甲炎康泰顆粒制備工藝研究

石浩霞，徐云玲，解生旭，徐雅娟，李 博，高佳琪，魏 穎，王東超，徐暾海*，劉銅華

（1.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100029 ；2.中醫(yī)養(yǎng)生學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100029；3.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院，長(zhǎng)春 130021）

橋本氏甲狀腺炎（Hashimoto’s thyroiditis，HT）又稱慢性淋巴細(xì)胞性甲狀腺炎[1-2]，中醫(yī)屬“癭病”范疇[3]，病機(jī)始于情志不暢、肝郁氣滯，日久則血行不暢而致血瘀或氣郁化火，火熱灼津，肝陽(yáng)上亢，為本虛（脾虛等）標(biāo)實(shí)（氣滯、痰濁、血瘀等）[4]?，F(xiàn)代醫(yī)家林蘭教授[5]認(rèn)為，甲狀腺為奇恒之腑，助肝疏泄，助腎生陽(yáng)。中醫(yī)根據(jù)病程發(fā)展所對(duì)應(yīng)的臨床表現(xiàn)將其分為早、中、晚3個(gè)時(shí)期[6]，以辨證論治、多層次論治，獲得理想療效；古代對(duì)于癭病的治療以“順氣為先”，古今醫(yī)家以之為訓(xùn)，采用疏肝理氣法消退甲狀腺腫大及結(jié)節(jié)以改善患者自覺(jué)癥狀[7]。甲炎康泰顆粒由北柴胡、郁金、夏枯草、穿山龍等九味藥組成，是按照中藥新藥研發(fā)要求研制的6類新藥，為臨床經(jīng)驗(yàn)方。具有疏肝解郁、化瘀祛痰、軟堅(jiān)散結(jié)之功效，主治肝郁氣滯、痰濁瘀阻。本文對(duì)其制備工藝做如下研究。

1 儀器與試藥

島津LC-2010C高效液相色譜儀（日本）；Thermo C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱（美國(guó)）；AG245型分析天平（0.01 mg，瑞士）；KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。藥材購(gòu)自北京市雙橋燕京中藥飲片廠；迷迭香酸（批號(hào)111871-201505）、柴胡皂苷A（批號(hào)110777-201510）、柴胡皂苷D（批號(hào)110778-201510），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈、甲醇，色譜純，霍尼韋爾；三氟乙酸（TFA），分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；雙蒸水為實(shí)驗(yàn)室自制。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝研究 方中夏枯草活性成分為三萜及甾體皂苷類，玄參主含環(huán)烯醚萜及苯丙素類，黃芪含多糖及三萜皂苷類，烏梅含有機(jī)酸類。結(jié)合2015版《中國(guó)藥典》一部各藥[浸出物]項(xiàng)下規(guī)定[8]，確定以上4味藥用水煎煮法提??；柴胡主含皂苷類成分，郁金含姜黃素類成分，穿山龍含甾體皂苷，浙貝母含生物堿，山慈菇含木質(zhì)素類。結(jié)合藥典[8]確定以上5味藥采用乙醇回流法提取。

經(jīng)預(yù)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，水提工藝影響因素主要是加水量、提取時(shí)間、提取次數(shù)（表1）；醇提工藝影響因素主要是乙醇濃度、加醇量、提取時(shí)間、提取次數(shù)（表2）。

2.1.1 水提工藝設(shè)計(jì) 稱取處方量藥材共9份，按照L9(34)正交設(shè)計(jì)表依次試驗(yàn)，以出膏率和迷迭香酸提出量為指標(biāo)，進(jìn)行方差分析。

