保泰松糖衣片劑中保泰松含量測定的高效液相色譜法改進

孫婷，張菁

（河北省藥品檢驗研究院，河北石家莊050011）

保泰松又名布他酮，屬非甾體抗炎藥[1]，主要用于治療類風濕關(guān)節(jié)炎、風濕性關(guān)節(jié)炎及痛風，也可用于治療絲蟲病急性淋巴管炎。保泰松通過肝內(nèi)代謝，代謝產(chǎn)物為羥基保泰松，仍有活性。保泰松的不良反應發(fā)生率較高[2－4]，其中還出現(xiàn)了服用保泰松導致兒童中毒的實例[5]，其代謝產(chǎn)物羥基保泰松也曾在英國被吊銷生產(chǎn)許可執(zhí)照[6]。而保泰松片劑的質(zhì)量標準多年未提高，現(xiàn)行質(zhì)量標準中保泰松片的含量測定方法仍為易受包衣顏色、檢測環(huán)境干擾的酸堿容量分析法[7]。文獻[8－16]報道，要保證質(zhì)量，既要考慮避免對色譜柱造成損害，又要保證能檢測到保泰松的已知雜質(zhì)，以及已知雜質(zhì)和保泰松主峰是否能有效分離。本研究中選擇乙腈－乙酸鈉緩沖液系統(tǒng)作為流動相，可有效檢測保泰松的已知雜質(zhì)，且已知雜質(zhì)和保泰松主峰能有效分離，能準確地檢測保泰松的有效含量。該方法靈敏度強，專屬性好，精密度高，重復性良好，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀，包括G1311C四元泵，G1329B自動進樣器，G1316A柱溫箱，G1314紫外可變波長檢測器，Agilent 1260 EZChrom化學工作站（美國Agilent公司）；XS105型電子天平（瑞士梅特勒－托利多公司）；KQ5200DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

保泰松對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號為100481－200601，含量為99.9%，使用前不需干燥)；保泰松雜質(zhì)B(批號為160523)、C(批號為160527)對照品(TPC公司)；保泰松原料藥(JH公司，批號為BTZ2016490)；保泰松片（廠家A，批號為16080921，16100621，16111121，規(guī)格為每片0.1 g）；乙腈為色譜純(Fisher Scientific公司）；水為超純水，冰醋酸為分析純，均由天津市風船化學試劑科技有限公司提供；醋酸鈉（分析純，天津市贏達稀貴化學試劑廠）。

2 方法及結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：AgilentEclipseXDB－C18柱（250mm×4.6mm，5 μm）；流動相：醋酸鈉緩沖液（取醋酸鈉2.72 g，加水700 mL溶解，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH至4.1，加水至1 000 mL，搖勻）－乙腈（30∶70，V／V）；檢測波長：240 nm；柱溫：30℃；流速：1.0 mL／min；進樣量：20 μL。

2.2 溶液制備

對照品溶液：取保泰松對照品100 mg，精密稱定，置10 mL容量瓶中，加乙腈溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為10 g／L的對照品貯備液。精密量取上述貯備液1 mL，置100 mL容量瓶中，加乙腈溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。

供試品溶液：取本品20片，去糖衣，研細，精密稱取細粉適量（約相當于保泰松0.1 g），置10 mL容量瓶中，加乙腈適量，振搖使其溶解，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，濾過，得供試品貯備液。精密量取供試品貯液5 mL，置500 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。

空白輔料溶液：取生產(chǎn)廠家處方中的所有輔料適量，精密稱定，按供試品溶液的制備方法操作，制備，即得。

2.3 方法學考察

系統(tǒng)適用性試驗：取保泰松雜質(zhì)B、雜質(zhì)C各5 mg，精密稱定，精密量取供試品貯備液0.5 mL，置50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，精密量取上述溶液2.5 mL，置10 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。取系統(tǒng)適用性試驗溶液及空白輔料溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，見圖1?？梢?，保泰松峰保留時間約為24 min，雜質(zhì)B峰保留時間約為13 min，雜質(zhì)C峰保留時間約為18 min。保泰松與雜質(zhì)C、雜質(zhì)C與雜質(zhì)B相互之間的分離度均大于2.0，理論板數(shù)按保泰松峰計算應不低于3 000。在該色譜條件下，待測成分峰與溶劑及其他雜質(zhì)峰分離良好，輔料對測定無影響。

線性關(guān)系考察：精密量取對照品溶液0.10，0.25，0.50，1.00，2.00，3.00 mL，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。以待測成分質(zhì)量濃度（X，g／L）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y＝160 007 176 X＋445 888，r＝0.999 9（n＝6）。結(jié)果表明，保泰松檢測質(zhì)量濃度在0.01～0.30 g／L范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密量取對照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續(xù)進樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果保泰松峰面積的RSD為0.41%（n＝6），表明儀器精密度良好。

圖1 高效液相色譜圖

穩(wěn)定性試驗：精密量取供試品溶液（批號為16080921）適量，分別于室溫下放置，于0，1，2，4，6，8 h時按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積。結(jié)果保泰松峰面積的RSD為0.67%（n＝6），表明供試品溶液在室溫下放置8 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復性試驗：取同一批（批號為16080921）樣品適量，共6份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并按外標法計算樣品含量。結(jié)果保泰松的平均含量為97.69%，RSD為0.88%（n＝6），表明方法重復性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為16080921）100 mg，精密稱定，共9份，各置10 mL容量瓶中，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的保泰松對照品，依法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率。結(jié)果見表1。

表1 保泰松加樣回收試驗結(jié)果(n＝9)

2.4 樣品含量測定

各取3批樣品適量，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進樣測定，記錄峰面積，并計算保泰松的含量。結(jié)果批號分別為16080921，16100621，16111121的樣品中保泰松的平均含量分別為97.71%，97.80%，97.32%，RSD分別為0.46%，0.51%，0.62%（n＝3）。

3 討論

3.1 含量測定

隨著藥品檢驗技術(shù)的發(fā)展，方法適用性指標越來越受到關(guān)注，越來越多的不良反應事件也讓公眾的目光聚焦到藥品安全性指標的控制是否完善上。2015年版《中國藥典（二部）》中質(zhì)量標準在含量測定項下增加了系統(tǒng)適用性試驗。是否能檢測出已知雜質(zhì)，且主成分是否能與已知雜質(zhì)達到良好的分離效果，最能表明質(zhì)量標準是否對安全性指標有良好把控。因此，含量測定的檢測方法不應僅停留在檢測出主成分上。本研究中改進了保泰松含量測定的檢測方法，能夠更加準確、有效地檢驗保泰松片劑的主成分。采用高效液相色譜法，保泰松含量結(jié)果較原酸堿滴定容量法測定結(jié)果略高2%，也驗證了原酸堿滴定容量法易受包衣顏色干擾，而使突躍終點觀察前置，造成檢測結(jié)果不夠準確。本研究中方法分離效果良好，能夠滿足檢驗需求，靈敏度高，準確度好。

3.2 耐用性考察

曾考察4種不同廠家的色譜柱對保泰松片樣品進行耐用性試驗。結(jié)果顯示，采用4種不同廠家的色譜柱，主峰與已知雜質(zhì)分離度均大于1.5，且按保泰松峰計，理論板數(shù)均大于3 000，峰純度良好。經(jīng)方法學考察表明，擬訂色譜條件具有良好的系統(tǒng)適用性，適合測定保泰松片中保泰松的含量，且能較好地控制其質(zhì)量。

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