一株塔賓曲霉的分離鑒定及其在地溝油鑒別中的應(yīng)用

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(1.西南林業(yè)大學(xué),西南地區(qū)生物多樣性保育國(guó)家林業(yè)局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南昆明 650224;2.云南省林業(yè)科學(xué)院,國(guó)家林業(yè)局云南珍稀瀕特森林植物保護(hù)和繁育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南省森林植物培育與開(kāi)發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,云南昆明 650201)

地溝油是過(guò)氧化值、酸價(jià)、水分、羰基價(jià)、丙二醛、AFB1等指標(biāo)嚴(yán)重超標(biāo)的非食用油,質(zhì)量、衛(wèi)生情況極差,一般分為3類(lèi)[1]:一是狹義的地溝油,即將下水道中的油膩漂浮物或者將賓館、酒樓的剩飯、剩菜(通稱潲水)經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單加工、提煉出的油;二是劣質(zhì)豬肉、豬內(nèi)臟、豬皮加工以及提煉后產(chǎn)出的油;三是用于油炸食品的油使用次數(shù)超過(guò)規(guī)定要求后,再被重復(fù)使用或往其中添加一些新油后重新使用的油[2]。近年來(lái),隨著我國(guó)餐飲業(yè)規(guī)模日益擴(kuò)大,餐飲廢水中排除的廢棄油脂日益增多,每年大約200～300萬(wàn)噸地溝油返回餐桌[3]。據(jù)實(shí)驗(yàn)測(cè)定,長(zhǎng)期攝入地溝油會(huì)對(duì)人體造成嚴(yán)重傷害,其結(jié)果會(huì)導(dǎo)致發(fā)育障礙,腸炎,肝、心、腎腫大,以及脂肪肝等[4]。因此,鑒別地溝油的檢驗(yàn)方法的研究對(duì)地溝油的治理意義重大。

由于地溝油和食用油在制作工藝和成分上十分相似,傳統(tǒng)的物理和化學(xué)檢測(cè)不能有效鑒別出地溝油和普通食用油。于是一些不法商販因地溝油價(jià)格低廉,來(lái)源廣泛,化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜等特點(diǎn)[5],將地溝油經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單處理后直接賣(mài)給了酒店和食堂充當(dāng)食用油,嚴(yán)重威脅著人類(lèi)的健康。截至目前,我國(guó)每年破獲的地溝油案例屢見(jiàn)不鮮,并且一些政府部門(mén)也全力組織科研攻關(guān),研究了眾多鑒別 “地溝油”的方法[6-8]。其中較為常見(jiàn)的方法包括:感官法、色差法、電導(dǎo)率法、折光率法、基因成分分析法等。但利用微生物的特異性來(lái)鑒別地溝油和食用油的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。

與普通食用油相比,地溝油中滋生著大量的微生物,其中還含有一些特殊的物質(zhì),一些微生物對(duì)地溝油中的微小差異是十分敏感的,并且大部分微生物會(huì)隨著環(huán)境的改變,在一定的限度內(nèi),其形態(tài)、生理、生化、生長(zhǎng)繁殖等特征甚至微生物群落都有可能發(fā)生改變[9]。因此,利用地溝油中特殊的物質(zhì)或者生境來(lái)分離培養(yǎng)特異菌株,并應(yīng)用于地溝油的鑒別研究之中,對(duì)于地溝油的鑒別檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展意義重大。本實(shí)驗(yàn)以地溝油中的真菌微生物為主要來(lái)源,篩選出能高效利用地溝油的特異菌株DGY03,并將其接種于以地溝油和標(biāo)準(zhǔn)食用油為唯一營(yíng)養(yǎng)源的培養(yǎng)基中,比較了其在地溝油和食用油培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)速度、菌落形態(tài)以及培養(yǎng)基顏色變化等特征。確定了DGY03作為指示菌鑒別地溝油的可行性,為后期微生物作為指示菌鑒別地溝油打下堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1材料與儀器

