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    斯皮諾素磷脂復(fù)合物的制備及表征

    2018-01-22 17:10:08,,,2,*,,2
    食品工業(yè)科技 2018年1期
    關(guān)鍵詞:磷脂復(fù)合物實(shí)驗(yàn)

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    (1.天津商業(yè)大學(xué)生物技術(shù)與食品科學(xué)學(xué)院,天津 300134;2.天津市食品生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,天津 300134)

    斯皮諾素(2?-O-β-D-吡喃葡萄糖基當(dāng)藥素,SPI)是酸棗仁中含量最高的黃酮類(lèi)成分[1-2],且是《中國(guó)藥典》2010年版所規(guī)定的酸棗仁的活性成分,具有鎮(zhèn)靜催眠、抗氧化、抗抑郁等多種藥理作用[3],其結(jié)構(gòu)式如圖1所示。黃酮類(lèi)化合物極性強(qiáng)且相對(duì)分子質(zhì)量較大,能被吸收入血的量很少;黃酮類(lèi)化合物也可能以主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)的方式被吸收,相關(guān)蛋白是其相應(yīng)的轉(zhuǎn)運(yùn)載體,而載體蛋白大多是能量依賴的,同時(shí)又有飽和性,能夠通過(guò)主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)吸收的數(shù)量并不多[4]。研究表明斯皮諾素生物利用度較低,僅為2.2%[5],選擇合適的劑型來(lái)提高SPI的生物利用度尤為必要。磷脂復(fù)合物(PLC)是某些藥物和磷脂通過(guò)電荷遷移作用或分子間作用力形成的相對(duì)穩(wěn)定的復(fù)合物。黃酮類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)中負(fù)電性較高的部位,在一定條件下可與磷脂帶正電荷的極性端發(fā)生相互作用,形成氫鍵或以分子間的疏水作用結(jié)合在一起形成磷脂復(fù)合物,且使得磷脂的兩性作用不被破壞[6]。迄今為止,國(guó)內(nèi)已有芒果苷、山楂葉總黃酮、芍藥苷以及柿葉黃酮等中藥成分制成磷脂復(fù)合物的相關(guān)報(bào)道[7-10],且磷脂復(fù)合物既可以增強(qiáng)水溶性藥物的脂溶性也可以增強(qiáng)脂溶性藥物的水溶性,從而增加藥物在胃腸道中的吸收,提高其生物利用度和療效。國(guó)外學(xué)者Bombardelli 等[11]在研究脂質(zhì)體的時(shí)候偶然發(fā)現(xiàn):天然黃酮類(lèi)的化合物對(duì)磷脂有較強(qiáng)的親和力,二者可結(jié)合形成具有一定結(jié)構(gòu)的復(fù)合物,因此,結(jié)合斯皮諾素自身結(jié)構(gòu)特點(diǎn),將其制成斯皮諾素磷脂復(fù)合物(SPI-PLC),并對(duì)斯皮諾素磷脂復(fù)合物(SPI-PLC)的制備及工藝優(yōu)化進(jìn)行較為詳盡的研究,用紫外、紅外光譜表征復(fù)合物的形成,以期優(yōu)化出制備復(fù)合率(CR)較高的SPI-PLC的工藝條件,為實(shí)現(xiàn)SPI-PLC的工業(yè)化生產(chǎn)、改善斯皮諾素的口服吸收性能和提高生物利用度等相關(guān)研究奠定基礎(chǔ)。

    圖1 斯皮諾素化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig.1 The chemical structural formula of spinosin

    1 材料與方法

    1.1材料與儀器

    斯皮諾素 本實(shí)驗(yàn)室提取、分離純化并采用紫外光譜、紅外光譜和質(zhì)譜等檢測(cè)方法對(duì)其進(jìn)行表征,純度大于98%;大豆卵磷脂E200 上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司;無(wú)水乙醇、丙酮、三氯甲烷等試劑 均為分析純;水 為去離子水。

    EMS-2型加熱定時(shí)磁力攪拌器 天津歐諾儀器儀表有限公司;UV-7504型單光束紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì) 上海欣茂儀器有限公司;NEXUS 670型傅里葉紅外光譜儀 美國(guó)Thermo Nicolet公司;Bettensize 納米粒度儀 丹東百特儀器有限公司;KQ-500B型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司;XSE105型1/100000電子分析天平 上海Mettler-Toledo儀器有限公司;V-700型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 瑞士Buchi公司;ALPHA 1-2LD PLUS型真空冷凍干燥機(jī) 德國(guó)Marin Christ 公司;DH-101型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司。

