美國(guó)馬傳染性貧血監(jiān)測(cè)與防控分析

朱來(lái)華，王 艷，季新成，周仲芳，顧志軍，劉金龍，竇樹(shù)龍，顧炳泉

（1.山東出入境檢驗(yàn)檢疫局，山東青島 266002；2.上海出入境檢驗(yàn)檢疫局，上海 200035；3.國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，北京 100088；4.廣東出入境檢驗(yàn)檢疫局，廣東廣州 510623；5.無(wú)錫出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇無(wú)錫 214101；6.南通出入境檢驗(yàn)檢疫局，江蘇南通 226004）

馬傳染性貧血（Equine infectious anemia，EIA）是由反轉(zhuǎn)錄病毒科慢病毒屬的馬傳染性貧血病毒（Equine infectious anemia virus，EIAV）引起馬屬動(dòng)物的一種急性烈性傳染病。EIA的傳播途徑是多方面的，主要是通過(guò)吸血昆蟲(chóng)（虻、蚊、蠓等）的叮咬而機(jī)械性傳染，也可經(jīng)消化道和交配傳染，還可經(jīng)病毒污染的醫(yī)療器械散播傳染[1]。EIA在全球大多數(shù)國(guó)家呈地方性流行；我國(guó)EIA的陽(yáng)性檢出率逐年下降，有望在2020年消滅EIA。

EIA在美國(guó)呈散發(fā)性流行，在各州均有零星發(fā)生。為了控制EIA，美國(guó)農(nóng)業(yè)部（United States department of agriculture，USDA）動(dòng)植物衛(wèi)生檢驗(yàn) 署（Animal and plant health inspection service，APHIS）獸醫(yī)局（Veterinary services，VS）參考了美國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生協(xié)會(huì)（Animal health association）、美國(guó)馬委員會(huì)（American horse council）、美國(guó)馬獸醫(yī)協(xié)會(huì)（American association of equine practitioners）的建議，制定了EIA監(jiān)測(cè)與防控程序，并在全美國(guó)實(shí)施[2]。

1 監(jiān)測(cè)程序

USDA對(duì)EIA實(shí)施被動(dòng)監(jiān)測(cè)程序，規(guī)定了監(jiān)測(cè)頻率、實(shí)驗(yàn)室、檢測(cè)方法與試劑、檢測(cè)人員及送樣人員要求。

USDA統(tǒng)一要求每年至少檢測(cè)1次，在高風(fēng)險(xiǎn)州（如EIA地方性流行地區(qū)）要求每6個(gè)月檢測(cè)1次。強(qiáng)制性要求在馬匹參加展覽或競(jìng)賽等事項(xiàng)、跨州調(diào)運(yùn)、變更馬主、進(jìn)入拍賣(mài)或銷(xiāo)售市場(chǎng)、配種前，必須攜帶符合UADA要求的陰性檢測(cè)報(bào)告。USDA規(guī)定，送樣人員可以是州或聯(lián)邦的動(dòng)物衛(wèi)生官員或USDA/APHIS/VS認(rèn)可的獸醫(yī)。

EIA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室可以是官方檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室或私立實(shí)驗(yàn)室，但必須經(jīng)過(guò)USDA/APHIS/VS認(rèn)可，并通過(guò)美國(guó)國(guó)家獸醫(yī)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室（National veterinary services laboratories，NVSL）組織的年度能力驗(yàn)證。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員必須接受NVSL培訓(xùn)并通過(guò)能力驗(yàn)證試驗(yàn)。EIA診斷的實(shí)驗(yàn)室方法和試劑需要經(jīng)USDA批準(zhǔn)登記，其檢測(cè)方法主要包括ELISA、AGID及免疫印跡試驗(yàn)。