地溝油 潲水油,由某火鍋店提供;大豆油、菜籽油、玉米油、花生油為標(biāo)準(zhǔn)食用油 由某大型超市提供;瓊脂、培養(yǎng)皿、試管、聚乙烯醇等 昆明豐科生物科技有限公司;牛肉膏、氫氧化鈉、磷酸、活性白土 昆明愛(ài)卓商貿(mào)有限公司;真菌DNA快速提取試劑盒(溶液型)、2×Taq PCR MasterMix、ITS通用引物(ITS1-ITS4)等均由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司提供。

DF-3恒溫磁力攪拌器 蘇州威爾實(shí)驗(yàn)用品有限公司;2XZ直聯(lián)型旋片式真空泵 浙江揚(yáng)子江泵業(yè)有限公司;UV-2450紫外分光光度計(jì) 津島有限公司;DM750顯微鏡 北京中儀光科科技發(fā)展有限公司;立式壓力蒸汽滅菌器 上海博迅醫(yī)療設(shè)備廠;HH-2數(shù)顯電子恒溫水浴鍋 丹瑞電器廠;HC-2518R高速冷凍離心機(jī) 安徽中科中佳儀器有限公司;SW-CJ-1D潔凈工作臺(tái) 江蘇蘇潔凈化設(shè)備廠;HH.B11-BS電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 培養(yǎng)基的配制 富集培養(yǎng)基:蛋白胨10.0 g/L,馬鈴薯粉5.0 g/L,葡萄糖15.0 g/L,NaCl 5.0 g/L,氯霉素0.025 g/L。

真菌分離培養(yǎng)基:馬鈴薯200.0 g,葡萄糖20.0 g,瓊脂20.0 g,放入三角瓶中,加蒸餾水至1000 mL,121 ℃滅菌20 min。

平板篩選培養(yǎng)基:(NH4)SO41.0 g,K2HPO41.0 g,KCl 0.5 g,MgSO4·7H2O 0.5 g,精煉地溝油10 mL,瓊脂20.0 g,加蒸餾水至1000 mL,pH7.0～pH7.5,121 ℃滅菌20 min。

復(fù)篩培養(yǎng)基:精煉地溝油10 mL,瓊脂20.0 g,pH7.0～pH7.2,加蒸餾水至1000 mL,121 ℃滅菌20 min。

應(yīng)用培養(yǎng)基:精煉地溝油、大豆油、菜籽油、玉米油、花生油各10 mL,分別加入瓊脂20.0 g,pH7.0～pH7.2,加蒸餾水至1000 mL,121 ℃滅菌20 min。配成五種以不同樣品油為唯一營(yíng)養(yǎng)源的培養(yǎng)基。其中實(shí)驗(yàn)所需的精煉地溝油均為除臭后的地溝油,且在配制各種培養(yǎng)基時(shí),需預(yù)先將樣品油與聚乙烯醇(體積分?jǐn)?shù)為20%)以1∶3的比例混合,攪動(dòng)乳化5 min,即配制成乳化液。滅菌后,再將其加入到培養(yǎng)基中。

1.2.2 地溝油的精煉

1.2.2.1 地溝油的精煉工藝 地溝油的精煉工藝主要包括脫膠、脫酸、脫色以及脫臭等流程。其最佳工藝參數(shù)參照餐飲業(yè)潲水油精煉工藝的方法[10]。即首先向地溝油中加入0.10%(v:v)磷酸,在55 ℃水浴35 min后,加2%的去離子水(v:v)進(jìn)行脫膠;其次加入0.33%的超堿(氫氧化鈉占粗油重的百分?jǐn)?shù))使其堿液濃度為17.58°Be,75 ℃進(jìn)行堿練;然后加入4.0%(w∶w)的活性白土,按攪拌速度為50 r/min,在65 ℃水浴中攪拌35 min進(jìn)行脫色;最后在殘壓為0.53 Pa,脫臭溫度為256 ℃,于直聯(lián)型旋片式真空泵中脫臭5.6 h形成精煉地溝油。

