新疆野生及栽培一枝蒿多糖對(duì)樹突狀細(xì)胞免疫功能的影響

楊雨楊秀梅趙干俞益張慧珍張愛蓮

（1. 新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 新疆生物資源基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830046；2. 復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院 教育部/衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200032）

新疆野生及栽培一枝蒿多糖對(duì)樹突狀細(xì)胞免疫功能的影響

楊雨1楊秀梅1趙干2俞益1張慧珍1張愛蓮1

（1. 新疆大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院 新疆生物資源基因工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 830046；2. 復(fù)旦大學(xué)上海醫(yī)學(xué)院 教育部/衛(wèi)生部醫(yī)學(xué)分子病毒學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200032）

研究和比較新疆野生與栽培一枝蒿多糖對(duì)骨髓來源樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs）成熟和功能的影響。超聲法制備野生及栽培一枝蒿粗多糖；Sevage法除蛋白；蒽酮-硫酸法測(cè)定多糖含量；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DCs的成熟；ELISA法檢測(cè)IL-12和TNF-α的表達(dá)水平。結(jié)果顯示，野生及栽培一枝蒿多糖含量分別為26.18%和22.14%，去除蛋白質(zhì)后多糖含量分別為30.94%和27.06%；野生及栽培一枝蒿多糖均可以顯著增強(qiáng)小鼠骨髓來源CD11c+DCs表面分子CD40，CD86及CD80的表達(dá)（P＜0.05）；顯著促進(jìn)IL-12和TNF-α的表達(dá)（P＜0.05）；顯著降低DCs吞噬FITC-Dextran的能力；且相同劑量對(duì)DCs的免疫活性無顯著性差異（P＞0.05）；除蛋白和不除蛋白的野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性均無顯著差異（P＞0.05）。新疆野生和栽培一枝蒿多糖含量差異較小，并均可以促進(jìn)小鼠骨髓來源DCs的成熟和功能，且差異不大。

野生一枝蒿；栽培一枝蒿；多糖；樹突狀細(xì)胞

新疆一枝篙（Artemisia rupestris L.）別名巖蒿，為菊科蒿屬植物，是新疆哈薩克族和維吾爾族民間傳統(tǒng)用藥，其主要包括多糖類、黃酮類、生物堿等多種化學(xué)成分［1，2］，多糖為其主要活性成分，具有抗氧化、抗病毒、調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等多種功能［3-6］。由于新疆一枝蒿具有極高的藥用價(jià)值，野生一枝蒿難以滿足需求，栽培一枝蒿已經(jīng)成功在新疆大面積種植。國內(nèi)學(xué)者對(duì)新疆一枝蒿的有效成分分離及藥理作用做了大量的研究，但對(duì)一枝蒿多糖的免疫活性研究較少，尤其是比較野生與栽培一枝蒿多糖免疫活性的研究還未見報(bào)道。眾所周知，DCs是體內(nèi)功能最強(qiáng)的專職性抗原提呈細(xì)胞，未成熟DCs通過攝取抗原逐漸成熟，成熟DCs高表達(dá)共刺激分子MHCII、CD80，CD86、CD40等，并分泌多種細(xì)胞因子，從而啟動(dòng)初次免疫應(yīng)答，發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用［7，8］。

本研究擬通過體外培養(yǎng)的小鼠骨髓來源DCs為平臺(tái)，利用超聲結(jié)合水提醇沉法［9，10］制備新疆野生及栽培一枝蒿粗多糖，三氯乙酸法除蛋白［11，12］，蒽酮硫酸法測(cè)定多糖含量［13］；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠DCs 表面分子CD40、CD86及CD80的表達(dá)水平和刺激后DCs抗原吞噬能力；ELASA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-12和TNF-α的分泌情況，研究和比較新疆野生與栽培一枝蒿粗多糖以及除蛋白與未除蛋白一枝蒿多糖對(duì)DCs成熟和功能的影響，旨在為開發(fā)利用新疆栽培一枝蒿提供參考，也為利用新疆藥用植物篩選新型疫苗佐劑奠定一定的基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng) 物 與 試 劑 5-6周，18-22 g的 雌 性C57BL/6小鼠購自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心。新疆野生和栽培一枝蒿（市售）。BCA蛋白測(cè)量試劑盒購自Themo公司；RPMI-1640 培養(yǎng)液購自Gibco公司；胎牛血清購自以色列Bioind公司；流式抗體PECD11c、APC-CD40購自美國BD公司；IL-12、TNF-α ELISA試劑盒購自武漢博士德公司；石油醚、無水乙醇、三氯甲烷、正丁醇、蒽酮、葡萄糖等均為國產(chǎn)分析純。