    1.2實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 斯皮諾素磷脂復(fù)合物的制備 按照所需比例精密稱(chēng)取一定量的斯皮諾素和磷脂,置于50 mL具塞燒瓶中,加入適量反應(yīng)溶劑(無(wú)水乙醇、丙酮、氯仿),在一定的溫度和攪拌速度下反應(yīng)一段時(shí)間,50 r/min轉(zhuǎn)速下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)(無(wú)水乙醇:浴鍋溫度56 ℃,壓力184 mbar;氯仿:浴鍋溫度58 ℃,壓力492 mbar;丙酮:浴鍋溫度61 ℃,壓力578 mbar),除去反應(yīng)溶劑。向殘余物中再次加入5 mL溶劑,充分溶解后減壓抽濾,收集濾餅,即得粗斯皮諾素磷脂復(fù)合物。

    1.2.2 制備工藝的質(zhì)量評(píng)價(jià) 以SPI-PLC的復(fù)合率CR為指標(biāo)來(lái)評(píng)價(jià)復(fù)合物的制備工藝。斯皮諾素水溶性較好,在水、甲醇、乙醇等溶劑中均可溶解,但不溶于氯仿。利用斯皮諾素在氯仿中不溶,而SPI-PLC溶于氯仿這一特性,向制備的粗產(chǎn)物中加入10 mL氯仿,充分溶解未結(jié)合的磷脂及形成的復(fù)合物,抽濾,收集濾液和沉淀。濾液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得磷脂復(fù)合物;沉淀于40 ℃烘箱下干燥,分析天平稱(chēng)重,得未與磷脂結(jié)合的斯皮諾素(W),斯皮諾素初始加藥量(W0)與沉淀量(W)之差即為和磷脂結(jié)合的斯皮諾素的量,因而SPI-PLC的CR值計(jì)算公式如下:CR=(W0-W)/W0。

    1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn)

    1.2.3.1 反應(yīng)溶劑的考察 設(shè)定SPI與磷脂的投料比為1∶15 (g/g),反應(yīng)溫度為40 ℃,反應(yīng)時(shí)間為3 h,攪拌速度為800 r/min,以SPI-PLC的CR為評(píng)估標(biāo)準(zhǔn),對(duì)無(wú)水乙醇、二氯甲烷、氯仿、丙酮和四氫呋喃進(jìn)行考察,優(yōu)選出可以達(dá)到較高CR值的反應(yīng)溶劑[12-14]。

    1.2.3.2 反應(yīng)溫度的考察 一般來(lái)說(shuō),反應(yīng)溫度越高,反應(yīng)速度越快,反應(yīng)更加完全,但據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道磷脂及形成的磷脂復(fù)合物在高溫環(huán)境下易被氧化和破壞[8],故本實(shí)驗(yàn)以丙酮為反應(yīng)溶劑,考察反應(yīng)溫度為20、30、40、50、60 ℃對(duì)磷脂復(fù)合物復(fù)合率的影響,其余實(shí)驗(yàn)條件同“1.2.3.1”。

    1.2.3.3 藥脂比考察 固定反應(yīng)溫度為40 ℃,分別按質(zhì)量比為1∶1、1∶5、1∶10、1∶15、1∶20的比例稱(chēng)取一定量的斯皮諾素與大豆磷脂,按“1.2.3.2”的實(shí)驗(yàn)條件制備磷脂復(fù)合物,測(cè)定復(fù)合物的CR值。

    1.2.3.4 攪拌速度的考察 設(shè)定斯皮諾素與大豆磷脂質(zhì)量比為1∶15,考察磁力攪拌速度為200、400、800、1200和1400 r/min時(shí)對(duì)復(fù)合物CR的影響,其余實(shí)驗(yàn)條件同“1.2.3.3”。

    1.2.3.5 反應(yīng)時(shí)間的考察 設(shè)定攪拌速度為800 r/min,其余實(shí)驗(yàn)條件同“1.2.3.4”,考察反應(yīng)時(shí)間分別為1、2、3、4、5 h時(shí)對(duì)磷脂復(fù)合物復(fù)合率的影響。

