細(xì)胞外囊泡在慢性肝病中作用的研究進(jìn)展*

王飛蝦， 李蒙蒙， 王 玲， 賈 巖， 張 峰， 鄭仕中

(南京中醫(yī)藥大學(xué)江蘇省中藥藥效與安全性評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 江蘇 南京 210023)

慢性肝病是危害人類健康的重大疾病，系指在各種病因的刺激下，肝臟的正常生理和生化功能發(fā)生長期損傷，進(jìn)而出現(xiàn)的一系列臨床癥狀，主要包括病毒性肝炎、酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪肝、肝纖維化和肝癌等。慢性肝病的發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，與肝臟中不同類型細(xì)胞間的信息與物質(zhì)交流異常密切相關(guān)。近年來，生命科學(xué)研究領(lǐng)域的一項(xiàng)突破是發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外囊泡(extracellular vesicles, EVs)作為細(xì)胞間相互作用的重要媒介，在多種生理與病理狀態(tài)下發(fā)揮關(guān)鍵作用[1]。EVs是磷脂雙分子層封閉形成的大小不同的微粒，可由所有類型的細(xì)胞合成、分泌并釋放到細(xì)胞外環(huán)境中，因而，其廣泛存在于機(jī)體主要的體液中[2]。以往認(rèn)為EVs的主要功能是將過量或無用的細(xì)胞成分運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞外[3]；但越來越多的證據(jù)表明，EVs攜帶有多種生物活性物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等，可作為細(xì)胞間信息轉(zhuǎn)導(dǎo)的載體，從而發(fā)揮廣泛的生物學(xué)功能并參與某些疾病的病理進(jìn)程[4]。近年來，EVs在慢性肝病發(fā)生與發(fā)展中的作用被不斷揭示，本文對(duì)此作一綜述，以期為慢性肝病病理機(jī)制與潛在干預(yù)靶標(biāo)的研究提供新的思路。

1 EVs的分類與功能

EVs是一類由細(xì)胞分泌的具有雙層脂質(zhì)膜的微小囊泡，直徑在30～2 000 nm范圍內(nèi)[5]。根據(jù)其直徑大小及在細(xì)胞內(nèi)生物合成過程的不同，EVs可分為3種類型，即外泌體、微泡和凋亡小體，外泌體是在核內(nèi)體成熟和回收期間在核內(nèi)體內(nèi)形成的小的膜結(jié)合囊泡，直徑一般為40～150 nm；經(jīng)細(xì)胞質(zhì)膜出芽形成的EVs稱為微泡，其直徑在50～1 000 nm；凋亡小體由凋亡細(xì)胞大規(guī)模的質(zhì)膜泡化而形成，是細(xì)胞發(fā)生死亡時(shí)伴隨的一種形式[6]。