1.1.2 儀器 超凈工作臺(tái)（Heal Force公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；全波長酶標(biāo)儀（美國 Bio-TeK公司）；磁力攪拌器（金壇市醫(yī)療儀器廠），二氧化碳培養(yǎng)箱（Heal Force公司）；流式細(xì)胞儀（美國BD公司）。

1.2 方法

1.2.1 新疆野生及栽培一枝蒿粗多糖的制備 采用超聲結(jié)合水提醇沉的方法，具體步驟如下：取適量新疆野生及栽培一枝蒿粉末，加入5倍體積的石油醚超聲脫脂；加入5倍體積無水乙醇超聲；抽濾干燥后加入10倍體積蒸餾水，37℃超聲兩次，離心合并上清，減壓濃縮；加入無水乙醇靜置醇沉12 h；真空抽濾烘干后得到新疆野生及栽培一枝蒿粗多糖粉末，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 新疆野生及栽培一枝蒿粗多糖sevage法除蛋白 稱取適量上述制備的新疆野生及栽培一枝蒿多糖粉末，加入100倍體積蒸餾水，磁力攪拌使其溶解，加入sevage試劑（氯仿∶正丁醇=4∶1）除蛋白，離心取上清，重復(fù)多次，減壓濃縮；加入無水乙醇靜置醇沉，真空抽濾干燥，得到除蛋白的新疆野生及栽培一枝蒿多糖粉末，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 新疆野生及栽培一枝蒿多糖含量和蛋白含量測(cè)定 采用蒽酮-硫酸法檢測(cè)上述制備的未除蛋白及除蛋白處理后樣品中的多糖含量，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 A=0.696 8C+0.051 9，r=0.992 6，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算樣品中的多糖含量和得率。采用BCA蛋白測(cè)量試劑盒檢測(cè)樣品中的蛋白含量，以牛血清蛋白繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為 A=0.571 5C+0.081 6，r=0.998 7，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的蛋白含量。

1.2.4 小鼠骨髓來源DCs的體外培養(yǎng) 將C57BL/6小鼠頸椎脫臼處死，無菌狀態(tài)下取股骨和脛骨，收集骨髓細(xì)胞，制成單細(xì)胞懸液，1 200 r/min離心5 min，棄上清。用含 10%血清的 RPMI-1640培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度至 1×107個(gè)/mL，加入20 ng/mL的GM-CSF，接種細(xì)胞于60 mm細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隔天半換液，第3天全換液。每日用顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)和生長情況。第6天，離心收集培養(yǎng)的細(xì)胞，將細(xì)胞分組用于后續(xù)體外刺激實(shí)驗(yàn)。

1.2.5 新疆野生及栽培一枝蒿多糖體外刺激DCs選用野生一枝蒿粗多糖（Wild A. rupestris crud e polysaccharides，WARCP），栽培一枝蒿粗多糖（Cultivated A. rupestris crude Polysacc-harides，CARCP），除蛋白的野生一枝蒿粗多糖（Deproteinization of wild A. rupestris crude Polysaccharides，DWARCP），除蛋白的栽培一枝蒿粗多糖（Deproteinization of cultivated A.rupestris crude polysaccharides，DCARCP）50 μg和250 μg兩個(gè)劑量，分別進(jìn)行體外刺激實(shí)驗(yàn)。上述培養(yǎng)的小鼠骨髓來源的DCs按1×106個(gè)/孔接種于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，將DCs分成10組：WARCP 50 μg、WARCP 200 μg、CARCP 50 μg、CARCP 200 μg、DWARCP 50 μg、DWARCP 200 μg、DCARCP 50 μg、DCARCP 200 μg實(shí) 驗(yàn) 組，RPMI-1640陰性對(duì)照組和LPS ng/mL陽性對(duì)照組，將各種樣品分別加入接種好的DCs中，每組3只小鼠進(jìn)行獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)12 h后，用于后續(xù)檢測(cè)。