    1.2.4 Box-Behnken設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化SPI-PLC制備工藝 由單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,藥脂比、攪拌速度和反應(yīng)時(shí)間對(duì)SPI-PLC的CR影響具有顯著性,因此采用Box-Behnken設(shè)計(jì)如表1所示的3因素3水平的實(shí)驗(yàn),以CR為評(píng)價(jià)指標(biāo),進(jìn)行多元線性回歸和二項(xiàng)式方程擬合。根據(jù)擬合方程的相關(guān)系數(shù)判斷模型擬合程度是否良好,進(jìn)而確定該模型是否可用。繪制效應(yīng)指標(biāo)CR與其中任意2個(gè)自變量的三維圖,從而優(yōu)化SPI-PLC的制備工藝,得到最佳工藝條件。

    表1 響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels table of response surface experiment

    1.2.5 斯皮諾素磷脂復(fù)合物的結(jié)構(gòu)表征

    1.2.5.1 紫外分光光度法 配制斯皮諾素、磷脂、物理混合物(斯皮諾素與磷脂按質(zhì)量比1∶16.42混合)、SPI-PLC的無(wú)水乙醇溶液。以無(wú)水乙醇為空白,于200~400 nm波長(zhǎng)區(qū)進(jìn)行紫外掃描,記錄紫外吸收?qǐng)D譜。

    1.2.5.2 紅外光譜分析 將磷脂、斯皮諾素、物理混合物(斯皮諾素與磷脂質(zhì)量比1∶16.42混合)以及SPI-PLC分別與溴化鉀混合壓片。其中,上述各組分與溴化鉀均以1∶200的比例于石英研缽中同一方向充分研勻,然后進(jìn)行壓片,用空白溴化鉀窗片進(jìn)行背景采集,得各組分紅外吸收光譜圖。

    1.2.5.3 粒徑和多分散指數(shù)分析 室溫下,取斯皮諾素磷脂復(fù)合物20 mg,用3 mL 雙蒸水混懸并渦旋10 min,得到半透明狀膠體溶液,再用雙蒸水稀釋至溶液光子數(shù)在20~50 K范圍內(nèi),超聲5 min,置于納米激光粒度儀中測(cè)定其平均粒徑和多分散指數(shù)(PDI)。

    1.2.5.4 表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定 精密稱(chēng)量斯皮諾素適量,經(jīng)甲醇溶解并制備濃度為1 mg/mL的儲(chǔ)備液,用正辛醇飽和的水溶液稀釋成2、5、10、20、50、100 μg/mL的系列濃度梯度,測(cè)定335 nm處的吸光度(A),以A對(duì)濃度C進(jìn)行線性回歸,得回歸方程。采用搖瓶法測(cè)定SPI-PLC的表觀油水分配系數(shù),量取正辛醇飽和的水溶液5 mL于具塞離心管中,分別加入適量的斯皮諾素、斯皮諾素與磷脂物理混合物和SPI-PLC,37 ℃,100 r/min振搖24 h至溶解平衡(預(yù)實(shí)驗(yàn)表明平衡時(shí)間為24 h),靜置取上清液2 mL置于5 mL于具塞離心管中,分別加入正辛醇2 mL,37 ℃,100 r/min振搖至溶解平衡,靜置。分別取水相和正辛醇相,稀釋適當(dāng)倍數(shù)進(jìn)行測(cè)定。水相和油相中的溶解度分別記為CW和CO,可由公式P=log(CO/CW)計(jì)算出表觀油水分配系數(shù)(P)。

    1.3數(shù)據(jù)處理

    單因素實(shí)驗(yàn)相關(guān)數(shù)據(jù)運(yùn)用SPSS軟件進(jìn)行方差分析和獨(dú)立樣本T-test,采用Design-Expert 8.0.7.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)軟件分析響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    2 結(jié)果與討論

    2.1單因素實(shí)驗(yàn)

    單因素實(shí)驗(yàn)中各因素對(duì)磷脂復(fù)合物CR值影響如圖2所示。

    圖2(a)結(jié)果表明,溶劑為無(wú)水乙醇、二氯甲烷和四氫呋喃時(shí)效果不佳,而在丙酮和氯仿中的CR值均較高且和其他三種試劑相比具有顯著性差異,但由于氯仿毒性大,腐蝕性強(qiáng),故本實(shí)驗(yàn)選用丙酮作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)的反應(yīng)溶劑。