1.1 檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室

官方檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室包括NVSL和肯塔基大學(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室以及聯(lián)邦/州實(shí)驗(yàn)室。NVSL是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）EIA參考實(shí)驗(yàn)室，也是USDA的參考和確診實(shí)驗(yàn)室，主要提供標(biāo)準(zhǔn)診斷試劑、診斷試驗(yàn)培訓(xùn)、能力驗(yàn)證、實(shí)施科學(xué)研發(fā)工作以提高診斷技術(shù)?？纤髮W(xué)獸醫(yī)診斷實(shí)驗(yàn)室是美國(guó)的國(guó)家級(jí)EIA參考實(shí)驗(yàn)室，負(fù)責(zé)科研和咨詢(xún)。私立實(shí)驗(yàn)室也可以進(jìn)行EIA的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷，但必須經(jīng)USDA/APHIS/VS認(rèn)可與批準(zhǔn)。無(wú)論是官方檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室還是私立檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，都需按照NVSL提供的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)程序，使用USDA注冊(cè)登記的標(biāo)準(zhǔn)試劑進(jìn)行檢測(cè)，并按照規(guī)定的渠道報(bào)告檢測(cè)結(jié)果。這些實(shí)驗(yàn)室必須使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法，每年參加并通過(guò)NVSL組織的能力驗(yàn)證，并接受NVSL至少2年1次的檢查審核。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員

1.2.1 官方實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員 至少有1人接受NVSL培訓(xùn)并通過(guò)能力驗(yàn)證試驗(yàn)，掌握EIA的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷方法，并能對(duì)實(shí)驗(yàn)室其他技術(shù)人員進(jìn)行再培訓(xùn)。

1.2.2 私立實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員 在開(kāi)展檢測(cè)活動(dòng)前，接受NVSL檢查審核，所有技術(shù)人員接受NVSL培訓(xùn)并通過(guò)能力驗(yàn)證試驗(yàn)，掌握EIA的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷方法。

1.3 官方檢測(cè)方法

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法（ELISA、AGID和免疫印跡試驗(yàn)）需要經(jīng)USDA/APHIS/VS批準(zhǔn)登記，才能應(yīng)用于EIA的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷。

1.3.1 ELISA USDA批準(zhǔn)了4種用于EIA診斷的ELISA試劑盒，1種為競(jìng)爭(zhēng)性ELISA，另外3種為非競(jìng)爭(zhēng)性ELISA。競(jìng)爭(zhēng)性ELISA和2種非競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)p26核心蛋白抗原產(chǎn)生的抗體。另1種非競(jìng)爭(zhēng)性ELISA檢測(cè)抗體為p26核心蛋白和gp45病毒跨膜蛋白產(chǎn)生的抗體。ELISA反應(yīng)快速、靈敏，很少出現(xiàn)假陰性，但可能產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果。假陽(yáng)性結(jié)果可以通過(guò)AGID或其他參考實(shí)驗(yàn)室方法來(lái)確認(rèn)[3-5]。

1.3.2 瓊脂凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（AGID） AGID針對(duì)EIAV p26抗原（主要核心蛋白），與血液中存在的EIAV具有高度相關(guān)性，是國(guó)際上廣泛接受的EIA實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)診斷方法，是EIA陽(yáng)性結(jié)果確認(rèn)的實(shí)驗(yàn)室方法，因此被稱(chēng)為EIA診斷的金標(biāo)準(zhǔn)。AGID很少出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果，即使出現(xiàn)也是由于技術(shù)人員錯(cuò)誤操作引起的，可通過(guò)反復(fù)檢測(cè)來(lái)修正。假陰性結(jié)果出現(xiàn)可能是由于抗體滴度過(guò)低，或通常是由于對(duì)結(jié)果觀察的錯(cuò)誤解讀引起[5-6]。

1.3.3 補(bǔ)充實(shí)驗(yàn)室方法 免疫印跡試驗(yàn)（Immunoblot test），或稱(chēng)蛋白轉(zhuǎn)印試驗(yàn)（Western blot test），應(yīng)用EIAV的3種病毒結(jié)構(gòu)蛋白（囊膜蛋白gp90、跨膜蛋白gp45、主要核衣殼蛋白p26），比ELISA、AGID具有更高的敏感性和特異性。但因技術(shù)復(fù)雜、操作繁瑣、費(fèi)用昂貴，加之免疫印跡試驗(yàn)不是認(rèn)可的官方實(shí)驗(yàn)室方法。經(jīng)USDA/APHIS/VS批準(zhǔn)，只能在NVSL和肯塔基大學(xué)進(jìn)行，可以用于確認(rèn)模棱兩可的結(jié)果[7]。

1.4 官方實(shí)驗(yàn)室記錄表格

EIA實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果必須按USDA統(tǒng)一格式的官方實(shí)驗(yàn)室表格（Official laboratory form）進(jìn)行提交，如VS表格10-11：EIA實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（The VS Form 10-11：Equine Infectious Anemia Laboratory Test），由認(rèn)可獸醫(yī)簽署，認(rèn)可獸醫(yī)還可以要求馬主或馬主代理人共同簽名確認(rèn)，偽造、變?cè)毂砀駥儆谛淌路缸铮梢蕴幰粤P款或拘役。