1.1外泌體 外泌體起源于腔內(nèi)囊泡(intraluminal vesicles, ILVs)，ILVs由細(xì)胞內(nèi)胞內(nèi)體膜的內(nèi)陷形成，后者被稱為多泡體(multivesicular bodys, MVBs)，最后經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)必需內(nèi)體分選復(fù)合物(endosomal sorting complexes required for transport, ESCRT)依賴性機(jī)制或非ESCRT依賴性機(jī)制分泌進(jìn)入細(xì)胞外環(huán)境[7]。該途徑的第一步是ESCRT-0與早期核內(nèi)體相結(jié)合，再向內(nèi)出芽并選擇性地包裹部分細(xì)胞漿成分，形成管腔內(nèi)小體,然后經(jīng)ESCRT-I和ESCRT-II的作用形成出芽小泡，并被ESCRT-III剪切形成晚期核內(nèi)體(也稱多泡體)。一些多泡體可與溶酶體結(jié)合進(jìn)而發(fā)生降解；而另一些多泡體則可與細(xì)胞膜融合，通過胞吐作用釋放到細(xì)胞外環(huán)境中，即形成外泌體[8]。根據(jù)外泌體分泌機(jī)制的不同，其在生化組成上也有所不同，例如，外泌體的生成需要神經(jīng)酰胺和將其轉(zhuǎn)化為神經(jīng)酰胺70的中性鞘磷脂酶；外泌體在MVBs與細(xì)胞膜融合后被分泌出細(xì)胞的過程依賴于小GTP酶，例如RAB27A、RAB11和RAB31等[9]。外泌體由其來源細(xì)胞分泌進(jìn)入細(xì)胞外環(huán)境后，可經(jīng)旁分泌途徑被作用于受體細(xì)胞，也可經(jīng)血液循環(huán)作用于全身系統(tǒng)。目前已明確的是，外泌體被受體細(xì)胞吸收后，其內(nèi)含有的活性蛋白質(zhì)、mRNA、微小RNA(microRNA，miR)和脂質(zhì)等成分可以調(diào)節(jié)受體細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯及關(guān)鍵酶促反應(yīng)等過程進(jìn)而影響受體細(xì)胞的表型和功能[10]，具體的調(diào)節(jié)機(jī)制由外泌體來源細(xì)胞和受體細(xì)胞的類型及其所處的生理與病理狀態(tài)所決定。

1.2微泡 微泡通常是細(xì)胞在受到應(yīng)激(如炎癥反應(yīng)、凋亡等)時(shí)，經(jīng)細(xì)胞質(zhì)膜的出芽方式產(chǎn)生，通過胞吐作用釋放到細(xì)胞外環(huán)境中的一些膜性小囊泡[11]。這個(gè)過程依賴于鈣離子、鈣蛋白酶和細(xì)胞骨架的重組，應(yīng)激狀態(tài)下，細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，轉(zhuǎn)位酶等多種酶的活性被抑制，導(dǎo)致磷脂酰絲氨酸暴露于細(xì)胞膜外側(cè)發(fā)生脂質(zhì)聚集和偏位，而不能轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)膜，同時(shí)膜曲率蛋白介導(dǎo)的膜側(cè)向再分布即膜的彎曲以及膜之間的吸引力使得細(xì)胞骨架發(fā)生重構(gòu)，進(jìn)而使質(zhì)膜向細(xì)胞外突出形成“出芽”并脫落成微泡[12]。微泡內(nèi)含物及其表面的膜結(jié)合蛋白、黏附分子和特異性抗原等是其發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的基礎(chǔ)[13]。研究發(fā)現(xiàn)，微泡與受體細(xì)胞融合或直接釋放內(nèi)含物，可使受體細(xì)胞的基因表達(dá)或功能發(fā)生改變；微泡表面的抗原分子與受體細(xì)胞表面的抗體結(jié)合，可激活受體細(xì)胞并啟動(dòng)相應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，產(chǎn)生應(yīng)答[14]。與外泌體類似，微泡也可以隨血液循環(huán)遷徙至全身各處，從而調(diào)節(jié)遠(yuǎn)離起源細(xì)胞的組織細(xì)胞[15]。