    圖2(b)顯示,反應(yīng)溫度為20、30、40、50和60 ℃時(shí)的CR值分別為 80.06%、81.57%、82.49%、80.37%和79.13%,且T-test表明三者之間無(wú)顯著性差異,因此反應(yīng)溫度對(duì)復(fù)合物的CR影響較小,因此選用反應(yīng)溫度為40 ℃的條件進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

    圖2(c)結(jié)果顯示,藥脂比為1∶1、1∶5、1∶10、1∶15、1∶20時(shí)的復(fù)合率分別是48.01%、79.05%、84.63%、88.31% 和82.09%,且和最小值相比具有顯著性差異(p<0.05),這表明在一定范圍內(nèi),復(fù)合物的CR值隨磷脂比例的升高而增大,但當(dāng)藥脂比為1∶20時(shí),CR值有所降低,這可能是因?yàn)樗幬锓肿又心軌蚺c磷脂結(jié)合的位點(diǎn)已達(dá)到飽和。而藥脂比1∶1時(shí),CR值偏離其他結(jié)果較多,證明最優(yōu)藥脂比不在1∶1~1∶5范圍內(nèi),因此在設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)時(shí)不再考察1∶1~1∶5范圍內(nèi)的藥脂比,而通過(guò)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)對(duì)1∶10~1∶20這一范圍進(jìn)一步優(yōu)化。

    由圖2(d)可知,攪拌速度對(duì)磷脂復(fù)合物的復(fù)合率影響較大,且攪拌速度為200、400、800、1200和1400 r/min時(shí)的CR值分別為71.17%、87.85%、93.92%、78.96%和70.05%,因此轉(zhuǎn)速在400~1200 r/min的范圍內(nèi)效果較好。

    圖2(e)表明反應(yīng)時(shí)間對(duì)復(fù)合物的CR值有一定影響,在1~3 h范圍內(nèi),隨時(shí)間的延長(zhǎng),CR值增大,隨后CR值降低,但在2~4 h的范圍的CR值較高,因此需通過(guò)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)在2~4 h范圍內(nèi)優(yōu)化反應(yīng)時(shí)間。

    2.2Box-Behnken設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化SPI-PLC制備工藝

    圖2 不同因素對(duì)復(fù)合物CR的影響(n=3)Fig.2 Effects of different factors on the CR of complex(n=3)

    2.2.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 單因素結(jié)果表明,藥脂比(A)、攪拌速度(B)、反應(yīng)時(shí)間(C)是影響最為顯著的三個(gè)因素,3因素3水平的Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 Box-Behnken 實(shí)驗(yàn)安排及結(jié)果Table 2 Arrangement and results of Box-Behnken design

    2.2.2 二次回歸方程的建立 使用Design-Expert 8.0.7.1軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,多元線性回歸和方程擬合結(jié)果表明,CR用二項(xiàng)式回歸最優(yōu),其二次多元回歸方程為CR=90.49+5.22A+0.93B+3.71C+2.33AB+2.44AC-1.30BC-10.67A2-6.74B2-8.05C2(R2=0.9955,p<0.0001)。

    2.2.3 方差分析和顯著性檢驗(yàn) 二項(xiàng)式回歸方程系數(shù)顯著性檢驗(yàn)的結(jié)果見(jiàn)表3。表3數(shù)據(jù)顯示R2為0.9955,且回歸模型極顯著(p<0.0001),而失擬項(xiàng)(p=0.0593>0.05)是不顯著的,故模型擬合度較好,可用來(lái)對(duì)斯皮諾素磷脂復(fù)合物的制備工藝進(jìn)行初步分析和預(yù)測(cè)?;貧w方程中各因素的一次項(xiàng)A、C和二次項(xiàng)A2、B2、C2以及交互項(xiàng)AB、AC對(duì)SPI-PLC的復(fù)合率CR影響都是極顯著的,一次項(xiàng)B和交互項(xiàng)BC是顯著的,說(shuō)明各因素對(duì)SPI-PLC的復(fù)合率CR都有非常大的影響。根據(jù)各因素F值的大小,可以看出3個(gè)因素對(duì)SPI-PLC復(fù)合率CR的影響大小依次是 A>C>B,即藥脂比>反應(yīng)時(shí)間>攪拌速度。

    2.2.4 優(yōu)選處方的預(yù)測(cè)與驗(yàn)證 利用Design-Expert 8.0.7.1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)軟件繪制的效應(yīng)指標(biāo)CR與其中任意2個(gè)實(shí)驗(yàn)因素的三維效應(yīng)曲面圖如圖3所示。