1.5 強(qiáng)制檢測(cè)馬的目錄

馬匹在參加展覽或競(jìng)賽等事項(xiàng)、跨州移動(dòng)、變更馬主、進(jìn)入拍賣(mài)或銷(xiāo)售市場(chǎng)、配種前以及從外部農(nóng)場(chǎng)引入、從國(guó)外進(jìn)口前，必須獲得認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室出具的EIA陰性檢測(cè)報(bào)告。

1.5.1 參加展覽或競(jìng)賽等事項(xiàng)的馬 馬在參加展覽或競(jìng)賽等事項(xiàng)前，必須在當(dāng)?shù)毓芾聿块T(mén)規(guī)定的時(shí)間內(nèi)進(jìn)行EIA檢測(cè)，結(jié)果須為陰性。賽事官員查看有關(guān)文件，確保參加賽事的所有馬的EIA檢測(cè)結(jié)果為陰性。

1.5.2 跨州移動(dòng)的馬 馬在移動(dòng)前12個(gè)月內(nèi)EIA檢測(cè)結(jié)果為陰性，且隨運(yùn)輸工具攜帶準(zhǔn)許移動(dòng)的官方許可證。沒(méi)有陰性檢測(cè)報(bào)告或移動(dòng)許可證的馬，不得進(jìn)行跨州移動(dòng)。

1.5.3 變更馬主的馬 通過(guò)銷(xiāo)售、交換或捐贈(zèng)而改變馬主的馬，在變更前12個(gè)月內(nèi)，進(jìn)行EIA檢測(cè)，結(jié)果為陰性。在高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)的馬，建議新馬主在獲得馬60 d后重新檢測(cè)。所有馬主的變更必須伴有認(rèn)可獸醫(yī)簽發(fā)的證書(shū)。

1.5.4 進(jìn)入拍賣(mài)或銷(xiāo)售市場(chǎng)的馬 所有拍賣(mài)或銷(xiāo)售市場(chǎng)，不管規(guī)模大小，必須獲得州政府的注冊(cè)登記，并保留交易記錄便于追溯。馬在拍賣(mài)或銷(xiāo)售前，進(jìn)行EIA檢測(cè)，結(jié)果為陰性。拍賣(mài)或銷(xiāo)售市場(chǎng)必須雇傭認(rèn)可獸醫(yī)，參與銷(xiāo)售活動(dòng)，檢查證明文件的有效性，并對(duì)沒(méi)有陰性檢測(cè)報(bào)告的馬采集血液樣品，送官方實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)。

1.5.5 進(jìn)入美國(guó)境內(nèi)的馬 不管是臨時(shí)進(jìn)境參加展覽、表演或比賽，還是永久進(jìn)境，在入境美國(guó)前都需要進(jìn)行EIA檢測(cè)，結(jié)果需為陰性。永久進(jìn)境的馬在入境后還需進(jìn)行隔離檢疫，并接受實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，結(jié)果需為陰性。

1.5.6 配種前的種馬 馬在配種前1年內(nèi)，需接受至少1次EIA檢測(cè)，結(jié)果需為陰性。

1.6 小馬駒

由于任何年齡階段馬都是EIA易感動(dòng)物，所以都必須進(jìn)行EIA檢測(cè)。幼齡小馬在斷奶時(shí)（小于6月齡），進(jìn)行第一次檢測(cè)，然后經(jīng)適當(dāng)?shù)母綦x檢疫（超過(guò)60 d）后，再次檢測(cè)。如果母馬為EIA陽(yáng)性，小馬從初乳獲得EIA被動(dòng)免疫抗體的時(shí)間可能超過(guò)6個(gè)月。在這種情況下，馬駒至少隔離60 d，在隔離結(jié)束后和混群前，檢測(cè)結(jié)果為陰性。如果母馬為陰性，幼齡小馬，可不檢測(cè)。

2 防控程序

2.1 執(zhí)行EIA常規(guī)檢測(cè)