1.2.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)一枝蒿多糖對(duì)小鼠DCs表面分子表達(dá)的影響 一枝蒿多糖刺激小鼠骨髓來源的DCs 12 h 后，收集DCs，將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為1×106個(gè)，進(jìn)行表面分子染色，室溫避光20 min，加入10 mL含0.5%胎牛血清的PBS，1 200× g離心10 min，加入300 μL PBS，過200目銅網(wǎng)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD11c+CD40、CD11c+CD86及CD11c+CD80表達(dá)情況。

1.2.7 ELISA法檢測(cè)一枝蒿多糖對(duì)DCs分泌細(xì)胞因子的影響 分別收集上述各實(shí)驗(yàn)組刺激12 h后的DCs培養(yǎng)上清，應(yīng)用ELISA kit檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液上清中IL-12和TNF-α的含量，具體操作按 ELISA 說明書進(jìn)行。反應(yīng)終止后用酶標(biāo)儀檢測(cè)450 nm吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線確定所測(cè)細(xì)胞因子的濃度。

1.2.8 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)一枝蒿多糖對(duì)小鼠DCs抗原吞噬能力的影響 一枝蒿多糖刺激小鼠骨髓來源的DCs 12 h 后，各實(shí)驗(yàn)組加入25 μg/mL FITC-Dextran染色，37℃培養(yǎng)1 h，收集DCs，將細(xì)胞數(shù)調(diào)整為1×106個(gè)，加入10 mL含0.5%胎牛血清的PBS，1 200× g離心10 min，加入300 μL PBS，過200目銅網(wǎng)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD11c+Dextran表達(dá)情況。

1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 FlowJo 7.6 軟件處理流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果，利用 GraphPad Prism 5.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，數(shù)據(jù)均采用±s，進(jìn)行單因素方差分析和多組均數(shù)間的比較，差異顯著標(biāo)準(zhǔn)為 P＜0.05。

圖1 WARCP/CARCP對(duì)體外小鼠DCs細(xì)胞生長狀態(tài)的影響

2 結(jié)果

2.1 新疆野生及栽培一枝蒿多糖含量和蛋白含量測(cè)定

一枝蒿樣品的多糖含量和蛋白含量檢測(cè)結(jié)果如表1所示，WARCP的多糖含量為26.18%，蛋白含量為22.23%，得率4.20%；DWARCP的多糖含量為30.94%，蛋白含量為10.67%，得率為0.88%；兩者的多糖含量間無差異顯著（P＞0.05），蛋白含量和多糖的得率差異顯著（P＜0.05）。CARCP的多糖含量為22.14%，蛋白含量為17.69%，得率為6.50%；DCARCP的多糖含量為27.06，蛋白含量為6.46%，得率為1.20%，兩者的多糖含量間無差異顯著（P＞0.05），蛋白含量和多糖的得率差異顯著（P＜0.05），WARCP和CARCP的多糖含量、DWARCP和DCARCP的多糖含量間無顯著差異（P＞0.05）。

圖2 WARCP/CARCP對(duì)體外小鼠DCs表面分子表達(dá)的影響

2.2 WARCP和CARCP對(duì)DCs細(xì)胞生長狀態(tài)的影響

結(jié)果如圖1所示，WARCP和CARCP刺激DCs 12 h后，細(xì)胞群形態(tài)沒有發(fā)生變化，與陰性對(duì)照相比，各實(shí)驗(yàn)組DCs的細(xì)胞數(shù)沒有顯著性差異（P＞0.05）。

表1 新疆野生及栽培一枝蒿多糖樣品中的多糖及蛋白含量測(cè)定結(jié)果

2.3 WARCP和CARCP對(duì)DCs表面分子表達(dá)和細(xì)胞因子分泌的影響

DCs表面分子表達(dá)結(jié)果如圖2，與未處理的DCs相比，WARCP和CARCP均能顯著促進(jìn)CD11c+CD40、CD11c+CD86及CD11c+CD80的表達(dá)（P＜0.05）；CD11c+CD40和CD11c+CD80的表達(dá)與陽性對(duì)照組LPS組相當(dāng)（P＞0.05），CD11c+CD86的表達(dá)高于陽性對(duì)照組（P＜0.05）；相同劑量的WARCP和CARCP對(duì)DCs成熟的促進(jìn)作用沒有顯著性差異（P＞0.05）。