1.2.2.2 地溝油的理化指標(biāo)檢測(cè) 地溝油的理化指標(biāo)檢測(cè)參照國(guó)家食用油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB2716-2005對(duì)油脂的各種理化指標(biāo)作出的規(guī)范和限定,本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)精煉地溝油的酸價(jià)(AV)、過(guò)氧化值(POV)、羥基價(jià)、以及碘價(jià)(I.V)進(jìn)行了測(cè)定,其測(cè)定方法均參照餐飲業(yè)潲水油脂的理化檢測(cè)方法[10]。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)樣品的預(yù)處理和真菌的分離純化 由于實(shí)驗(yàn)所用的地溝油樣品含有部分顆粒狀雜質(zhì),需對(duì)地溝油樣品進(jìn)行預(yù)處理,其處理方法參照地溝油與食用油中微生物群落結(jié)構(gòu)多樣性比較[9]的方法。然后取樣品油10 mL,加入30 mL滅菌的聚乙烯醇(體積分?jǐn)?shù)為20%)在35 ℃水浴中振蕩混合5 min,最后倒入100 mL滅菌的富集培養(yǎng)基中,制成懸液。置于28 ℃,150 r/min的搖床上振蕩培養(yǎng)2 d。將富集液用無(wú)菌水進(jìn)行梯度稀釋,取稀釋濃度為10-3的稀釋液,涂布于分離培養(yǎng)基中,置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d,挑選出在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好的菌株。并進(jìn)行純化培養(yǎng),挑取單菌落接種到試管斜面中,在4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4 真菌的篩選 經(jīng)分離純化培養(yǎng)后,分別將純化后的菌株接種于平板篩選培養(yǎng)基中,置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 d,挑選出生長(zhǎng)良好的菌株。并將其接種于復(fù)篩培養(yǎng)基中,置于28 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d,觀察其生長(zhǎng)狀況以及培養(yǎng)基顏色變化等特征,最終將能在地溝油中大量生長(zhǎng)繁殖或者培養(yǎng)基有明顯變色現(xiàn)象的菌株作為特異菌株,并進(jìn)一步將其作為指示菌應(yīng)用于地溝油的鑒別研究之中。

1.2.5 特異菌株的鑒定

1.2.5.1 特異菌株DNA提取和ITS PCR擴(kuò)增 特異菌株DNA的提取采用真菌DNA快速提取試劑盒(溶液型)。在提取菌株DNA后,進(jìn)行ITS擴(kuò)增[11]。正向引物:5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′和反向引物:5′-TCCT CCGCTTATTGATATGC-3′。PCR采用50 μL反應(yīng)體系:2×Taq PCR MasterMix 25 μL,primerF(10 μmol/L)2.0 μL,primerR(10μmol/L)2.0 μL,DNA template 1.0 μL,補(bǔ)足ddH2O至50 μL。PCR擴(kuò)增條件:94 ℃ 4 min;94 ℃ 30 s,58 ℃ 30 s,72 ℃ 1 min,共30個(gè)循環(huán);72 ℃ 10 min;4 ℃ 30 min。用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.8% 瓊脂糖凝膠進(jìn)行PCR 產(chǎn)物的檢測(cè),20 min后,用凝膠成像儀照相檢測(cè)。

1.2.5.2 特異菌株ITS序列分析 將擴(kuò)增的 PCR 產(chǎn)物送昆明擎科有限公司純化并測(cè)序。并將測(cè)序所得序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)(http://blast.st-va.ncbi.nlm. nih.gov/Blast.cgi)中進(jìn)行BLAST序列相似性比對(duì),從中獲取與該菌株序列同源性較高的部分菌株序列,用ClustalX按照最大同源性的原則進(jìn)行排序,并用BioEdit 5.0.9進(jìn)行序列對(duì)齊,最后用MEGA 6.0軟件進(jìn)行系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)構(gòu)建,以確定其種屬地位。

1.2.6 特異菌株的應(yīng)用 為了將篩選出的特異菌株應(yīng)用于地溝油的鑒別之中,本實(shí)驗(yàn)以地溝油和四種標(biāo)準(zhǔn)食用油(分別為大豆油、菜籽油、玉米油、花生油)作為唯一營(yíng)養(yǎng)源配制成應(yīng)用培養(yǎng)基,從培養(yǎng)好的特異菌株的菌落邊緣,用直徑為5 mm的打孔器取菌餅,將菌餅用接種針接入到培養(yǎng)基的中心位置,菌絲面向下,每種培養(yǎng)基重復(fù)3次,同時(shí)以加有10 mL的無(wú)菌水作為空白對(duì)照。放入28 ℃恒溫培養(yǎng)箱,培養(yǎng)7 d,觀察并比較菌株在不同類(lèi)型培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)速度、菌落長(zhǎng)勢(shì)以及培養(yǎng)基顏色變化等特征。其中菌落直徑的測(cè)定采用十字交叉法,菌落生長(zhǎng)速度=(菌落平均直徑-菌餅直徑)/菌株培養(yǎng)天數(shù)。

