壯藥滇桂艾納香近十年研究進展

廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院，廣西 南寧 530022

滇桂艾納香為菊科艾納香屬植物假東風草[Blumeariparia(B1．)DC．]的干燥全草，是廣西壯族民間驗方草藥，有活血調(diào)經(jīng)、祛風除濕、止血、利水等作用，用于經(jīng)期提前、產(chǎn)后流血不止、產(chǎn)后浮腫、不孕癥、陰瘡、風濕骨痛等，在廣西尤其是在百色地區(qū)有較長的使用歷史[1-4]。

滇桂艾納香主要分布于廣西西南部(百色、田陽、德保、龍津)、廣東西南部及云南西南至東南部[5]。作為廣西壯瑤重點珍貴中草藥，滇桂艾納香具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。以滇桂艾納香為主要原料的婦血康和伊血安等多種劑型的民族成藥，是我國已批準的治療婦科出血藥物中效果較好、副作用較少的中成藥民族藥品種，并取得顯著經(jīng)濟效益和社會效益。

國內(nèi)外對滇桂艾納香進行了不少研究，筆者簡要概述近10年來國內(nèi)外對滇桂艾納香的現(xiàn)代研究進展，主要包括化學成分、藥理作用、工藝研究、質(zhì)量控制、繁育技術(shù)等，為滇桂艾納香的開發(fā)利用、資源保護提供參考。

1 化學成分

滇桂艾納香中可能含有多肽、還原糖、多糖、苷類、皂苷、鞣質(zhì)、有機酸、黃酮類、酚類、香豆素、內(nèi)酯、揮發(fā)油等多種化學成分[6]。

1.1 黃酮類 滇桂艾納香含有圣草素-7，4′-二甲醚(eriodictyol-7，4′-dimethyl ether)，圣草素-7，3′-二甲醚(eriodictyol-7，3′-dimethyl ethe)，圣草素-7-甲醚(eriodictyol-7-methyl ether)，槲皮素-7，3′，4′-三甲醚(quereetin-7，3，4′-trimethyl ether)，檉柳素(tamarixeti)，鼠李檸檬素(rhamnocitrin)，二氫槲皮素-4-甲醚(taxifolin-4′-methyl ether)等黃酮類化合物[7-8]。

1.2 有機酸類 滇桂艾納香含有丁香酸(syringic acid)、沒食子酸(gallic acid)、香草酸(vanillic acid)、呋哺甲酸(furoic acid)、水楊酸(salicylic acid)、咖啡酸(caffeic acid)等有機酸成分[8]。

1.3 揮發(fā)性成分 滇桂艾納香莖和葉中的揮發(fā)性成分主要為大葉香烯D、香木蘭烯、順-α-沒藥烯、β-蓽澄茄油烯、γ-依蘭油烯和1,2,4a,5,6,8a-六氫-4,7-二甲基-1-(1-甲乙基)-萘，其中倍半萜類化合物含量占揮發(fā)性成分的91%以上[9]。滇桂艾納香超臨界CO2萃取物中揮發(fā)性成分主要有芳樟醇、L-龍腦、3,9-杜松二烯、香樹素-2-氧化物、δ-古蕓烯、丁子香酚、α-石竹烯、香橙烯、愈創(chuàng)木醇、香芹酮、桉葉油醇、十六酸等[10]。

1.4 糖類成分 滇桂艾納香多糖(Blumea ripaia polysaacharide，BRP)分子量為3.3×104Da，結(jié)構(gòu)式為：β-D-Fruf-{2[→1)-β-D-Fruf(2→]n-1}-β-D-Fruf．[11]。滇桂艾納香多糖BRP-0和BRP-1.5主要由鼠李糖、果糖和半乳糖組成[12]。滇桂艾納香水溶性多糖(BRP-B)數(shù)均分子量和質(zhì)均分子量分別為2654和2716 Da[13]。滇桂艾納香寡糖(BROS)分子量為1314，由1個葡萄糖(a-D-Glcp)和7個果糖(β-D-Fruf)組成[14]。

