薄層色譜技術(shù)在中藥檢驗(yàn)中的應(yīng)用

向金蓮 王 偉 任飛宇

（云南省食品藥品監(jiān)督管理局藥品和醫(yī)療器械審評中心，云南 昆明 650000）

薄層色譜鑒別法（TLC）是在20世紀(jì)20年代發(fā)展起來的，主要用于中藥快速分離與定性分析[1]。該技術(shù)具有分離、鑒定雙重功能，而且操作簡便、直觀性強(qiáng)。該技術(shù)的主要原理是將待測樣品溶液點(diǎn)在薄層板上，在展開容器內(nèi)利用展開劑展開，然后將待測樣品中的相關(guān)成分分離開來。然后，將得到的色譜圖與相關(guān)對照物按照標(biāo)準(zhǔn)的色譜圖進(jìn)行對比分析。同時(shí)，也可利用薄層掃描儀掃描進(jìn)行鑒別或含量測定。近年來隨著科技的快速發(fā)展，薄層色譜法得到了極大的發(fā)展，涌現(xiàn)出不少新技術(shù)。本文主要對這些技術(shù)在中藥材檢驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)行簡要綜述。

1 高效薄層色譜法及其應(yīng)用

該技術(shù)中所應(yīng)用的薄板是采用顆粒較細(xì)的吸附劑利用噴霧法制成的，具有涂層均勻、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)。點(diǎn)樣配備了新裝備，因此，可自動(dòng)或半自動(dòng)操作。吸附劑在疏水與親水方面的性能進(jìn)行了改進(jìn)，可完成正相薄層色譜分離，還能完成反相薄層色譜分離。這極大提高了色譜的選擇性。展開方式更加多元化，不僅能實(shí)現(xiàn)普通TLC樣的直線展開，還能實(shí)現(xiàn)向心式展開或圓心式展開。由于對點(diǎn)樣技術(shù)與板計(jì)算進(jìn)行了改進(jìn)，極大提高了對藥材的檢測靈敏度，分離能力也明顯提高。同時(shí)，這還繼承了TLC在敞開式床上分離的有關(guān)優(yōu)勢，包括同步檢測功能，逐步展開，避免中毒等。HPLTC技術(shù)除了用于藥材的定性分析，還可用于藥材的定量分析。目前，主要應(yīng)用于對生物堿、黃酮類物質(zhì)的檢測與分析。張尊聽等利用HPLTC技術(shù)檢測了野葛根中游離葛根素與總葛根素的含量[2]。楊小明等利用反相高效薄層色譜技術(shù)對銀杏葉石油醚提取物進(jìn)行分離，得到了純度較高的聚戊烯醇同系物的相關(guān)混合物[3]。米莉莉等利用HPLTC掃描技術(shù)對比分析了天然蟲草與人工蟲草菌絲體中和苷類有效成分的含量。同時(shí)，他們還得到了不同蟲草樣品的熒光淬滅薄層色譜指紋圖譜[4]。在此技術(shù)的基礎(chǔ)上，伍慶發(fā)現(xiàn)了如何快速檢測知母藥材中菝葜皂苷元的方法[5]。張建生等運(yùn)用該技術(shù)對麻黃所含的生物堿類化合物進(jìn)行了鑒別，同時(shí)，分離出6種生物堿[6]。梁乾德等綜合運(yùn)用3種檢查方法對四物湯中C1、C2、C3部位以及四味單藥相應(yīng)部位進(jìn)行了分析對比。其中，檢查方法包括HPTLC、高效液相色譜法、電噴霧離子化質(zhì)譜法[7]。上述研究結(jié)果證實(shí)高效薄層色譜法在測定中藥成分方面具有諸多優(yōu)勢，不僅分離效率高，而且穩(wěn)定性與重現(xiàn)性均很好。因此，此法可用于中藥材質(zhì)量控制與含量測定研究中。

2 反相薄層色譜法及其應(yīng)用

反相薄層色譜法（RP-TLC）中的固定相采用的是經(jīng)烷基化修飾的硅膠，基本都是被化學(xué)鍵和在載體物質(zhì)上。這不是機(jī)械覆蓋在它的上面，制備過程非常復(fù)雜，不過斑點(diǎn)擴(kuò)散小，而且分離效果高?；瘜W(xué)鍵合相硅膠的硅烷化程度，為分離提供選擇性。因此，我們可根據(jù)需要挑選合適的固定材料，獲得最好的分離效果。該技術(shù)所用的展開劑比較簡單，通常選用水、甲醇、乙腈等溶劑。若有必要還需采用至少2種溶劑的混合展開劑。