2 EVs調(diào)控慢性肝病的分子機(jī)制

2.1非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD) NAFLD與肥胖、糖尿病、血脂異常和高血壓相關(guān)，是代謝綜合征的肝臟表現(xiàn)形式。現(xiàn)有研究表明在肝臟病理情況下，肝源性循環(huán)EVs逐漸增加，并與NAFLD的病理進(jìn)程相關(guān)。肝源性循環(huán)EVs的數(shù)量能夠反映疾病進(jìn)程，可以成為診斷NAFLD的生物標(biāo)志物。例如，在膽堿缺乏及L-氨基酸飲食誘導(dǎo)的小鼠NAFLD模型中發(fā)現(xiàn)血清EVs含量顯著增加。Povero等[16]通過對(duì)比NAFLD模型組小鼠與空白組小鼠的循環(huán)血液及肝臟中EVs水平，發(fā)現(xiàn)其具有顯著差異，證明了NAFLD動(dòng)物模型中肝臟是循環(huán)EVs的主要來源器官；同時(shí)發(fā)現(xiàn)NAFLD疾病下，2種microRNAs(miR-122和miR-192)明顯富集在血液中；此外，在非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis，NASH)小鼠中發(fā)現(xiàn)微泡水平與肝細(xì)胞凋亡、纖維化和新生血管形成有關(guān)，其水平隨肝臟損傷程度加重而升高。近期一些研究還發(fā)現(xiàn)，肝細(xì)胞釋放的EVs參與了NAFLD的病理過程。過度飽和脂肪酸沉積后，小鼠肝細(xì)胞釋放微泡，微泡數(shù)量與炎癥反應(yīng)嚴(yán)重程度相關(guān)；進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，微泡表面的血管非炎癥蛋白-1(vascular non-inflammatory molecure 1，vanin-1)介導(dǎo)微泡進(jìn)入血管內(nèi)皮細(xì)胞并將其激活，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞遷徙和病理性血管形成。vanin-1包含糖基磷脂酰肌醇，與細(xì)胞間黏附和遷徙有關(guān)，vanin-1介導(dǎo)微泡在血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)化中發(fā)揮了“脂質(zhì)筏”的作用[17]。此外，最近的研究還發(fā)現(xiàn)，在脂毒性誘導(dǎo)的NASH小鼠模型中，EVs釋放增加；同時(shí)，棕櫚酸酯和溶血磷脂酰膽堿(lysophosphatidylcholine，LPC)均能刺激小鼠、大鼠和人肝細(xì)胞釋放EVs，證明了毒性脂質(zhì)導(dǎo)致肝細(xì)胞大量分泌EVs是一種保守應(yīng)答反應(yīng)。脂毒性導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷時(shí)，損傷的肝細(xì)胞釋放EVs增加并顯著激活肝臟的巨噬細(xì)胞[18]。深入的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，棕櫚酸酯誘導(dǎo)肝細(xì)胞釋放的EVs中的腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TNF-related apoptosis-inducing ligand, TRAIL)并不誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡，而是引起巨噬細(xì)胞中受體相互作用蛋白激酶1和NF-κB依賴性方式的炎癥反應(yīng)。表明非典型TRAIL誘導(dǎo)的炎癥以及NLRP3炎癥小體的激活在NASH的發(fā)生和進(jìn)展中是相關(guān)聯(lián)的[19]。而另有研究表明，LPC誘導(dǎo)的肝細(xì)胞來源的EVs中含有CXC趨化因子配體10(CXC chemokine ligand 10，CXCL10)，其釋放依賴于混合譜系激酶3(mixed lineage kinase 3, MLK3)的激活，敲除MLK3可以阻止小鼠NASH的發(fā)生與發(fā)展，這些作用與循環(huán)EVs的數(shù)目減少及其中所含CXCL10含量下降有關(guān)；該研究還揭示了EVs中含有的細(xì)胞色素P4502E1可作為肝細(xì)胞源EVs的特異性標(biāo)志物[20]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可以導(dǎo)致肝細(xì)胞釋放微粒，進(jìn)而影響NAFLD的進(jìn)程。棕櫚酸酯可引起肝細(xì)胞源EVs的大量釋放，而研究表明棕櫚酸可以激活肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，并且誘導(dǎo)肝細(xì)胞在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激肌醇蛋白1α的介導(dǎo)下分泌富含C16∶0神經(jīng)酰胺的EVs[21]。另一方面，在膽堿缺乏及L-氨基酸條件性飲食誘導(dǎo)的小鼠NASH模型中，循環(huán)EVs中含有肝臟特異性miR-122，而miR-122通常與Argonaute-2(AGO2)形成miR-122/AGO2復(fù)合體，發(fā)生特異性濃縮進(jìn)而發(fā)揮其作為肝臟損傷標(biāo)志物的作用。在疾病狀態(tài)下，存在miR-122從AGO2轉(zhuǎn)移到EVs中的現(xiàn)象；該研究也顯示，在高脂飲食誘導(dǎo)的小鼠NASH模型中，循環(huán)EVs含量增加；NASH患者的肝臟中，肝細(xì)胞衍生的EVs中線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)含量增加，而mtDNA引發(fā)炎癥，從而激活免疫細(xì)胞受體Toll樣受體9進(jìn)而促進(jìn)NASH患者的炎癥[22]。這些研究結(jié)果均表明，肝臟來源EVs及其內(nèi)含物能夠反映NAFLD疾病進(jìn)程或可作為NAFLD疾病進(jìn)程中潛在的生物標(biāo)志物。肝細(xì)胞參與內(nèi)源性物質(zhì)代謝和藥物代謝，而參與這些過程的許多酶被包裹進(jìn)EVs并分泌到血液中，肝損傷時(shí)EVs中包裹的分子物質(zhì)受到改變進(jìn)而又影響了NAFLD疾病進(jìn)程，那么通過改變EVs中包裹的分子物質(zhì)的種類和含量并參與肝細(xì)胞代謝繼而達(dá)到對(duì)NAFLD發(fā)生發(fā)展的調(diào)控作用不失為一種新的治療手段。