1.5 其他成分 滇桂艾納香含有環(huán)(亮-脯)二肽((L-pro-L-Leu)、(24S)豆甾-4-烯-3-酮((24S)stigmastero1-4-an-3-one)、(24 S)豆甾-4-22-二烯-3-酮((24S)stigmasterol-4，22-dien-3-one)等成分[8]；首個從天然植物(滇桂艾納香)中發(fā)現(xiàn)的被鹵化的氧雜蒽化合物(blumeaxanthene II)[15]。

2 藥理作用

2.1 止血作用 滇桂艾納香水提取物、70%乙醇提物、50%乙醇提取物均有一定的縮短動物出、凝血時間和血漿復鈣時間的作用，其中70%乙醇提取物較其它兩種提取物強，其可明顯縮短小鼠的出血時間、毛細管法凝血時間、玻片法凝血時間并且可顯著縮短家兔體外給藥血漿復鈣時間[16]。

滇桂艾納香可升高大鼠血漿中血栓素(TXA2)的含量,顯著降低大鼠血漿中前列環(huán)素(PGI2)的含量,同時升高TXA2/PGI2值，促進血小板粘附、聚集；可促進子宮內(nèi)膜修復,降低子宮局部一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)含量,升高血管緊張物質(zhì)內(nèi)皮素(ET)含量,收縮血管；可降低中層粘連蛋白(LN)、纖維粘連蛋白(FN)在蛻膜組織中的表達,利于蛻膜排出體外,減少出血時間；可抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹度和角叉菜膠誘發(fā)的大鼠足跖腫脹度,具有較好的抗炎作用[17]。

滇桂艾納香乙酸乙酯提取物(內(nèi)含酚酸類化合物)能縮短小鼠凝血時間和尾巴橫斷面出血時間，其中香草酸減少凝血酶原時間和增強子宮收縮；桂皮酸減少凝血時間和活化部分凝血活酶時間；原兒茶酸減少凝血時間和增加子宮收縮頻率呈劑量依賴性；丁香酸減少活化部分凝血活酶時間；咖啡酸顯著增強子宮收縮；綜上表明，丁香酸、桂皮酸、原兒茶酸具有促凝血活性并以不同機制增強促凝血作用[18]。

滇桂艾納香水溶性多糖(BRP-B)質(zhì)量濃度為6.25×10-2g/L時，凝血時間為248.52 s，凝血時間抑制率達22.42%[13]。

以滇桂艾納香為原料的婦血康顆粒治療功能失調(diào)性子宮出血作用機制是多層次、多途徑、多靶點的止血和調(diào)節(jié)作用：可縮短出血時間、凝血時間、凝血酶原時間(PT)、復鈣時間；具有明顯抗炎作用，降低血管的通透性；能增強子宮收縮而促進子宮內(nèi)膜螺旋動脈的閉合；調(diào)節(jié)下丘腦-腺垂體-卵巢軸，促進卵泡成熟、促進排卵；調(diào)節(jié)子宮局部活性物質(zhì)；具有活血化瘀的作用；可拮抗過量雌激素所致大鼠子宮的異常增生性改變及水鈉潴留[19]。婦血康顆?？赡苁峭ㄟ^改善凝血功能、縮短出血時間、促進卵泡成熟及排卵的作用機制對功能失調(diào)性子宮出血模型大鼠凝血功能及性激素水平產(chǎn)生影響[20]。

2.2 對子宮平滑肌作用 滇桂艾納香水溶性多糖(BRP-B)能明顯增加小白鼠離體子宮平滑肌的收縮頻率[13]。滇桂艾納香初提取物和反滲透截留部分均能顯著增強家兔在體子宮平滑肌的收縮強度，其中反滲透截留部分為收縮子宮平滑肌的有效部位[21]。滇桂艾納香水提液、含藥血清均可顯著提高小鼠離體子宮的收縮頻率，且水提液能提高在體子宮的收縮強度及收縮頻率[22]。