    圖3(a)顯示,在反應(yīng)時(shí)間C為3 h的條件下,藥脂比A和攪拌速度B對(duì)SPI-PLC的CR值的影響。 SPI-PLC的CR隨著B(niǎo)的增加先升高后降低,隨著A的增加亦先升后降,交互影響顯著。圖3(b)顯示,在B為800 r/min的條件下,A和C對(duì)SPI-PLC的CR值的影響。CR隨著C和A的增加先升后降,交互影響顯著。圖3(c)顯示,在A為1∶15的條件下,B和C對(duì)SPI-PLC的CR的影響,規(guī)律同上。

    按各指標(biāo)的期望設(shè)定目標(biāo),得到的優(yōu)選處方條件是藥脂比為1∶16.42,攪拌速度為836 r/min,反應(yīng)時(shí)間為3.27 h。依據(jù)該處方制備3批SPI-PLC,測(cè)定各批CR值。實(shí)際測(cè)量CR為 90.75%±0.64%(n=3),模型對(duì)指標(biāo)的預(yù)測(cè)值為91.77%。結(jié)果顯示實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值之間沒(méi)有顯著性差異(相對(duì)誤差=1.1%),表明該模型預(yù)測(cè)性良好,因此該制備處方切實(shí)可行。

    2.3斯皮諾素磷脂復(fù)合物的結(jié)構(gòu)表征

    表3 二項(xiàng)式回歸方程系數(shù)顯著性檢驗(yàn)Table 3 Significance of coefficients in second order regression equation

    圖3 各因素對(duì)響應(yīng)值影響的三維效應(yīng)曲面圖Fig.3 3D Response surface plot for effects of each factor

    注:*:p<0.05,顯著;**:p<0.01,極限著。

    2.3.1 紫外分光光度法 斯皮諾素、磷脂、物理混合物(斯皮諾素與磷脂按質(zhì)量比1∶14.5混合)、SPI-PLC的無(wú)水乙醇溶液在200~400 nm波長(zhǎng)區(qū)的紫外吸收?qǐng)D譜如圖3所示。黃酮類(lèi)化合物因分子中存在桂皮?;氨郊柞;M成的交叉共軛體系,故在200~400 nm的區(qū)域內(nèi)存在兩個(gè)主要的吸收帶,稱(chēng)為峰帶Ⅰ(300~400 nm)及峰帶Ⅱ(220~280 nm)。一般來(lái)說(shuō),黃酮類(lèi)化合物帶Ⅱ的峰位主要受A-環(huán)氧取代程度的影響,而黃酮母核的取代情況影響帶Ⅰ的峰位,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,為了定量更加精確,通常選擇帶Ⅰ的峰值作為最大吸收波長(zhǎng)。由圖4可知,斯皮諾素的兩個(gè)峰帶分別為335 nm和275 nm,因此335 nm為SPI的最大吸收波長(zhǎng)。磷脂在285 nm 處有最大吸收,其余波長(zhǎng)處均無(wú)吸收,故磷脂對(duì)斯皮諾素的測(cè)定無(wú)干擾作用,可用于SPI-PLC的制備。從圖中還可以看出,斯皮諾素物理混合物與新形成的磷脂復(fù)合物的紫外圖譜形狀均呈現(xiàn)出斯皮諾素的特征,都在335 nm 處有最大吸收峰。紫外圖譜結(jié)果表明磷脂復(fù)合物中斯皮諾素發(fā)色團(tuán)的結(jié)構(gòu)并未發(fā)生改變,即反應(yīng)后沒(méi)有新的化合物的形成。

    圖4 磷脂、斯皮諾素、斯皮諾素磷脂物理混合物及SPI-PLC的紫外吸收光譜圖Fig.4 Ultraviolet absorption spectrum of phospholipids(A),spinosin(B),physical mixture(C),and SPI-PLC(D)