2.2酒精性脂肪性肝病 Momen-Heravi等[23]研究發(fā)現(xiàn)，酒精喂養(yǎng)小鼠后，循環(huán)EVs數(shù)量顯著增加，這些EVs主要由外泌體組成；進(jìn)一步通過對(duì)外泌體進(jìn)行微陣列篩選，發(fā)現(xiàn)酒精慢性喂養(yǎng)的小鼠血清與對(duì)照組小鼠血清中的微泡相比，含有大量與炎癥相關(guān)的microRNAs，包括miR-192、miR-122、miR-30a、miR-744、miR-30b和miR-130a。通過ROC曲線分析表明miR-192、miR-122和miR-30a具有較高的診斷價(jià)值，可以識(shí)別酒精誘導(dǎo)的肝損傷。近年來，許多研究者分析了乙醇誘導(dǎo)肝細(xì)胞或活化的巨噬細(xì)胞釋放的EVs中攜帶蛋白質(zhì)的差異性，如肝細(xì)胞衍生EVs中的CD40配體，可以促進(jìn)體內(nèi)和體外的酒精性脂肪肝實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械木奘杉?xì)胞活化；同時(shí)，該研究還發(fā)現(xiàn)在人酒精性脂肪肝樣本中，肝臟細(xì)胞衍生的EVs可作為酒精性脂肪肝的潛在生物標(biāo)志物。目前多項(xiàng)研究已經(jīng)表明，酒精性脂肪肝患者中的循環(huán)EVs增加，甚至在消耗過量乙醇的患者中也增加[24]。這些結(jié)果均表明，肝臟EVs內(nèi)含物或可成為酒精性脂肪肝的潛在生物標(biāo)志物，在酒精性脂肪肝病發(fā)病過程中，肝細(xì)胞與炎癥細(xì)胞的信號(hào)交流及物質(zhì)傳遞發(fā)揮著至關(guān)重要的作用，而現(xiàn)有研究揭示肝細(xì)胞EVs可調(diào)節(jié)肝臟中炎癥細(xì)胞如單核巨噬細(xì)胞的活性進(jìn)而調(diào)節(jié)肝臟的炎癥反應(yīng)達(dá)到影響酒精性脂肪肝病的進(jìn)展，但仍需對(duì)EVs進(jìn)一步研究并為揭示酒精性脂肪肝疾病發(fā)生、進(jìn)展和發(fā)現(xiàn)新的治療靶點(diǎn)提供新思路。