2 結(jié)果與分析

2.1地溝油的精煉結(jié)果

依據(jù)中華人民共和國(guó)食用油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB2716-2005對(duì)油脂的各種理化指標(biāo)作出的規(guī)范和限定,本實(shí)驗(yàn)主要對(duì)經(jīng)精煉后地溝油(圖1)的酸價(jià)、過(guò)氧化值、羥基價(jià)、以及碘價(jià)進(jìn)行了測(cè)定,其結(jié)果見(jiàn)表1。

圖1 地溝油精煉過(guò)程中各油樣外觀對(duì)比Fig.1 The comparison of respective sample oil in the oil refining process of gutter oil注:A：脫膠油；B：脫酸油；C：脫色油；D：除臭油。

檢測(cè)項(xiàng)目植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)(參照GB2716-2005)精煉地溝油是否超標(biāo)AV(mg/g)≤3028否POV(g/100g)≤025019否羥基價(jià)(meq/kg)≤500423否IV(g/100g)約10085否

由結(jié)果可知,地溝油經(jīng)精煉后其酸價(jià)、羥基價(jià)、過(guò)氧化值以及碘價(jià)的指標(biāo)已達(dá)到植物油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)。但與市售食用植物油相比,精煉地溝油在羥基價(jià)、過(guò)氧化值、油脂色澤等方面仍存在較小的差距。

2.2菌株分離結(jié)果

經(jīng)分離純化培養(yǎng),從地溝油中分離出8株生長(zhǎng)較好且形態(tài)各異的真菌菌株,分別編號(hào)為DGY01～DGY08。

2.3特異菌株的篩選結(jié)果

經(jīng)平板篩選培養(yǎng)后,初步獲得了2株生長(zhǎng)良好的菌株,分別將其命名為DGY03和DGY05,其菌落形態(tài)特征及菌絲或孢子等顯微結(jié)構(gòu)特征如圖2。由圖2可知,菌株DGY03菌落平坦,呈同心圓狀,邊緣具有白色的菌絲體,質(zhì)地絲絨狀;分生孢子球形或近球形,壁近于平滑至稍粗糙;分生孢子梗發(fā)生于基質(zhì),老時(shí)黃色或黃褐色,壁平滑,頂囊球形或近球形。菌株DGY05菌落致密,菌絲有橫隔,分生孢子梗亦有橫隔,光滑或粗糙;分生孢子球形、橢圓形或短柱形,光滑或粗糙,大部分生長(zhǎng)時(shí)呈藍(lán)綠色;分生孢子梗經(jīng)過(guò)多次分枝,產(chǎn)生幾輪對(duì)稱或不對(duì)稱的小梗,形如掃帚,稱為帚狀體。

圖2 菌株DGY03和DGY05在平板篩選培養(yǎng)基上的菌落形態(tài)和顯微結(jié)構(gòu)特征Fig.2 The colony morphology and microstructure characteristics of the strain DGY03 and DGY05 in filter medium注:A、B表示DGY03；C、D表示DGY05。

通過(guò)將獲得的DGY03和DGY05分別接種于復(fù)篩培養(yǎng)基中,觀察其在地溝油培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況以及菌落形態(tài)等特征。其結(jié)果發(fā)現(xiàn),菌株DGY03在培養(yǎng)基中表現(xiàn)出較強(qiáng)的生長(zhǎng)繁殖現(xiàn)象(圖3)。即當(dāng)恒溫培養(yǎng)7 d,其菌落擴(kuò)散直徑為40～55 mm,但與圖2相比,菌落表面不再呈同心圓狀,而是呈粉末狀,且邊緣無(wú)明顯的白色菌絲體。而菌株DGY05在培養(yǎng)基上則表現(xiàn)出生長(zhǎng)緩慢、菌絲體不發(fā)達(dá)、無(wú)明顯產(chǎn)孢現(xiàn)象等特點(diǎn),不能有效地以地溝油為營(yíng)養(yǎng)源進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖。綜上所述,本實(shí)驗(yàn)將能在地溝油培養(yǎng)基上快速生長(zhǎng)繁殖的菌株DGY03作為特異菌株。