2.3 細胞毒性 被鹵化的氧雜蒽化合物(blumeaxanthene II)在體內(nèi)對人肝癌細胞(Bel-7404 cells)有微弱的細胞毒性[15]。

2.4 急性毒性 滇桂艾納香水提取物的半數(shù)致死量(LD50)為143.1034 g生藥/kg，50%、70%乙醇提取物最大耐受量(MTD)分別259.60 g生藥/kg、309.68 g生藥/kg[23]。

3 工藝研究

3.1 提取工藝研究 滇桂艾納香中綠原酸的最佳提取條件為提取溫度80℃、時間31 min、乙醇濃度53%、固液比為1∶20[24]。滇桂艾納香中原兒茶酸的最佳提取條件為加水煎煮2次，第1次15倍水，煎煮1.5 h，第2次10倍水，煎煮1 h[25]。微波提取滇桂艾納香總黃酮的最佳條件為：乙醇體積分數(shù)42%，固液比1∶20，溫度60℃，提取次數(shù)3次，提取時間7 min[26]。采用超聲波輔助水提取滇桂艾納香中的氨基酸，得到較高的提取率[27]。用微波輔助提取滇桂艾納香多糖(BRP)的最佳提取工藝條件：微波提取時間11.0 min、提取溫度75.0℃、水料比37∶1，采用該工藝條件，提取3次，BRP的提取率達到2.44%[28]。婦血康顆粒提取工藝最佳條件為加水20倍，煎煮1次，時間1.5 h；影響提取的主次因素為加水量>煎煮時間>煎煮次數(shù)[29]。

3.2 分離純化工藝研究 采用717陰離子樹脂分離純化滇桂艾納香中氨基酸的最佳條件為吸附時間6 h、在提取液pH=12時上柱，用氯化銨梯度洗脫，氨基酸的收率可達87.11%，氨基酸純度達到92.12%[28]。HPD100大孔樹脂分離純化滇桂艾納香總黃酮的最佳工藝條件為：上樣液總黃酮濃度為0.75 mg/mL，上樣液pH=4，洗脫溶劑為60%乙醇，上樣液體積為60 mL，洗脫速度為2.5 mL/min，洗脫體積為275 mL，樹脂柱徑高比為1∶8，純化后總黃酮量高達95.05%[30]。

3.3 制劑工藝研究 劉雪萍等[31]采用單因素試驗優(yōu)選滇桂艾納香滴丸的處方和成型工藝，滴丸制備的最佳條件為：基質(zhì)為聚乙二醇4000與聚乙二醇6000(1∶1)，藥物與基質(zhì)的配比1∶2，滴制溫度為80℃，滴速為22～25滴/min，滴距為10 cm，冷凝溫度為10～15℃，冷凝液為二甲基硅油。按最佳工藝條件制得的滴丸丸重差異小、溶散時間短、外觀質(zhì)量好。

4 質(zhì)量控制

4.1 鑒別

4.1.1 薄層鑒別 采用硅膠GF254或硅膠G薄層板、氯仿-醋酸乙酯-丙酮-甲酸(6∶2.5∶2.5∶0.2)等4個不同展開系統(tǒng)，白花九里明(東風草)與滇桂艾納香(假東風草)的水提取液、乙醇提取液、石油醚提取液的薄層色譜在相應(yīng)的位置上均顯相同顏色的熒光斑點；表明白花九里明與滇桂艾納香可能含有相似的成分[32]。采用硅膠G薄層板、氯仿-甲醇-甲酸(16∶2∶0.5)為展開劑、紫外光燈(365 nm)下檢視的色譜條件，4個不同產(chǎn)地的滇桂艾納香乙酸乙酯部位均能檢出木犀草素[33]。以原兒茶酸為對照品，采用硅膠GF254薄層板、氯仿-醋酸乙酯-丙酮-甲酸(6∶2.5∶2.5∶0.4)展開劑、紫外光燈(254 nm)下檢視的色譜條件，對伊血安顆粒中的君藥滇桂艾納香進行鑒別，分離效果好，專屬性強[34]。