2.3病毒性肝炎 EVs參與病毒性肝炎的發(fā)病機(jī)理中的多個(gè)環(huán)節(jié)，包括病毒擴(kuò)散、宿主免疫調(diào)節(jié)和微環(huán)境調(diào)控等[25]。體外研究發(fā)現(xiàn)，丙肝病毒可以通過肝細(xì)胞分泌的EVs傳播，并且一定程度上可以防止被抗體中和。在對(duì)丙肝的研究中發(fā)現(xiàn)，肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞如枯否細(xì)胞、肝竇內(nèi)皮細(xì)胞以及淋巴細(xì)胞和循環(huán)淋巴細(xì)胞釋放的EVs可以通過限制病毒復(fù)制來終止肝炎進(jìn)展。例如，與病毒活動(dòng)靜息期患者或健康人體相比，丙肝病毒活化型患者體內(nèi)T淋巴細(xì)胞能夠分泌大量EVs進(jìn)入血液循環(huán)[26]。肝炎病毒還可以利用外泌體的生物合成機(jī)制以促進(jìn)病毒擴(kuò)散，例如，甲肝病毒顆?？梢酝ㄟ^MVBs進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)和釋放。類似地，乙肝病毒的釋放也需要產(chǎn)生MVBs的核內(nèi)體細(xì)胞機(jī)制。因此，通過干擾MVBs機(jī)制可以阻止病毒顆粒成熟，這表明阻斷EVs釋放可以抑制病毒繁殖[27]。近年來，越來越多的證據(jù)表明EVs可以成為丙肝病毒逃避免疫清除的一種方式。研究發(fā)現(xiàn)慢性丙肝患者血清中分離的EVs含有丙肝病毒的RNA以及可以促進(jìn)丙肝病毒復(fù)制的物質(zhì)，如Argonaute-2、熱休克蛋白(heat shock protein，HSP)90和miR-122等；而經(jīng)miR-122的抑制劑或HSP90抑制劑處理后，可以顯著抑制丙肝病毒經(jīng)EVs傳遞至幼稚細(xì)胞(血液中各種還沒發(fā)育成熟的細(xì)胞)。進(jìn)一步的機(jī)制探究發(fā)現(xiàn)這可能是通過中斷病毒攝入的機(jī)制，如通過中和早期核內(nèi)體的pH，進(jìn)而防止Huh7.5細(xì)胞感染丙型肝炎病毒[28]。此外，有研究表明，干擾素(interferon，INF)的抗病毒作用可能是通過微粒介導(dǎo)產(chǎn)生的，Li等[29]的研究表明，EVs可以被肝竇內(nèi)皮細(xì)胞攝取，且EVs可以在體內(nèi)和體外通過介導(dǎo)IFN-α誘導(dǎo)的抗病毒分子如2’-5’寡聚腺苷酸合成酶和蛋白激酶等從肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到乙肝病毒感染的肝細(xì)胞，繼而抑制乙肝病毒復(fù)制，而這些EVs的抗病毒活性都需要IFN-α誘導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子以及轉(zhuǎn)錄活化因子1的參與?？傊F(xiàn)有研究雖然還不能斷定EVs在肝炎病毒感染中的作用，但外泌體中攜帶有多種多樣的抗病毒分子使得病毒很難進(jìn)化出針對(duì)其中一種或多種的躲避機(jī)制，那么，通過EVs識(shí)別和傳遞特定的抗病毒分子或藥物使其被肝炎病毒挾持，將其包裹的抗病毒藥物或分子作用于肝臟并轉(zhuǎn)移到已感染的肝細(xì)胞中，從而達(dá)到抗病毒的臨床用途，很有可能是慢性乙肝和丙肝的潛在治療策略[30]。

