血小板血型抗體與分娩次數(shù)及早期流產(chǎn)的相關(guān)性分析

葉水文，張楠，饒美英

人類血小板（PLT）血型抗體是指能導致PLT破壞的人類白細胞抗原（HLA）抗體和人類血小板抗原(HPA）抗體的總稱[1]。研究證實，妊娠期女性血液中的PLT血型抗體會導致早期流產(chǎn)、新生兒同種免疫血小板減少性紫癜(NAITP)等一系列不良反應(yīng)[2-5]。本文采用固相凝集法對孕齡36～40周的女性PLT血型抗體進行檢測，以探討該抗體與分娩次數(shù)及早期流產(chǎn)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選擇2016年4月-2016年12月在南昌大學第二附屬醫(yī)院產(chǎn)科進行產(chǎn)前檢查的孕齡為36～40周的初產(chǎn)婦142例、經(jīng)產(chǎn)婦244例（既往分娩次數(shù)≥1）、無早期流產(chǎn)史120例、有早期流產(chǎn)史的246例（早期流產(chǎn)次數(shù)≥1）為研究對象。四組孕婦皆無輸血史且不規(guī)則抗體篩查陰性。四組孕婦的年齡、分娩方式、妊娠周期等無統(tǒng)計學差異。排除標準：⑴知情拒絕者。⑵擬提前終止妊娠者。隨訪后期提前主動終止妊娠的孕婦，或因其他意外情況等提前被動終止妊娠的孕婦 （如摔傷、車禍、孕婦因患其他疾病搶救母親生命時需舍棄胎兒等情況）。

1.2 方法

1.2.1 標本的采集 采集受檢者的靜脈血液標本3ml，并將其置于含有乙二胺四乙酸二鉀的采血管中進行抗凝處理，在3000r/min的速度下離心15min，吸取上層血漿。

1.2.2 抗體的檢測 選擇進口的固相凝集法血小板抗體檢測試劑盒，嚴格按照試劑盒說明進行操作：⑴向反應(yīng)孔中加入50μl血小板懸液，輕搖反應(yīng)板10s，平板離心機50g離心5min，使血小板固定在反應(yīng)孔底部，倒出反應(yīng)孔中液體，洗滌工作液洗滌3次，最后一次洗滌后將反應(yīng)板倒置于吸水紙上吸干殘余液體；⑵立即向每個反應(yīng)孔中加入100μl低離子強度溶液，并分別在相應(yīng)孔中加入50μl樣本、陽性及陰性對照，封口膠封好混勻置于37℃水浴孵育35min；⑶棄去封口膜洗滌5次，加入50μl抗人IgG及指示紅細胞，輕輕振蕩混勻，200g離心5min。紅細胞平鋪于反應(yīng)孔的底部表面或者紅細胞只能夠結(jié)合到部分孔底部的情況為陽性；以紅細胞在反應(yīng)孔底部中央發(fā)生紅細胞聚集的情況為陰性。

1.2.3 統(tǒng)計分析 采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料相關(guān)性分析采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 初產(chǎn)婦組與經(jīng)產(chǎn)婦組PLT血型抗體檢測結(jié)果比較 初產(chǎn)婦組陽性例數(shù)8例，陽性率5.6%（8/142）。經(jīng)產(chǎn)婦組陽性例數(shù)30例，陽性率12.3%（30/244），兩組比較差異有統(tǒng)計學意義 （χ2=4.54，P<0.05）。 見表 1。

表1 初產(chǎn)婦組與經(jīng)產(chǎn)婦組PLT血型抗體的陽性率比較

2.2 無早期流產(chǎn)組與有早期流產(chǎn)組PLT血型抗體檢測結(jié)果比較 無早期流產(chǎn)組陽性例數(shù)8例，陽性率6.8%（8/120）。有流產(chǎn)史組陽性例數(shù)28例，陽性率11.4%，兩組比較差異有統(tǒng)計學意義 （χ2=3.91，P<0.05）。 見表 2。

表2 無早期流產(chǎn)組與有早期流產(chǎn)組PLT血型抗體的陽性率比較

3 討論

PLT血型抗原主要分為兩類：一類是為非特異性抗原，與AB0血型系統(tǒng)和HLA有關(guān)，另一類是血小板特異的抗原（HPA），主要有5個血型系統(tǒng)為HPA-1 （Zw）、HPA-2 （Ko 系統(tǒng)）、HPA-3、HPA-4、HPA-5[6]。PLT血型抗原不合是導致機體產(chǎn)生PLT血型抗體的主要原因，機體被HPA或HLA抗原免疫獲得PLT血型抗體，這種免疫可由輸血、妊娠而獲得[7-10]。研究顯示母嬰PLT血型不合的妊娠會導致母親對胎兒PLT抗原免疫產(chǎn)生抗體，這種IgG抗體可以通過胎盤屏障，對胎兒的血小板進行破壞，胎兒的血小板減少則會誘發(fā)流產(chǎn)；即使未出現(xiàn)早期流產(chǎn)的情況，也可能因新生兒血小板減少造成新生兒同種免疫性血小板減少癥[11-13]。

本研究采用固相凝集法對妊娠期婦女的HLA抗體和HPA抗體進行檢測[14]，發(fā)現(xiàn)既往有分娩史的經(jīng)產(chǎn)婦血小板血型抗體陽性率為12.3%，明顯高于初產(chǎn)婦（5.6%），既往分娩史組與初產(chǎn)婦組有顯著差異（P＜0.05）。有早期流產(chǎn)史的女性PLT血型抗體陽性率為11.4%，明顯高于無早期流產(chǎn)史的女性（6.8%），有早期流產(chǎn)史組與無早期流產(chǎn)史組有顯著差異（P＜0.05）。且國內(nèi)文獻報道對2038例孕婦進行血小板抗體篩查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)妊娠史（包括流產(chǎn)、分娩）的經(jīng)產(chǎn)婦PLT血型抗體陽性率為12.5%[15]，與本文高度一致。從而進一步證實PLT血型抗體與既往分娩和早期流產(chǎn)密切相關(guān)。但在抗體篩查過程中發(fā)現(xiàn)有2例孕婦PLT血型抗體陽性，且無分娩史及早期流產(chǎn)史，查其病例無輸血史，其抗體可能與藥物或試驗因素有關(guān)。

目前國內(nèi)尚未對PLT抗體的進行常規(guī)孕檢，但隨著二胎的開放，母嬰PLT抗原不合的妊娠概率越發(fā)增大，增加了流產(chǎn)風險。綜上，為了預防和減少妊娠期女性早期流產(chǎn)以及新生兒同種免疫血小板減少性紫癜(NAITP)的發(fā)生，對孕婦尤其是既往有分娩或早期流產(chǎn)的妊娠女性用固相凝集法進行PLT抗體篩查十分必要。