表1 水提因素水平表

表2 醇提因素水平表

1） 色譜條件：甲醇-0.1%TFA水，梯度洗脫：0～60 min，20%→40%甲醇[9-10]；流速1 mL/min，柱溫35 ℃；UV檢測(cè)器-330 nm。2）對(duì)照品溶液的制備：精密稱定迷迭香酸對(duì)照品5 mg，甲醇定容至5 mL，搖勻，得對(duì)照品儲(chǔ)備液。3）供試品溶液的制備：正交試驗(yàn)所得膏粉各2 g，精密稱定，置密塞錐形瓶，精密加稀乙醇50 mL，稱重。超聲30 min（功率100 W），放冷，再次稱重，稀乙醇補(bǔ)足失重。濾過(guò)，用20 mL稀乙醇分兩次洗滌藥渣和器皿，合并至濾液，蒸干，稀乙醇定容至10 mL。4）測(cè)定法：對(duì)照品進(jìn)樣量為5 μL；供試品進(jìn)樣量為10 μL。

結(jié)果分析：3個(gè)因素對(duì)提取結(jié)果的影響順序?yàn)椋珻＞B＞A，A2＞A3＞A1，B3＞B1＞B2，C3＞C2＞C1，因此，最佳水提工藝為A2B3C3，即加15倍量的水，提取3次，每次提取2 h。

2.1.2 醇沉工藝研究 取5倍處方量藥材提取，提取液濃縮至相對(duì)密度為1.05（50～60 ℃），等分為4份，分別加乙醇至含醇50%、60%、70%、80%，沉淀過(guò)夜，上清液蒸干，考察指標(biāo)為出膏率和迷迭香酸提出量。

1）色譜條件：甲醇-0.1%TFA水，梯度洗脫：0～35 min，20%→40%甲醇。2）供試品溶液的制備：取各浸膏1 g，精密稱定，精密加入稀乙醇30 mL，密塞，稱重，超聲處理30 min（功率100 W），放冷，稱重，稀乙醇補(bǔ)足失重，過(guò)0.45 μm濾膜。3） 測(cè)定法：對(duì)照品進(jìn)樣量5 μL；供試品進(jìn)樣量為20 μL。

結(jié)果分析：醇沉實(shí)驗(yàn)應(yīng)選擇出膏率相對(duì)較小，且迷迭香酸提出量最大的條件。綜合分析以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用70%乙醇進(jìn)行醇沉，迷迭香酸提出量最大，因此采用70%乙醇進(jìn)行醇沉。

2.1.3 醇提工藝設(shè)計(jì) 稱取處方量藥材9份，按照正交設(shè)計(jì)表提取，以出膏率和柴胡皂苷A、D提出量為指標(biāo)，進(jìn)行方差分析。1）色譜條件：乙腈-水，梯度洗脫：0～90 min，25%→80%乙腈；流速1 mL/min，柱溫35 ℃；UV檢測(cè)器- 210 nm。2）對(duì)照品溶液的制備：分別精密稱定柴胡皂苷A、D對(duì)照品4、5 mg，甲醇定容至10 mL，搖勻，得混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。3）供試品溶液的制備：取正交醇提各試驗(yàn)所得干浸膏1 g，精密稱定，置密塞錐形瓶，精密加甲醇20 mL，稱重。超聲30 min（功率100 W），放冷，稱重，甲醇補(bǔ)足失重。濾過(guò)，用10 mL甲醇洗滌藥渣和器皿，合并至濾液。蒸干，甲醇定容至5 mL。4）測(cè)定法：對(duì)照品、供試品進(jìn)樣量各15 μL。

結(jié)果分析：按柴胡皂苷A、D的提出總量分析，影響提取因素的順序?yàn)锳＞D＞B＞C，A3＞A2＞A1，B3＞ B1＞ B2，C2＞ C3＞ C1，D3＞ D2＞D1最佳工藝條件為A3 B3C2D3，即最佳工藝為：加6倍量80%乙醇，回流提取3次，每次1 h。

