zhì)器官和消化道出血。筆者通過一些臨床病例和治療經(jīng)驗，總結出奶牛魏氏梭菌病的診斷方法和防治措施，供廣大養(yǎng)殖戶參考借鑒。

奶牛魏氏梭菌病又稱為猝死癥，是一種急性傳染病，發(fā)病率較低，但死亡率高。引起該病的原因較多，但一般認為是由牛A型魏氏梭菌（又稱產(chǎn)氣莢膜桿菌）引起。臨床上以病牛突然死亡以及消化道和實質(zhì)器官出血為特征。大小奶牛都可能發(fā)病，但以犢牛、孕牛和高產(chǎn)牛多發(fā)病，死亡率70%～100%。一年四季均可發(fā)病，但以春秋兩季為主。2012年4月9日，銅川市耀州區(qū)五臺畜牧養(yǎng)殖公司奶牛場2010年從澳大利亞引進的200頭奶牛有24頭奶牛突然發(fā)病并死亡11頭，經(jīng)省、市、區(qū)動物疫病預防控制中心專家現(xiàn)場調(diào)查、臨床剖檢及實驗室檢測，確診為奶牛魏氏梭菌病(猝死癥)。

1 發(fā)病機理

魏氏梭菌是該病的病原，病原菌在土壤中普遍存在，也可在污水中存在。在正常情況下，機體內(nèi)的細菌處于緩慢增殖的狀態(tài)，且產(chǎn)生的毒素較少。由于機體腸道不斷地進行蠕動，能夠?qū)⒛c內(nèi)容物及時排出到體外，從而避免該病菌及其所產(chǎn)生的毒素大量在腸道內(nèi)積聚。但是當外界環(huán)境噪音較大或者突然更換飼料，尤其是從飼喂干草更換為飼喂大量的谷類飼料或者富有蛋白質(zhì)的飼料以及青綠多汁飼料時，瘤胃里含有的正常能夠分解纖維素的菌群一時無法適應，導致機體抵抗力降低，減少運動，腸道過于松懈，緩慢蠕動，造成飼料發(fā)酵產(chǎn)生大量的酸，從而引起正常的酸堿度失衡。此時，大量的沒有經(jīng)過消化的淀粉顆粒飼料通過真胃進入小腸，造成病菌快速繁殖，同時產(chǎn)生大量的毒素，增強腸道的通透性，從而導致大量的毒素進入到血液，造成全身毒血癥，導致發(fā)病，嚴重時甚至引起休克而發(fā)生死亡。

2 臨床癥狀

2.1 最急性型 無任何前驅(qū)癥狀，幾分鐘或1～2h突然死亡。有的奶牛頭天晚上正常，第2天死在牛舍內(nèi)。病牛死后腹部膨大，舌頭脫出口外，口腔流出帶有紅色泡沫的液體，肛門外翻。共11頭。

2.2 急性型 體溫增高或正常，呼吸迫促，結膜發(fā)紺，口鼻流出白色或紅色泡沫，全身肌肉震顫，行走不穩(wěn)，狂叫倒地，四肢劃動，最后死亡。共3頭。

2.3 亞急性型 呈陣發(fā)性不安。發(fā)作時兩耳豎立，兩眼圓睜，表現(xiàn)出高度精神緊張，以后轉為安靜，如此周期性反復發(fā)作，最終死亡。共2頭。

急性型和亞急性型除上述癥狀外，有的發(fā)生腹瀉，排出多量黑紅色、含黏液的惡臭糞便，有時排糞呈噴射狀，病畜頻頻努責，里急后重。

3 病理剖檢

病死奶牛剖檢后，心臟擴張，心房及心室外膜有出血點；胸腹腔和心包積液；呼吸道呈現(xiàn)出血性病變，肝臟腫大，呈紫黑色，表面有出血斑；肺氣腫、水腫、有出血癥狀；鄒胃黏膜出血，鄒胃內(nèi)容物為酸臭的黃色液體；膽囊腫大；脾腫大，有出血點；小腸黏膜充血、出血，腸壁外觀呈暗紅色；下頜淋巴結、腸系膜淋巴結腫大、充血。

4 實驗室診斷

4.1 涂片染色鏡檢（1）樣品：病死牛組織觸片；（2）試驗試劑和儀器：美蘭染色劑、蒸餾水、顯微鏡、染色缸、酒精燈。（3）試驗步驟：按美蘭染色劑說明書進行。1600倍光學顯微鏡下(油鏡)鏡檢。（4）注意事項：血液中存在魏氏梭菌較少，涂片時推片很重要，用平載玻片，用火柴棒點少量血液至載玻片上。形態(tài)觀察，在無菌條件下取病牛腸內(nèi)容物、黏膜刮取物以及肝臟、脾臟組織進行涂片，經(jīng)過革蘭氏染色使用顯微鏡檢查，結果看到一種革蘭氏陽性粗大桿菌，存在夾饃，呈單個或者呈雙排列，部分形成芽孢，位于菌體的一端。