張子忠等對北沙參成分進(jìn)行了檢測，最終得到了8個(gè)主要譜峰。同時(shí)，他們還定性研究了歐前胡素成分。實(shí)驗(yàn)中所運(yùn)用的展開劑為甲醇與水，比例為7∶3，并選用了甲基鍵合硅膠GF254板[8]。蘭亦青等通過對白芍中的有效成分進(jìn)行檢測分析，分離出芍藥苷、丹皮酚、苯甲酸3種成分。實(shí)驗(yàn)中運(yùn)用了RP- C18F254 高效反相薄層板，選用水位溶劑調(diào)節(jié)劑，同時(shí)，將0.1%TBABr加入水中，作為離子對試劑[9]。OhnoT借助該檢測技術(shù)對人參、紅參中人參皂苷Rgl進(jìn)行了鑒定，同時(shí)，還鑒定了五味子中的五味子素，梔子中的梔子苷，葛根中的葛根素，龍膽與日本龍膽中含有的龍膽苦苷等成分[10]。

3 假相薄層色譜法及其應(yīng)用

該檢測技術(shù)中采用的流動(dòng)相并非有機(jī)溶劑，而是環(huán)糊精的水溶液與低濃度的表面活性劑。其中，所用的固定劑多是聚酰胺薄膜。該檢測技術(shù)能夠?qū)⒁恍┎蝗苡谒奈镔|(zhì)以及芳烴異構(gòu)體進(jìn)行有效的分離，同時(shí)，還能檢測藥物中含有的一些微量雜質(zhì)，并能進(jìn)行體內(nèi)藥物分析。

戈早川等通過實(shí)驗(yàn)成功分離出黃連及相關(guān)制劑中的組分，主要有藥根堿、小檗堿、巴馬汀。實(shí)驗(yàn)所用展開劑是按照9∶1比例配制的2%CPC-醋酸乙酯，采用聚酰胺薄膜。此外，他們還建立了一種膠束薄層掃描法能同時(shí)測定四種成分[11]。

4 微乳薄層色譜法的應(yīng)用

有機(jī)溶劑是經(jīng)典薄層色譜法中常用的一類展開劑。近年來隨著技術(shù)的發(fā)展，以微乳為展開劑的薄層色譜研究有所發(fā)展。微乳（microemulsion，ME）的主要成分是乳化劑、助乳化劑、水相以及油相。這些成分共同構(gòu)成了光學(xué)上各向同性，熱力學(xué)溫度的液-液分散體。將這些組分合理搭配就能形成均勻透明的穩(wěn)定體系或微呈乳光的穩(wěn)定體系。將微乳作為流動(dòng)相的色譜被稱為微乳色譜。

崔淑芬等通過該技術(shù)鑒別了3種甘草，分別為光果甘草、烏拉爾甘草、脹果甘草。他們將11%甲醇，2.4%正庚烷、0.23 mmol/LSDS配制成微乳[12]?？导兊韧ㄟ^該技術(shù)成功分離出黃酮類的有效成分，實(shí)驗(yàn)所采用的固定相為聚酰胺薄膜，流動(dòng)相采用SDS-正丁醇-正庚烷-水微乳液。其中，SDS有6種可用，包括油包水（W/O）型、雙連續(xù)型（W/O-O/W）及水包油（O/W）型，主要區(qū)別在于含水量不同[13]。展開劑選用含水量75%（O/W型）微乳液-甲酸，按比例9.5∶0.5配制。此外，他們還對槐米、黃芩等7種中藥材與中藥飲片、雙黃連口服藥等7種中成藥的成分進(jìn)行了分離測定，取得了較好的效果[14]。

5 薄層色譜技術(shù)的應(yīng)用前景

由于薄層色譜技術(shù)在中藥材、中藥成方制劑中有效成分的定性鑒別專屬性強(qiáng)，使用設(shè)備簡單，易于操作，在目前的藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)定性鑒別中（如中國藥典和國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)），已大大地超過了顯微鑒別、理化鑒別和光譜鑒別。自20世紀(jì)80年代以來，薄層技術(shù)在色譜板、點(diǎn)樣技術(shù)、展開技術(shù)方面獲得了快速發(fā)展，加之的日益規(guī)范化，儀器設(shè)備精密度的提高，在中藥檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用[15]。目前，該技術(shù)主要被用于對中藥材及相關(guān)中藥制劑的定性定量分析。若繼續(xù)加強(qiáng)這方面技術(shù)的研究，薄層色譜技術(shù)將會(huì)有更好的應(yīng)用前景。

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