2.2 成型工藝研究

2.2.1 原料藥的制備 取10倍處方量的藥材，按“2.1”項(xiàng)下最佳工藝提取、濃縮、粉碎，過(guò)80目篩備用。

2.2.2 輔料種類的選擇 選擇有助于成型、溶解且吸濕性小的輔料。初步確定以可溶性淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素（MCC）[11-14]等為輔料。以吸濕性、成型性等因素綜合評(píng)分確定最佳輔料種類。綜合評(píng)分[15-16]=（20/最大成型性值）×成型性值+（最小吸濕率值×30）/吸濕率值+（25/最大溶化性值）×溶化性值+（10/最大堆密度值）×堆密度值+（最小休止角值×15）/休止角。

制粒：取過(guò)80目篩的干膏粉13份，每份10 g，0號(hào)不加輔料考察吸濕性，1-12號(hào)物料比按表5加入，混勻，以80%乙醇作為潤(rùn)濕劑制軟材，14目篩制粒，60 ℃干燥2 h（逐漸升溫，及時(shí)翻動(dòng)，避免結(jié)塊），14目篩整粒，60 ℃干燥30 min，即得。

1）成型性的測(cè)定[17]：將制備好的顆粒稱重，分別過(guò)一號(hào)篩、五號(hào)篩，收集能過(guò)一號(hào)篩但不能通過(guò)五號(hào)篩的顆粒，稱重，計(jì)算成型率，結(jié)果見(jiàn)表4。

成型率=過(guò)篩后顆粒質(zhì)量/過(guò)篩前顆粒質(zhì)量×100%。

2）堆密度的測(cè)定：將過(guò)篩后的一定質(zhì)量（m/g）的顆粒放入量筒輕晃均勻，讀出體積（v/mL），計(jì)算堆密度，結(jié)果見(jiàn)表4。

堆密度= m/v。

3） 休止角的測(cè)定：休止角系指粉體堆積成的自由斜面與水平面所形成的最大角，休止角越小，流動(dòng)性越好[18]。本文采用固定漏斗法，將3只漏斗串聯(lián)并固定于坐標(biāo)紙上1厘米處，將顆粒沿漏斗壁倒入漏斗直到藥粉形成的圓錐尖端接觸到漏斗口，從坐標(biāo)紙上測(cè)出圓錐直徑（2R），計(jì)算休止角，結(jié)果見(jiàn)表4。

休止角α = arctg（H/R）。

4） 溶化性的測(cè)定[15]：在干燥至恒重的5 mL離心管中加入精密稱定的樣品顆粒，精密加入沸水5 mL，振搖5 min，4 000 r/min離心15 min，棄去上清液，殘?jiān)?0 ℃下烘干至恒重后精密稱定，計(jì)算溶化率，結(jié)果見(jiàn)表4。

表3 輔料種類考察

溶化率=融化的顆粒質(zhì)量/總質(zhì)量×100%。

5）吸濕性的測(cè)定：將底部盛有NaCl過(guò)飽和溶液的干燥器在室溫下放置48 h，使其內(nèi)部相對(duì)濕度為75%[19]。精密稱取0.5 g顆粒平鋪于干燥至恒重的稱量瓶中，于60 ℃干燥至恒重，精密稱定后置于干燥器內(nèi)，開(kāi)蓋，于72 h后精密稱定，計(jì)算吸濕率，結(jié)果見(jiàn)表6。

吸濕率=吸濕前顆粒質(zhì)量/吸濕后顆粒質(zhì)量×100%。上述結(jié)果表明，糊精-乳糖（3:1）輔料綜合評(píng)分最高。

表4 不同輔料綜合評(píng)分

2.2.3 輔料用量考察 取干膏粉5份，每份10 g，將上述結(jié)果中制粒最好的輔料（組合），即糊精-乳糖3:1加入，同“2.2.2”項(xiàng)下方法制粒，以成型性為指標(biāo)選擇最佳輔料用量，結(jié)果顯示藥輔比在1:1～1:1.5的范圍內(nèi)，制粒過(guò)程容易，顆粒均勻，成型率最高，實(shí)際擴(kuò)大生產(chǎn)可根據(jù)情況做微調(diào)。

