牛結核病防控技術研究進展

努爾拜合提·努爾旦 加伊娜古力

（1.新疆畜牧科學院獸醫(yī)研究所（新疆畜牧科學院動物臨床醫(yī)學研究中心），新疆烏魯木齊 830011；2.新疆維吾爾自治區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆烏魯木齊 830011）

伴隨著牛結核病控制與根除目標實施后，牛結核病防控技術有所成就?，F階段，傳統(tǒng)的單一皮試法已經難以達到高標準性要求；隨之而來的是皮試法、IFN-γ體外釋放、ELISA抗體檢測、膠體金抗體檢測。根據目標實施后，不同國家結合本地區(qū)病情風險狀態(tài)與發(fā)生率選擇適合的檢測方法，防止錯殺隱性個體，效果顯著。

1 牛結核病檢測技術

1.1 IFN-γ體外釋放法

該方法是在血液檢測的實驗室環(huán)境下的檢測方法，其流程為：第一，獲取抗凝全血并和抗原展開共孵育，刺激活化的T淋巴細胞產生IFN-γ；設置植物刺激素與PBSS刺激的陰性對照。第二，獲取上層血漿且通過夾心ELISA方法檢測IFN-γ。現階段，已經有60%的國家紛紛通過平行試驗或系列試驗，即：平行試驗通過皮試方法展開牛群檢查，檢查結果呈現陰性的牛再次通過IFN-γ體外釋放方法重新檢測；若有一項試驗為陽性即為感染。系列試驗則是通過皮試方法進行牛群檢測，呈現陽性的牛群通過IFN-γ體外釋放再次檢測，兩種檢測全部為陽性即為陽性。但是要注意二次檢測時間間隔應達到10d，降低兩次檢測對結果的影響。

1.2 皮試法

皮試方法在牛結核病診療中一直都是OIE官方推薦的標準方法，其中包含單皮試方法與比較皮試法。參照OIE推薦指標，皮試法內PPD-B與PD-A注射劑量不可低于2000IU。如果采取比較皮試法需要注射兩種結核菌素，注射位置應保持一定距離。我國對皮試法的判斷標準為：在局部出現炎性反應，皮后差大于4mm即為陽性。炎性反應不顯著，2mm<皮厚差<4mm后，疑似反應。無炎性反應，皮厚差<2mm后判斷為陽性。盡管判斷為疑似反應的牛，在初次檢測60d后再次檢測，如果仍然為疑似反應，則間隔60d后再次檢測若仍然疑似反應，應診斷為陽性。

1.3 抗體檢測方法

第一，ELISA抗體檢測。該種檢測方法也是現階段牛結核病檢測輔助方法，具有操作簡便的優(yōu)勢，選擇具有高免疫原性的蛋白作為抗原從而提升檢測精準度。例如：把MPB70-MPB83-CFP10-ESAT-6蛋白串聯作為抗原分析，構建的ELISA抗體檢測和細菌培養(yǎng)符合率達到78%。第二，膠體金抗體檢測。該種方法是在免疫層析技術的抗體檢測，在敏感性與特異性上較低。據調查顯示，在數百份細菌培養(yǎng)陽性樣本中，膠體金法的陽性檢出率在46%，161分細菌培養(yǎng)陰性樣本內，膠體金方檢測陽性檢出率為48%。不過，膠體金法的顯著特征是方便、快速，只需10min就能夠看出效果，適用于欄圈旁操作。

2 牛結核病防治中檢測技術的使用

2.1 抗體法和IFN-γ體外釋放法的結合

已經感染結核病的牛群，一些國家會選擇把IFN-γ體外釋放方法和抗體檢驗展開平行試驗。例如：韓國使用抗體檢測展開根除較為成功，牛結核病控制與預防方案有明顯的完善。從較早皮試法治抗體檢測，以及當前抗體檢查的和IFN-γ體外釋放的結合利用。首先，通過抗體檢測進行牛群檢查，對陽性個體展開IFN-γ體外釋放方法實驗檢測，消除陽性個體盡可能地降低錯殺率。

2.2 皮試法

愛爾蘭通過皮試法進行牛結核病檢測，政府有關獸醫(yī)職能部門與私營單位共同通過單一的比較皮試方法進行牛群檢驗。陽性牛若出現應立即殺滅，控制其移動；同圈牛展開復查并禁止貿易。定期對牛群展開檢測，直到全部牛群在持續(xù)2次檢測內全部為陰性。

2.3 高敏感度方法使用野生動物結核病檢測

據調查顯示，我國有三分之一的牛結核病防控和野生動物結核病有著密切聯系，例如：南非水牛、梅花鹿、新西蘭負鼠，它們都是牛分枝桿菌的宿主攜帶著結核菌進而也是其重要傳染體。各國家對于野生動物結核病檢測使用方法不同，例如：澳大利亞使用單一皮試法，增加PPD用量；愛爾蘭則使用比較皮試法進行牛結核病檢測。并且不同國家有著不同的判斷方法。不過，因為野生動流動性強、基數大進行全部檢測與免疫是不可能，盡管已經有國家實施野生動物結核病免疫。但是，仍然難以確保野生動物免疫成功。所以，野生動物結核病依然是疫病控制的主要問題。

3 結語

現階段，國內牛結核病判斷是根據結核菌素皮試方法，牛一旦檢測為陽性應立即撲殺。不過，由于動物數量龐大，撲殺投入較大，皮試方法特異性低，一些養(yǎng)殖戶撲殺后效果不明顯。因此，落實具有較大難度。IFN-γ體外釋放方法也是當前較為成熟的技術，檢測更加精準，降低誤殺率，所以推薦使用單皮試法與IFN-γ體外釋放方法結合檢測。首先通過單皮方法檢測，陽性牛再次通過IFN-γ體外釋放檢測，若全部為陽性應展開撲殺。針對已經暴露牛群則需要使用兩種方法平行檢測，反應陰性牛使用IFN-γ體外釋放檢測，若為陰性即為健康牛。反之，應及時隔離。此外，也要定期進行野生動物與屠宰場牛結核病監(jiān)督管理。

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