4.1.2 光譜鑒別 滇桂艾納香乙醇提取液紫外-可見吸收光譜圖在300 nm和330 nm處的吸收峰較強，可作為其光譜鑒別特征[35]。姜建萍等[36]建立了滇桂艾納香紅外光譜鑒別方法，10批不同產(chǎn)地滇桂艾納香的紅外光譜共有峰5個、匹配度均大于0.9，可用于滇桂艾納香的鑒別。

4.2 檢查 4個不同產(chǎn)地滇桂艾納香乙酸乙酯部位浸膏的水分≤3.59%、總灰分≤2.93%、酸不溶性灰分≤0.34%[33]。

4.3 含量測定

4.3.1 分光光度法 姜建萍等[37-38]采用分光光度法測定不同產(chǎn)地滇桂艾納香及滇桂艾納香乙酸乙酯提取物中總黃酮的含量，以蘆丁為對照品，5%亞硝酸鈉溶液-10%硝酸-4%氫氧化鈉溶液為顯色系統(tǒng)，測定波長為505 nm或510 nm；蘆丁對照品在一定濃度范圍內(nèi)與吸收值呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率及RSD均符合含量測定要求。

4.3.2 高效液相色譜法(HPLC)

4.3.2.1 綠原酸含量測定 RP-HPLC測定滇桂艾納香中綠原酸含量采用C18柱、以0.2%磷酸-乙腈(93∶7)為流動相、檢測波長326 nm、流速1.0 ml/min，分離效果好、沒有干擾，綠原酸濃度在一定范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率及RSD均符合含量測定要求[39]。

4.3.2.2 原兒茶酸含量測定 HPLC測定婦血康顆粒、滇桂艾納香片、婦血康糖漿和伊血安顆粒中原兒茶酸含量[40-42，34]均采用C18柱、流動相采用乙腈-水-醋酸或甲醇-水-醋酸系統(tǒng)、檢測波長256 nm、柱溫25～30 ℃、流速1.0 mL/min，分離效果好，陰性沒有干擾，原兒茶酸進量樣在一定范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率及RSD均符合含量測定要求。

4.3.2.3 原兒茶酸與原兒茶醛含量同時測定 HPLC同時測定滇桂艾納香藥材或婦血康顆粒中原兒茶酸及原兒茶醛含量[43-44]均采用C18柱、流動相采用甲醇-水-醋酸系統(tǒng)、梯度洗脫或轉(zhuǎn)換波長、檢測波長256 nm(原兒茶酸)和280 nm(原兒茶醛)、柱溫為常溫、流速1.0 mL/min，分離效果好、沒有干擾，原兒茶酸和原兒茶醛進量樣在一定范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率及RSD均符合含量測定要求。

4.4 指紋圖譜 Leelakittisin Benjakarn等[45-46]建立了滇桂艾納香及滇桂艾納香水提物的高效液相色譜指紋圖譜鑒別方法。采用Phenomenex@Syner 64 u Polar-RP 80A色譜柱，甲醇-水(用冰乙酸調(diào)pH至2.8)流動相系統(tǒng)，梯度洗脫，檢測波長256 nm，柱溫25℃，流速1 mL/min。12批滇桂艾納香的指紋圖譜中共有特征峰11個，其中原兒茶酸和綠原酸為指標峰，12批的相似度>0.99。