2.2.4 矯味劑用量考察 本方提取物味酸、苦、澀，為改善服用口感，考慮加入矯味劑。本研究選擇阿斯巴甜作為矯味劑[20]，結(jié)果顯示，當(dāng)阿斯巴甜用量為1%時(shí)，口感最佳。

2.2.5 潤(rùn)濕劑考察 以70%、75%、80%、85%、90%、95%濃度的乙醇作為潤(rùn)濕劑進(jìn)行制粒，以成型率為指標(biāo)，結(jié)果顯示，以80%乙醇作為潤(rùn)濕劑，制粒過(guò)程容易，顆粒軟硬程度最適宜，成型率最高。

2.2.6 臨界相對(duì)濕度（CRH）考察 根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定的最佳成型工藝制粒，并在以下不同濕度環(huán)境中使顆粒吸濕至恒重，計(jì)算吸濕百分率，以相對(duì)濕度為橫坐標(biāo)，吸濕百分率為縱坐標(biāo)繪制吸濕曲線，曲線兩條切線的交點(diǎn)處即為臨界相對(duì)濕度[21]。提示顆粒的任何操作環(huán)境相對(duì)濕度不得高于該臨界值。結(jié)果（表5、圖1）顯示，顆粒CRH為78%。

表5 臨界相對(duì)濕度考察

圖1 甲炎康泰顆粒臨界相對(duì)濕度

2.3 結(jié)果 本文通過(guò)正交試驗(yàn)確定了甲炎康泰顆粒的最佳提取工藝，方中夏枯草等4味藥采用水煎煮法提取，最佳工藝為：加15倍量水，提取3次，每次2 h，水提液濃縮至相對(duì)密度1.05，通過(guò)70%醇沉過(guò)夜；柴胡等5味藥采用乙醇回流法提取，最佳工藝為：80%乙醇，加6倍量，提取3次，每次1 h。該工藝可以保證出膏率及相應(yīng)活性成分最大化的提出。

以吸濕性和成型性等為指標(biāo)，本文所得甲炎康泰顆粒的最佳成型工藝為，以糊乳糖3:1作為輔料，藥粉輔料比為1:1.5，加入1%阿斯巴甜作為矯味劑，以80%乙醇作為潤(rùn)濕劑制軟材，該條件下制得的顆粒質(zhì)地均勻、成型性高、溶化性好、吸濕性小，綜合評(píng)分最高且口感最佳。

臨界相對(duì)濕度實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，其CRH為78%。提示通過(guò)該方法制得的顆粒，操作壞境相對(duì)濕度不得高于78%。

3 討論

本方含9味藥，因其有效成分極性各異，溶出率各不相同，因此本文通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)并參考藥典對(duì)不同藥材采用不同的提取方法。其中，柴胡、郁金、穿山龍、浙貝母、山慈菇采用乙醇回流提取法；夏枯草、玄參、黃芪、烏梅等藥有效成分水溶性較好，采用水煎煮法提取。設(shè)計(jì)影響提取率的因素水平，針對(duì)不同提取方法選取不同的指標(biāo)性成分，將提出量作為考察依據(jù)，通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化最佳提取工藝。

成型工藝中，選擇儲(chǔ)存、攜帶、運(yùn)輸和服用較為方便的顆粒劑為本方劑型。初步確定使用糊精、乳糖、微晶纖維素等優(yōu)良的無(wú)糖型輔料作為稀釋劑，以成型性、流動(dòng)性、防潮性、溶化性等為考察指標(biāo)選擇最佳輔料及配比；又因膏粉苦、酸、澀，服用口感不佳，考慮加入矯味劑以期改善味覺(jué)，人工合成的甜味劑用量已受限制，矯味劑的使用趨向于天然化，本研究采用甜度高、用量少、價(jià)格合理的阿斯巴甜（蛋白糖）作為矯味劑，用1%的量即可較好地改善服用口感。最后考察該方法下制備顆粒的臨界相對(duì)濕度值，為擴(kuò)大生產(chǎn)環(huán)境條件提供參考。

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