圖3 菌株DGY03在地溝油培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況和菌落形態(tài)Fig.3 The growth and colony morphology of the strain DGY03 in the gutter oil medium

2.4特異菌株的鑒定結(jié)果

2.4.1 菌株DGY03的PCR擴(kuò)增結(jié)果 用通用引物對(duì)菌株DGY03的ITS序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增,得到重復(fù)性好、穩(wěn)定清晰的特異擴(kuò)增片斷,長(zhǎng)約650 bp(圖4)。

圖5 基于ITS序列構(gòu)建的菌株DGY03系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.5 The phylogenetic dendrogram of the strain DGY03 based ITS sequences

圖4 菌株DGY03 rDNA ITS區(qū)段PCR產(chǎn)物電泳結(jié)果Fig.4 The PCR results of the strain DGY03 in rDNA ITS segment注:圖譜中1、2代表DGY03,M代表標(biāo)準(zhǔn)DL2000。

2.4.2 菌株DGY03的ITS序列測(cè)定及系統(tǒng)進(jìn)化分析 通過(guò)對(duì)菌株DGY03的ITS序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增,獲得了大約650 bp的拼接序列(Genbank登錄號(hào):MF186869)。將DGY03在NCBI中BLAST同源性比對(duì)后,構(gòu)建確定其分類(lèi)地位的系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)(圖5),由圖5可知DGY03與塔賓曲霉(Aspergillustubingensis)的同源性達(dá)100%,由此可將DGY03歸為塔賓曲霉,屬子囊菌門(mén),散囊菌綱,散囊菌目,曲霉科,曲霉屬。

2.5菌株DGY03的應(yīng)用結(jié)果分析

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)分別比較菌株DGY03在地溝油和四種不同類(lèi)型食用油培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)速度、菌落長(zhǎng)勢(shì)、菌落形態(tài)以及培養(yǎng)基顏色變化等特征(表2,圖6),研究其作為指示菌鑒別地溝油的可行性。

表2 菌株DGY03在不同樣品油培養(yǎng)基上生長(zhǎng)變化情況的比較Table 2 The comparison of growth and variation of the strain DGY03 in the different sample oil culture medium

圖6 菌株DGY03在地溝油培和花生油培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)狀況和菌落形態(tài)的比較Fig.6 The comparison of growth and colony morphology of strain DGY03 in gutter oil and peanut oil注:A地溝油培養(yǎng)基 B 花生油培養(yǎng)基。

由表2和圖6可知,菌株DGY03在地溝油和食用油培養(yǎng)基上的菌落表面形態(tài)和培養(yǎng)基顏色變化方面基本一致,無(wú)明顯差異現(xiàn)象。但菌株DGY03在地溝油培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)速度和菌落長(zhǎng)勢(shì)明顯優(yōu)于其它四種食用油培養(yǎng)基,且菌株DGY03在四種食用油培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)速度和菌落長(zhǎng)勢(shì)基本一致。其在大豆油、菜籽油、玉米油、花生油培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)速度分別為0.21、0.28、0.24、0.29 cm/d,而在地溝油培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)速度為0.64 cm/d,對(duì)照組則無(wú)明顯生長(zhǎng)現(xiàn)象。由此說(shuō)明由于地溝油成分復(fù)雜,其內(nèi)所含的某些特殊成分能夠?yàn)槠渖L(zhǎng)繁殖提供部分營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),從而使菌株DGY03在地溝油培養(yǎng)基上更好的生長(zhǎng)繁殖。

因此綜上所述,通過(guò)比較菌株DGY03在地溝油和食用油培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)速度以及菌落長(zhǎng)勢(shì)等變化特征,能夠有效地區(qū)別出地溝油與食用油間的差別。由此初步推斷,可以利用微生物對(duì)地溝油的特異性來(lái)鑒別地溝油。