5 繁育和栽培

陳國建等[47]對滇桂艾納香扦插繁殖技術(shù)進行了研究。單一植物生長調(diào)節(jié)劑處理以與萘乙酸(NAA)2.0 mg/L效果最好，插穗成活率為5O.00%，平均生根數(shù)為3.23條，與清水處理的差異達極顯著水平；兩種植物生長調(diào)節(jié)劑組合處理，以NAA2.0 mg/L+吲哚丁酸(IBA) 2.0 mg/L組合處理效果最好，插穗成活率為58.33%，平均生根數(shù)為3.72條，與清水處理的差異達極顯著水平；比較不同老熟度插穗的成活率和生根數(shù)，以老莖最好，其插穗成活率達72.22%，平均每株根數(shù)為3.05條，與中莖、嫩莖的差異均達極顯著水平；春季取枝扦插的效果優(yōu)于秋季，其中以老莖最好，其插穗成活率達73.89%，平均生根數(shù)為3.50條，兩項指標與其他處理的差異均達極顯著水平。

姚紹嫦等[48]以滇桂艾納香的嫩莖段為外植體，采用正交試驗設(shè)計方法優(yōu)化增殖培養(yǎng)基，建立組培快繁體系。0.1% HgCl2溶液滅菌10 min效果最佳；莖段叢生芽誘導培養(yǎng)基以MS+6-芐氨基嘌呤(6-BA)2.0 mg/L+激動素(KT)1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L最佳，誘導率達90%；6-BA是影響增殖的主要因素，達顯著水平，NAA與KT效應(yīng)不顯著；芽增殖的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA0.2 mg/L，增殖系數(shù)為7.12；生根培養(yǎng)基用1/2MS+NAA 0.5 mg/L最好，生根率100%，移栽成活率93.33%。

目前組培繁育技術(shù)較成熟，可以解決種苗問題。但尚未見有規(guī)?；⒒鼗耘嗟膱蟮?。據(jù)筆者了解，近年來，有多家制藥企業(yè)開展了滇桂艾納香人工繁育與栽培試驗，但出現(xiàn)問題較多：①滇桂艾納香種子壽命較短，生活力和發(fā)芽率低；②扦插栽種成活率低；③種植產(chǎn)量低、成本高；④種植過程易發(fā)生病害。所以目前依靠種植還不能批量提供滇桂艾納香原料。

6 結(jié)語

綜上所述，近10年來國內(nèi)外對滇桂艾納香的化學成分、藥理作用、工藝研究、質(zhì)量控制、繁育技術(shù)等方面進行了較深入的研究，為我們更好地開發(fā)利用滇桂艾納香提供了參考；但滇桂艾納香規(guī)?；⒒鼗脑耘嗉夹g(shù)有待于進一步研究。

滇桂艾納香是廣西壯族重點珍貴藥材，具有良好的開發(fā)應(yīng)用前景。目前滇桂艾納香相關(guān)產(chǎn)品有：婦血康(滇桂艾納香)顆粒(1家藥企生產(chǎn))、滇桂艾納香膠囊(4家藥企生產(chǎn))、滇桂艾納香片(1家藥企生產(chǎn))、伊血安顆粒(1家藥企生產(chǎn))。隨著產(chǎn)品市場需求的持續(xù)增長，對原材料滇桂艾納香的需求也越來越大，造成大量野生滇桂艾納香被濫采，野生資源逐漸萎縮，藥材的質(zhì)量也不斷下降，不能滿足不斷擴大的市場對原材料的需求。目前野生滇桂艾納香資源面臨枯竭狀況，種植技術(shù)又跟不上，所以解決滇桂艾納香資源緊缺問題迫在眉睫。下一步應(yīng)加大力度開展滇桂艾納香栽培技術(shù)研究，采用多學科的知識和技術(shù)手段解決滇桂艾納香產(chǎn)量低、成本高及栽培過程中出現(xiàn)的病蟲害問題；開展規(guī)?；?、基地化種植，為制藥企業(yè)提供質(zhì)量安全、有效、穩(wěn)定、可控的滇桂艾納香藥材，在源頭上把控原料質(zhì)量，確保產(chǎn)品質(zhì)量均一；解決滇桂艾納香資源緊缺的瓶頸問題，確保滇桂艾納香產(chǎn)業(yè)化的可持續(xù)發(fā)展。

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