魏氏梭菌油鏡圖片（1）

魏氏梭菌油鏡圖片（2）

4.2 分離培養(yǎng) 在無菌條件下取病牛腸內(nèi)容物，置于80℃溫水中進行15min水浴，接著以2000r/min的速度進行15min離心，取上清液分別接種到厭氧肉肝湯和麥康凱瓊脂平皿，置于37℃溫箱中進行20-24h培養(yǎng)，接著在綿羊鮮血瓊脂平板和普通瓊脂平板上進行劃線接種，放在37℃溫箱內(nèi)進行分離培養(yǎng)。同時，取各器官在肉肝湯內(nèi)接種，在厭氧條件下進行培養(yǎng)，再取培養(yǎng)物在綿羊鮮血瓊脂平皿上接種進行培養(yǎng)，然后挑取單個菌落用于純培養(yǎng)，并進行染色鏡檢。結果發(fā)現(xiàn)，麥康凱瓊脂平皿上沒有長出細菌，而厭氧肉肝湯經(jīng)過18h會變成均勻的混懸液，并在液面上方接近液體測試管壁上附著有長度為2cm的石蠟。瓊脂平板上長出較大的灰白色圓盤形菌落，表面濕潤、光滑，部分存在放射狀條紋，血瓊脂平板上出現(xiàn)溶血環(huán)。細菌純培養(yǎng)后觀察形態(tài)，可發(fā)現(xiàn)呈革蘭氏陽性粗大桿菌，少數(shù)形成芽孢。

4.3 魏氏梭菌牛乳發(fā)酵試驗（1）樣品：解剖病死牛取腸道組織。（2）試驗試劑和儀器：恒溫培養(yǎng)箱、無菌試管、蠟塊(普通蠟燭即可)、全脂牛奶(鮮奶、全脂奶粉均可)、酒精燈。（3）試驗步驟：①取1/3試管鮮乳，將蠟塊放入試管，高壓滅菌（也可用酒精燈加熱融化），蠟塊漂浮于乳汁上方，形成厭氧環(huán)境。②當試管溫度降至40℃度左右，將組織塊放入試管鮮乳中，試管口用棉塞塞住。③將處理好的試管置試管架上放入37℃恒溫箱中培養(yǎng)8～10h(有些可5～6h便可看到暴烈現(xiàn)象)。（4）試驗結果判定：含魏氏梭菌的組織在牛乳培養(yǎng)基中呈“暴烈發(fā)酵”，即接種培養(yǎng)8～10h后牛乳被酸凝，同時產(chǎn)生大量的氣體，使凝塊變多孔的海綿狀，嚴重時被沖成數(shù)段甚至噴出試管外。

5 診斷結論

實驗室通過涂片直接和分離培養(yǎng)染色鏡檢，都觀察到了典型的魏氏梭菌桿菌；魏氏梭菌牛乳發(fā)酵實驗，產(chǎn)生了強烈的“暴烈發(fā)酵”。結合臨床癥狀和病理變化，筆者診斷發(fā)生在本市耀州區(qū)五臺畜牧養(yǎng)殖公司奶牛場的16頭奶牛死亡（11頭猝死）為魏氏梭菌病。導致發(fā)病的主要原因，一是環(huán)境衛(wèi)生差，管理粗放，生物安全意識淡??；二是頻繁更換青貯飼料，加之氣候突變，增大了奶牛應激反應；三是奶牛疫病綜合防控設施不全。

6 治療

確定病因后，筆者對8頭病牛實施了隔離治療，主要是鎮(zhèn)靜、抗菌消炎和強心。同時，配合中藥方“黃芩黃芪解毒湯”加減，加水煎煮后給病牛灌服，2次/d，連續(xù)3～5d。個別病牛心臟衰弱，則皮下注射25%的安鈉咖；對嚴重脫水病牛，則靜脈滴注由5%葡萄糖鹽水，并配合使用氨地塞咪松、維生素B6、維生素C、芐青霉素，連續(xù)使用3d；對出現(xiàn)興奮癥狀的病牛，則給其灌服水合氯醛溶液，必要時間隔4h重復1次。為避免繼發(fā)感染，對病?；旌献⑸滏溍顾?、氨芐青霉素、磺胺藥，2次/d，連續(xù)使用3d。對病死牛進行無害化處理，且墊草、糞便等污物集中堆積進行發(fā)酵；用0.3%過氧乙酸對牛欄和器具進行消毒，用5%來蘇爾浸泡、刷洗料槽、水槽等，同時對牛舍及周圍環(huán)境進行徹底清掃，并用2%石灰水消毒。牛群穩(wěn)定后，對所有牛實施了魏氏梭菌疫苗免疫。

7 預防措施

7.1 加強飼養(yǎng)管理 首先要根據(jù)奶牛生長、發(fā)育、生產(chǎn)、繁殖等不同階段的飼養(yǎng)標準提供優(yōu)質(zhì)科學的全價配合飼料，嚴禁飼喂發(fā)霉、腐敗、劣質(zhì)飼料。同時要特別注意精粗飼料搭配，保證提供適量的青干草?？捎胮H試紙檢驗牛尿液，當牛尿液pH＜8.0時，就要考慮是否精料過多，粗料不夠。如果沒有其他原因，可在精料中加入1.5%～2.0%的小蘇打粉進行應急調(diào)整，同時加喂青干草，直至將尿液pH調(diào)整并穩(wěn)定在8.0～8.2之間。

7.2 注意衛(wèi)生消毒 魏氏梭菌廣泛存在于自然界，一般消毒藥均可殺死本菌繁殖體，但芽孢抵抗力較強，95℃需兩個0.5h才能殺死。為了有效殺滅魏氏梭菌，奶牛飼養(yǎng)場戶要堅持各項衛(wèi)生防疫制度，保持牛場清潔干燥，及時清掃糞便，定期進行徹底消毒，場地、用具、設施要經(jīng)常用火堿、石灰水、漂白粉等消毒處理，病死牛及其分泌物、排泄物一律燒毀或深埋，做無害化處理。

7.3 進行疫苗接種 發(fā)生過本病或飼養(yǎng)環(huán)境不太好的奶牛飼養(yǎng)場戶，可考慮進行魏氏梭菌疫苗免疫。免疫時間、劑量及方法要參照選用的魏氏梭菌疫苗說明書。