2.4肝纖維化 肝纖維化是各種慢性肝病發(fā)展至肝硬化所共有的病理過程，是影響慢性肝病預(yù)后的重要環(huán)節(jié)?，F(xiàn)已公認(rèn)肝星狀細(xì)胞(hepatic stellate cells，HSCs)的活化是肝纖維化發(fā)生發(fā)展的核心環(huán)節(jié)[31]。目前對(duì)外泌體調(diào)控HSCs的研究非常有限。有研究發(fā)現(xiàn)，血小板衍生生長因子刺激的膽管細(xì)胞和HSCs可以釋放含有Hedgehog配體的EVs。同樣，從膽管結(jié)扎后的血漿或膽汁中分離的EVs也富集有Hedgehog配體。Hedgehog配體在肝竇內(nèi)皮細(xì)胞中具有誘導(dǎo)活化標(biāo)記物表達(dá)的生物活性[32]。有研究發(fā)現(xiàn)，HSCs可以產(chǎn)生含有結(jié)締組織生長因子(connective tissue growth factor，CTGF)的外泌體，旁分泌作用于相鄰HSCs，促進(jìn)HSCs的活化與肝纖維化的發(fā)展[33]；HSCs可以通過外泌體將miR-214傳輸進(jìn)相鄰HSCs中抑制CTGF的表達(dá)[34]；HSCs還可以分泌包含有Twist1的外泌體作用于相鄰HSCs，促進(jìn)胞內(nèi)miR-214的表達(dá)[35]；整合素和硫酸乙酰肝素蛋白多糖相互作用介導(dǎo)了HSCs外泌體與靶細(xì)胞之間的結(jié)合[36]。此外，Wang等[37]新近報(bào)道，內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生含有SK1的外泌體，通過外泌體膜上的纖連蛋白與HSCs膜上的整合素受體相互作用，使得外泌體黏附于HSCs表面，并通過Dynamin依賴性機(jī)制被HSCs攝入胞內(nèi)，進(jìn)而促進(jìn)HSCs活化。在肝纖維化進(jìn)程中，肝星狀細(xì)胞與其它肝臟非實(shí)質(zhì)細(xì)胞如肝竇內(nèi)皮細(xì)胞和枯否細(xì)胞之間的細(xì)胞交流對(duì)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展也發(fā)揮著重要的調(diào)控作用，肝臟中多種細(xì)胞均可以分泌EVs或作為EVs的靶細(xì)胞，因此，肝臟中細(xì)胞可通過自分泌或旁分泌的方式分泌EVs實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間的通訊進(jìn)而發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)，未來可以通過適當(dāng)?shù)耐緩秸{(diào)控EVs而達(dá)到阻斷肝纖維化進(jìn)展的目的。