細(xì)胞因子檢測(cè)的結(jié)果如圖3，與未處理的DCs相比，WARCP和CARCP均能顯著促進(jìn)DCs細(xì)胞因子IL-12和TNF-α的分泌（P＜0.05），低劑量組與陽性對(duì)照組LPS相當(dāng)（P＞0.05），高劑量組作用效果優(yōu)于LPS對(duì)照組，且差異顯著（P＜0.05）；相同劑量的WARCP和CARCP對(duì)IL-12和TNF-α的分泌作用沒有顯著性差異（P＞0.05）。

圖3 WARCP/CARCP對(duì)體外小鼠DCs細(xì)胞因子分泌的影響

2.4 WARCP和CARCP對(duì)DCs抗原吞噬功能的影響

DCs吞噬FITC-Dextran結(jié)果如圖4，WARCP和 CARCP均能促進(jìn)DCs成熟，不同劑量刺激后DCs吞噬FITC-Dextran能力顯著下降（P＜0.05）；相同劑量的WARCP和CARCP對(duì)DCs吞噬FITC-Dextran能力沒有顯著性差異（P＞0.05）。

圖4 WARCP/CARCP對(duì)體外小鼠DCs抗原吞噬功能的影響

2.5 DWARCP和DCARCP對(duì)DCs表面分子表達(dá)和細(xì)胞因子分泌的影響

DCs表面分子表達(dá)結(jié)果如圖5，DWARCP和DCARCP均能顯著促進(jìn)CD11c+CD40、CD11c+CD86及 CD11c+CD80的 表 達(dá)（P＜0.05），CD11c+CD40和CD11c+CD80的表達(dá)與陽性對(duì)照組LPS組相當(dāng)（P＞0.05），CD11c+CD86的表達(dá)高于陽性對(duì)照組（P＜0.05）；相同劑量的DWARCP和DCARCP對(duì)DCs成熟的促進(jìn)作用沒有顯著性差異（P＞0.05）。

細(xì)胞因子的檢測(cè)結(jié)果如圖6，DWARCP和DCARCP均能顯著促進(jìn)DCs細(xì)胞因子IL-12和TNF-α的分泌（P＜0.05），低劑量組間沒有顯著差異（P＞0.05），與陽性對(duì)照組LPS相當(dāng)（P＞0.05），DWARCP高劑量組作用效果優(yōu)于DCARCP高劑量組，與LPS組差異顯著（P＜0.05）。

圖5 DWARCP/DCARCP對(duì)體外小鼠DCs表面分子表達(dá)的影響

2.6 DWARCP和DCARCP對(duì)DCs抗原吞噬功能影響

DCs吞噬FITC-Dextran結(jié)果如圖7，DWARCP和DCARCP均能促進(jìn)DCs成熟，不同劑量刺激后DCs吞噬FITC-Dextran能力顯著下降（P＜0.05）；相同劑量的DWARCP和DCARCP對(duì)DCs吞噬FITC-Dextran能力沒有顯著性差異（P＞0.05）。

圖6 DWARCP/DCARCP對(duì)體外小鼠DCs細(xì)胞因子分泌的影響

圖7 DWARCP/DCARCP對(duì)體外小鼠DCs抗原吞噬功能的影響

2.7 WARCP和DWARCP對(duì)DCs表面分子的表達(dá)和細(xì)胞因子分泌的影響

結(jié)果如圖8，WARCP和DWARCP均能顯著促進(jìn)CD11c+CD40、CD11c+CD86及CD11c+CD80的表達(dá)，也能顯著促進(jìn)DCs細(xì)胞因子IL-12和TNF-α的分泌，相同劑量的WARCP和DWARCP對(duì)DCs表面分子和細(xì)胞因子分泌的促進(jìn)作用沒有顯著性差異（P＞0.05）。