    2.3.2 紅外光譜分析 磷脂、斯皮諾素、物理混合物(斯皮諾素與磷脂質(zhì)量比1∶14.5混合)以及SPI-PLC的紅外吸收光譜圖如圖5所示。從譜圖中可看出,形成復(fù)合物后,斯皮諾素1716和1733 cm-1處的C=O的伸縮振動(dòng)峰向高頻區(qū)移動(dòng),移至1735 cm-1處,而且峰形也發(fā)生了一定變化,由雙峰變成了單峰;1075 cm-1峰為與苯環(huán)相連的C=O伸縮振動(dòng)峰,形成磷脂復(fù)合物后變?yōu)?053和1088 cm-1的雙峰,而磷脂的1718 cm-1峰為C=O伸縮振動(dòng)峰,向低頻區(qū)移動(dòng),移至1651 cm-1。將物理混合物的吸收峰與復(fù)合物的吸收峰做對(duì)比,復(fù)合物在1239、1465 cm-1以及 874、722 cm-1出現(xiàn)新的吸收峰。結(jié)果表明形成的復(fù)合物并不是磷脂分子與斯皮諾素簡(jiǎn)單的物理混合。磷脂復(fù)合物可能是由分子間相互作用形成的,而這種相互作用是磷脂分子與斯皮諾素特定官能團(tuán)能夠緊密結(jié)合的原因。

    圖5 磷脂(A)、斯皮諾素(B)、斯皮諾素磷脂物理混合物(C)及SPI-PLC(D)的紅外光譜圖Fig.5 FTIR Patterns of phospholipids(A),spinosin(B),physical mixture(C),and SPI-PLC(D)

    2.3.3 粒徑和多分散指數(shù)分析 納米激光粒度儀測(cè)得SPI-PLC的水分散體的平均粒徑為(542.1±12.5) nm,PDI為0.167±0.024,見(jiàn)圖6。游離斯皮諾素因其本身分子量較小,不能用納米激光粒度儀測(cè)定粒徑大小。而由于磷脂的雙親結(jié)構(gòu),在水中可以形成具有脂質(zhì)雙分子層的囊泡結(jié)構(gòu),當(dāng)藥物被包裹于其中就形成了通常的脂質(zhì)體,故形成了具有一定粒徑的磷脂復(fù)合物,且分散較為均勻,穩(wěn)定性好。

    圖6 SPI-PLC的水分散體粒徑圖Fig.6 Diameter distribution of aqueous dispersion of SPI-PLC

    2.3.4 表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定 實(shí)驗(yàn)所得標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為A=0.0172 C-0.0346,R2=0.9999,結(jié)果表明斯皮諾素在2~100 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,可用于斯皮諾素含量的計(jì)算。斯皮諾素、物理混合物和SPI-PLC在正辛醇-水系統(tǒng)中的表觀分配系數(shù)如表4所示。結(jié)果表明SPI-PLC在水和正辛醇中的溶解度均大于原藥及物理混合物,且形成磷脂復(fù)合物后表觀油水分配系數(shù)P值也增大。一方面可能是其無(wú)定型的狀態(tài)及在水中形成膠團(tuán)的增溶作用使水溶性有所增加,另一方面則可能是由于藥物極性基團(tuán)與磷脂締合,使藥物極性基團(tuán)受到屏蔽,表現(xiàn)出較強(qiáng)的脂溶性。從物理混合物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,磷脂的存在只是有限地改善了SPI在水中和正辛醇中的溶解性能。

    表4 斯皮諾素、物理混合物和SPI-PLC在正辛醇-水系統(tǒng)中的表觀分配系數(shù)(n=3)Table 4 Apparent partition coefficient of SPI,physical mixture,and SPI-PLC in octyl alcohol-water system(n=3)

    3 結(jié)論

    采用溶劑揮發(fā)法成功制備了SPI-PLC,并得出最優(yōu)工藝條件。以丙酮作為反應(yīng)溶劑,藥脂比為1∶16.42,攪拌速度、反應(yīng)溫度和反應(yīng)時(shí)間分別為836 r/min、40 ℃和3.27 h制備的SPI-PLC的復(fù)合率可達(dá) 90.75%±0.64%(n=3),且制備工藝操作簡(jiǎn)便。工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)表明,選擇的工藝條件穩(wěn)定,基本可行。UV、IR圖譜表明SPI-PLC并不是磷脂分子與斯皮諾素簡(jiǎn)單的物理混合,而可能是分子間相互作用形成的。表觀油水分配實(shí)驗(yàn)表明,形成的具有一定粒度的磷脂復(fù)合物既增加了斯皮諾素的水溶性,又增加了其脂溶性,因此預(yù)測(cè)可提高生物利用度。后期通過(guò)Caco-2細(xì)胞模型跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)和生物利用度測(cè)定實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究SPI-PLC的膜滲透性和生物利用度的改善情況。

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