2.5肝細(xì)胞癌(hepatocelluler carcinoma，HCC) 外泌體可由大多數(shù)類型細(xì)胞分泌，包括腫瘤細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn),相較于慢性乙型肝炎患者和肝硬化患者，肝細(xì)胞癌患者血清中外泌體含量升高；而且肝細(xì)胞癌患者血清外泌體中富集大量microRNAs，如在人類腫瘤包括HCC中突出表達(dá)的miR-21，以及外泌體可以顯著提高肝細(xì)胞癌患者血清中microRNA檢測的敏感性[38]。另有分析表明，HCC患者血清外泌體中miR-18a、miR-221、miR-222和miR-224表達(dá)量明顯高于慢性丙型肝炎患者或肝硬化患者。這說明HCC患者血清外泌體中的microRNA可作為HCC的新型生物標(biāo)志物[39]。此外，通過區(qū)分并比較HCC患者及肝移植后復(fù)發(fā)性HCC患者的血清外泌體中的特異性生物標(biāo)志物，結(jié)果表明復(fù)發(fā)性HCC患者的血清外泌體中microRNA如miR-718明顯降低，但miR-718顯著抑制HCC細(xì)胞的增殖，并且可能是腫瘤抑制型microRNA。這些結(jié)果證明了復(fù)發(fā)性HCC患者的血清外泌體中的microRNA可以幫助闡明復(fù)發(fā)性肝細(xì)胞癌的分子機(jī)制[40]。眾所周知，HCC的特征在于調(diào)節(jié)多種信號(hào)通路的失調(diào)行為，如局部擴(kuò)散和傾向多灶腫瘤發(fā)展等[41]。進(jìn)一步的機(jī)制探討指出，轉(zhuǎn)化生長因子β激活激酶-1可能通過調(diào)節(jié)外泌體中microRNA發(fā)揮其生物學(xué)作用，從而影響肝癌的發(fā)生及HHC細(xì)胞的命運(yùn)[42]。Wei等[43]發(fā)現(xiàn)HCC細(xì)胞源外泌體的生物活性受液泡分選蛋白4(vacuolar sorting protein 4，Vps4A)的調(diào)控，而Vps4A在HCC組織中是下調(diào)的，Vps4A的下調(diào)與腫瘤的進(jìn)展、轉(zhuǎn)移和惡化的預(yù)后密切相關(guān)；同時(shí)，該研究還表明Vps4A可以抑制HCC細(xì)胞源外泌體的生物活性以及HCC細(xì)胞對(duì)外泌體的攝取，過表達(dá)Vps4A會(huì)影響HCC細(xì)胞對(duì)外泌體中致癌microRNA的分泌和抑癌microRNA的攝取。另一方面，HCC源EVs可以增強(qiáng)宿主細(xì)胞的抗腫瘤免疫應(yīng)答；應(yīng)激誘導(dǎo)的熱休克蛋白是已知的“危險(xiǎn)信號(hào)”，HCC源EVs中的HSP可以通過激活自然殺傷細(xì)胞以及增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性，介導(dǎo)抗腫瘤免疫。此外，HepG2細(xì)胞在給予熱休克應(yīng)激蛋白或抗癌藥物治療下釋放的帶有HSP的EVs增多，并且可以刺激NK細(xì)胞的殺傷活性。此外，化療劑處理HepG2細(xì)胞后分泌的EVs中的HSP可以誘導(dǎo)NK細(xì)胞的特異性應(yīng)答并使腫瘤細(xì)胞具有優(yōu)異的免疫原性，證實(shí)了調(diào)節(jié)EVs中HSP在HCC免疫治療中的重要作用[44]。這些都表明外泌體在抗腫瘤中可以起到重要的調(diào)節(jié)作用，而因外泌體具有廣泛的生物分布性和生物相容性，還可充當(dāng)藥物的有效運(yùn)輸載體，通過運(yùn)輸小分子藥物、小干擾RNA或microRNA等達(dá)到抗腫瘤的作用，這也為抗腫瘤免疫治療提供了潛在的可能性。

3 結(jié)論與展望

綜上所述，肝臟疾病通常導(dǎo)致EVs釋放增加，或?qū)⒉煌膬?nèi)含物如蛋白質(zhì)、脂質(zhì)和核酸等分選進(jìn)這些EVs中，而其中的一些變化可以推動(dòng)發(fā)病進(jìn)程。此外，EVs內(nèi)的組分改變，可能反映了它背后疾病條件的變化。EVs存在于循環(huán)體液或血液中，雖然外泌體和微泡可以根據(jù)其大小來定義，但卻無法用其大小來進(jìn)行區(qū)分，那么如何根據(jù)外泌體和微泡中特異性生物標(biāo)志物的表達(dá)進(jìn)行區(qū)分循環(huán)EVs也變得尤為重要。此外，EVs攜帶有多種生物活性物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等進(jìn)而發(fā)揮其生物學(xué)功能，因而如何進(jìn)行EVs內(nèi)的物質(zhì)確定與分析還是一個(gè)丞待解決的問題。另一方面，在特定肝臟疾病下，EVs的來源具有多源性，可來自不同的肝臟細(xì)胞，均可以發(fā)揮其細(xì)胞間信息轉(zhuǎn)導(dǎo)的生物學(xué)作用，因此，鑒定用于細(xì)胞間通訊的供體和受體細(xì)胞也需要進(jìn)一步闡明。

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