USDA規(guī)定的防控程序包括常規(guī)檢測(cè)，陽(yáng)性馬及時(shí)處置，同群馬反復(fù)檢測(cè)以及加強(qiáng)生物安全措施。陽(yáng)性馬的處置措施包括陽(yáng)性馬隔離檢疫、永久標(biāo)識(shí)及限制移動(dòng)，陽(yáng)性馬只能返回原農(nóng)場(chǎng)、送往科研機(jī)構(gòu)或屠宰場(chǎng)。

馬的州際移動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)一為12個(gè)月。根據(jù)當(dāng)?shù)氐娘L(fēng)險(xiǎn)情況，建議對(duì)EIA進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)。各個(gè)州可以實(shí)施更嚴(yán)格的防控程序。參加展覽或競(jìng)賽等事項(xiàng)的馬、州際移動(dòng)的馬、變更馬主的馬、進(jìn)入拍賣(mài)或銷(xiāo)售市場(chǎng)的馬以及從外部農(nóng)場(chǎng)引入的馬、從國(guó)外進(jìn)口的馬，需要采集樣品送檢官方實(shí)驗(yàn)室。

2.2 陽(yáng)性馬的處理

一旦確定為陽(yáng)性馬，可以實(shí)施安樂(lè)死、屠宰或隔離檢疫。

2.2.1 隔離檢疫 隔離場(chǎng)所接受官方人員的定期監(jiān)管，防止違反隔離檢疫的有關(guān)規(guī)定。如果官方試驗(yàn)檢測(cè)為陽(yáng)性馬，馬主在得知陽(yáng)性結(jié)果24 h內(nèi)立即隔離陽(yáng)性馬，防止與其它馬的進(jìn)一步接觸。在陽(yáng)性馬所在地約180 m內(nèi)，與其接觸的同群馬，也實(shí)施單獨(dú)隔離。隔離區(qū)域與其它未接觸馬的距離不少于180 m。Barros等認(rèn)為，虻科昆蟲(chóng)（如馬虻、鹿虻、牛虻等）的機(jī)械傳播距離不超過(guò)50 m，而建議180 m應(yīng)是有效的安全距離[8]。

2.2.2 反復(fù)檢測(cè)并移除陽(yáng)性馬 在得知陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果24 h內(nèi)，移除陽(yáng)性馬，并對(duì)其它同群馬進(jìn)行反復(fù)檢測(cè)，間隔30～60 d，或更高的頻率，直到所有與其接觸的馬為陰性。其它同群馬陰性狀態(tài)保持至少60 d，才可解除隔離。

2.2.3 移動(dòng)限制 所有陽(yáng)性馬和同群接觸馬，在檢測(cè)結(jié)果確定后24 h內(nèi)進(jìn)行隔離，限制其移動(dòng)。只有在獲得官方移動(dòng)許可證（APHIS、州獸醫(yī)或認(rèn)可獸醫(yī)簽署）后，受限制的馬才能進(jìn)行州際移動(dòng)。到達(dá)目的地后，繼續(xù)保持陽(yáng)性馬隔離狀態(tài)，防止病毒傳播，直到自然死亡、屠宰或安樂(lè)死。陽(yáng)性馬只能移動(dòng)到在聯(lián)邦注冊(cè)的屠宰場(chǎng)、聯(lián)邦批準(zhǔn)的診斷或科研場(chǎng)所及原農(nóng)場(chǎng)。同群的接觸馬，因特殊用途，可以進(jìn)行移動(dòng)，但接觸馬必須以15 d的間隔反復(fù)檢測(cè)，直到最后脫離接觸后至少60 d一直為陰性，才能進(jìn)行移動(dòng)。

2.2.4 陽(yáng)性馬的標(biāo)識(shí) 由APHIS、州官員代表或認(rèn)可獸醫(yī)對(duì)EIA檢測(cè)陽(yáng)性的馬進(jìn)行永久標(biāo)識(shí)，如熱鐵烙印、化學(xué)烙印、冷凍標(biāo)識(shí)。永久標(biāo)識(shí)在陽(yáng)性馬頸部左側(cè)，至少5 cm厚。如果是唇部刺青，大小至少為2.54 cm×1.91 cm。如果陽(yáng)性馬直接移動(dòng)到屠宰場(chǎng)，可不實(shí)施官方標(biāo)識(shí)。跨州移動(dòng)的馬，必須攜帶APHIS、州官員代表或認(rèn)可獸醫(yī)簽署的移動(dòng)許可證，且必須在起運(yùn)5 d內(nèi)達(dá)到目的地，到達(dá)后立即屠宰。