3 結(jié)論

本研究對(duì)從地溝油中分離得到的8株真菌進(jìn)行了特異性研究,經(jīng)篩選分離培養(yǎng)出了一株能在只含有精煉地溝油的培養(yǎng)基上大量生長(zhǎng)繁殖的特異菌株DGY03,并通過(guò)該菌株的菌落形態(tài)、微觀結(jié)構(gòu)以及rDNA ITS序列分析相結(jié)合,判斷該特異菌株為塔賓曲霉(Aspergillustubingensis)。同時(shí)根據(jù)該菌株在地溝油和食用油培養(yǎng)基上生長(zhǎng)變化情況等特征的比較,初步探討了其在地溝油鑒別領(lǐng)域的應(yīng)用價(jià)值。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,菌株DGY03在地溝油培養(yǎng)基上無(wú)論從菌落生長(zhǎng)速度還是菌落長(zhǎng)勢(shì)方面比較都明顯優(yōu)于大豆油、菜籽油等四種食用油,這說(shuō)明了由于地溝油來(lái)源廣泛,其中含有部分供微生物生長(zhǎng)所需的微量元素和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),經(jīng)精煉后的地溝油也無(wú)法完全去除。故經(jīng)精煉后的地溝油不僅能為菌株DGY03提供豐富的碳源,而且還能提供部分供其生長(zhǎng)所需的特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。同時(shí)由于實(shí)驗(yàn)所需的大豆油、菜籽油、玉米油以及花生油都是市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的未經(jīng)使用過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)食用油,其內(nèi)所含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)相較于地溝油更為單一,部分可能缺乏供其生長(zhǎng)所需的必要物質(zhì),大大限制了該菌株在其培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖,故表現(xiàn)出菌絲體不發(fā)達(dá),生長(zhǎng)速度較慢等特征。由此可見(jiàn),利用地溝油所含物質(zhì)的特殊性或者豐富性來(lái)篩選分離菌株,并根據(jù)其在不同樣品油培養(yǎng)基上的菌落生長(zhǎng)速度以及菌落長(zhǎng)勢(shì)等差異可應(yīng)用于地溝油的鑒別之中。

由于運(yùn)用微生物作為指示菌鑒別地溝油,首先得收集大量的不同來(lái)源的地溝油,大量篩選菌株,篩選出能對(duì)多種不同來(lái)源地溝油敏感的菌株,并且還要與市場(chǎng)上各種標(biāo)準(zhǔn)食用油進(jìn)行對(duì)比分析,從而才能最終確定敏感指示菌株;其次菌株長(zhǎng)時(shí)間的保藏,在應(yīng)用方面菌株可能存在退化的可能,這還需不斷對(duì)指示菌進(jìn)行復(fù)壯才能達(dá)到檢測(cè)效果;然后由于地溝油精煉技術(shù)不斷改進(jìn)和提高,精煉后的地溝油在理化性質(zhì)方面已經(jīng)接近食用油的標(biāo)準(zhǔn),這對(duì)于指示菌的敏感性將進(jìn)一步增加其難度;最后運(yùn)用指示菌鑒別地溝油需要研究標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法和操作流程,這需要做大量的研究工作。本實(shí)驗(yàn)只針對(duì)從地溝油中分離到的部分真菌進(jìn)行簡(jiǎn)單的篩選和觀察,目的在于運(yùn)用微生物學(xué)方法研究鑒別地溝油的可行性,這離實(shí)際應(yīng)用仍然存在一定差距,后期還需要選取不同來(lái)源的地溝油,對(duì)其培養(yǎng)條件進(jìn)行優(yōu)化,確定菌株DGY03是否為地溝油所特有的菌株,從而將其作為鑒定地溝油的標(biāo)準(zhǔn)。截至目前,科學(xué)家們并沒(méi)有找到一種較可靠的方法來(lái)檢測(cè)和鑒別地溝油[12],但隨著目前指示菌的深入研究[13-14]以及微生物學(xué)和基因工程的快速發(fā)展,相信在不久的將來(lái)從微生物角度出發(fā)有望為地溝油鑒別領(lǐng)域開(kāi)辟一條新的思路。

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