小鼠cyclinA2正義和反義真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定

秦文華　付春景

[摘要] 目的 構(gòu)建小鼠cyclin A2的正義和反義真核表達(dá)載體。 方法 采用小鼠胚胎組織取材，提取總RNA。設(shè)計引物，采用RT-PCR方法擴(kuò)增小鼠cyclin A2 mRNA得到cyclin A2的DNA，將此DNA插入pGEM-T載體，轉(zhuǎn)化入JM109感受態(tài)細(xì)菌。將鑒定得到的重組質(zhì)粒進(jìn)行擴(kuò)增，EcoRⅠ酶切后，回收cyclin A2目的片段亞克隆入pcDNA3.1真核表達(dá)載體。酶切篩選鑒定重組的真核表達(dá)載體pcDNA3.1-cyclin A2。 結(jié)果 將小鼠基因的開放閱讀框（ORF）重組到真核表達(dá)載體pcDNA3.1內(nèi)，用EcoRⅠ酶切重組質(zhì)粒后可得到一接近1660 bp的DNA條帶，核酸測序證實(shí)和GenBank所公布序列相符。HindⅢ酶切鑒定重組質(zhì)粒后，證明分別為正向和反向插入載體的質(zhì)粒。DNA測序證明構(gòu)建的真核表達(dá)載體pcDNA3.1-cyclin A2的序列是正確的。 結(jié)論 成功構(gòu)建了小鼠cyclin A2的正義和反義真核表達(dá)載體。

[關(guān)鍵詞] 細(xì)胞周期蛋白A2；正義；反義；真核表達(dá)載體

[中圖分類號] R346[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1673-9701（2012）31-0001-03