2.2.5 陽(yáng)性馬的最終目的地 美國(guó)沒(méi)有強(qiáng)制撲殺陽(yáng)性馬的法律規(guī)定，陽(yáng)性馬最終目的地包括返回原農(nóng)場(chǎng)、科研機(jī)構(gòu)或屠宰場(chǎng)。一旦確定為陽(yáng)性馬，可以在原農(nóng)場(chǎng)實(shí)施安樂(lè)死或隔離飼養(yǎng)。原農(nóng)場(chǎng)是指轉(zhuǎn)運(yùn)前所在的農(nóng)場(chǎng)或養(yǎng)殖場(chǎng)所（出生或停留30 d或以上）。如果實(shí)施屠宰，必須在聯(lián)邦或州注冊(cè)的屠宰場(chǎng)屠宰。

2.3 加強(qiáng)生物安全措施

嚴(yán)格控制外部人員進(jìn)入。馬用物品、設(shè)備、設(shè)施進(jìn)行清洗、消毒；醫(yī)用物品，如注射器、針頭一次性使用。糞尿、墊料等經(jīng)堆積密封發(fā)酵至少1個(gè)月，以殺滅病毒、媒介昆蟲(chóng)等。對(duì)馬或養(yǎng)殖場(chǎng)噴灑驅(qū)蟲(chóng)劑或殺蟲(chóng)劑，防止蚊、虻等吸血昆蟲(chóng)侵襲馬匹，減少馬暴露于媒介昆蟲(chóng)的機(jī)會(huì)。搞好馬廄及其周?chē)沫h(huán)境衛(wèi)生，清除馬活動(dòng)場(chǎng)所的污水，刈短雜草，減少昆蟲(chóng)孳生和藏匿，對(duì)養(yǎng)殖場(chǎng)及其活動(dòng)場(chǎng)所噴灑驅(qū)蟲(chóng)劑或殺蟲(chóng)劑[9-10]。

3 對(duì)我國(guó)消滅EIA的啟示

在全面分析美國(guó)EIA監(jiān)測(cè)與防控措施及其防控效果的基礎(chǔ)上，借鑒其成功的經(jīng)驗(yàn)，進(jìn)一步優(yōu)化我國(guó)EIA防控措施，實(shí)現(xiàn)我國(guó)在2020年消滅EIA的目標(biāo)。

3.1 擴(kuò)大監(jiān)測(cè)范圍和監(jiān)測(cè)數(shù)量

抓好監(jiān)測(cè)凈化，加大監(jiān)測(cè)頻率，擴(kuò)大監(jiān)測(cè)范圍和監(jiān)測(cè)數(shù)量。馬在跨省調(diào)動(dòng)、銷(xiāo)售、參加展覽或比賽、配種、引群前，必須獲得認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室出具的EIA陰性檢測(cè)報(bào)告。

3.2 加強(qiáng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)管提高其檢測(cè)能力

對(duì)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室、檢測(cè)人員、檢測(cè)方法及其試劑進(jìn)行認(rèn)可登記，通過(guò)能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)等措施保證其檢測(cè)質(zhì)量；強(qiáng)化檢測(cè)技術(shù)的培訓(xùn)，確保實(shí)驗(yàn)室具備EIA檢測(cè)的技術(shù)能力。

3.3 對(duì)陽(yáng)性動(dòng)物要實(shí)施嚴(yán)格采取撲殺

對(duì)臨床檢查和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)為陽(yáng)性動(dòng)物，要嚴(yán)格采取撲殺、無(wú)害化處理等措施，消滅傳染源。馬一旦感染EIAV，就終生帶毒，成為潛在的傳染源，美國(guó)不強(qiáng)制撲殺陽(yáng)性動(dòng)物是EIA在美國(guó)呈散發(fā)性流行的主要原因。

3.4 同群馬反復(fù)檢測(cè)

確認(rèn)陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果后，立即將陽(yáng)性馬移除并撲殺銷(xiāo)毀，并對(duì)同群馬進(jìn)行反復(fù)檢測(cè)，間隔30～60 d或更高的頻率，直到所有接觸馬檢測(cè)為陰性。其它同群馬陰性狀態(tài)保持至少60 d，才可以解除隔離措施。

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