2.8 CARCP和DCARCP對(duì)DCs表面分子的表達(dá)和細(xì)胞因子分泌的影響

結(jié)果如圖9，CARCP和DCARCP均能顯著促進(jìn)CD11c+CD40、CD11c+CD86及CD11c+CD80的表達(dá)，也能顯著促進(jìn)DCs細(xì)胞因子IL-12和TNF-α的分泌，相同劑量的CARCP和DCARCP對(duì)DCs表面分子表達(dá)和細(xì)胞因子分泌的促進(jìn)作用沒有顯著性差異（P＞0.05）。

2.9 WARCP/DWARCP和CARCP/DCARCP對(duì)DCs抗原吞噬能力的影響

DCs吞噬FITC-Dextran結(jié)果如圖10，不同劑量WARCP/DWARCP和CARCP/DCARCP刺激后DCs吞噬FITC-Dextran能力顯著下降（P＜0.05）；相同劑量的WARCP/DWARCP和CARCP/DCARCP對(duì)DCs吞噬FITC-Dextran能力沒有顯著性差異（P＞0.05）。

3 討論

中藥多糖是一類廣泛分布于植物界的重要生物活性成分，大量實(shí)驗(yàn)證明，中藥多糖對(duì)抗腫瘤、抗病毒，抗氧化、抗衰老以及提高免疫力方面都有非常顯著的效果，國內(nèi)外學(xué)者已經(jīng)從多種傳統(tǒng)中藥中提取多糖成分研究其免疫調(diào)節(jié)的作用，如人參多糖、黃芪多糖、茯苓多糖、淫羊藿多糖等［14-16］，發(fā)現(xiàn)中藥多糖可以通過增強(qiáng)DC表面分子的表達(dá)和細(xì)胞因子的分泌促進(jìn)DC成熟，促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖，啟動(dòng)免疫應(yīng)答［17-19］。新疆一枝蒿為典型地產(chǎn)藥用植物，由于用藥量的不斷增大，野生資源難以滿足需要，栽培品種已經(jīng)成功在新疆大面積種植，研究者們對(duì)野生一枝蒿與人工栽培的質(zhì)量及有效成分進(jìn)行了比較，但是對(duì)其活性成分的免疫活性比較較少，鑒于DCs在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮的關(guān)鍵作用，本研究利用DCs作為一枝蒿多糖免疫活性的檢測(cè)平臺(tái)，探討其對(duì)小鼠體外DCs的生長狀態(tài)、成熟和功能的影響，比較新疆野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性，為更好的開發(fā)利用栽培一枝蒿的研究提供參考。

圖8 WARCP/DWARCP對(duì)小鼠體外DCs表面分子表達(dá)和細(xì)胞因子分泌的影響

圖9 CARCP/DCARCP對(duì)小鼠體外DCs表面分子表達(dá)和細(xì)胞因子分泌的影響

圖10 WARCP/DWARCP和CARCP/DCARCP對(duì)體外小鼠DCs抗原吞噬功能的影響

本研究結(jié)果表明，野生一枝蒿與栽培一枝蒿粗多糖樣品中多糖含量差異不顯著，在一定的劑量范圍內(nèi)對(duì)小鼠骨髓來源DCs的生長狀態(tài)，細(xì)胞群形態(tài)沒有影響。以多糖作為標(biāo)準(zhǔn)體外刺激小鼠骨髓來源的DCs，野生和栽培一枝蒿均可顯著促進(jìn)DCs的成熟和功能，且相同劑量效果差異不大。在此基礎(chǔ)上，為了檢測(cè)樣品中蛋白質(zhì)對(duì)多糖發(fā)揮免疫作用的影響，進(jìn)行了野生一枝蒿和栽培一枝蒿樣品除蛋白后，多糖含量、蛋白含量以及對(duì)DCs成熟和功能的影響探討。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，野生及栽培一枝蒿粗多糖樣品分別除去蛋白后，多糖含量雖有所增加，但沒有顯著差異；蛋白含量差異顯著；多糖得率差異顯著，野生一枝蒿樣品未蛋白的多糖得率為4.20%，除蛋白后的得率僅為0.88%，栽培樣品未蛋白后的多糖得率為6.50%，除蛋白后的得率為1.20%。樣體外刺激小鼠DCs后的檢測(cè)結(jié)果表明，除蛋白的野生和栽培一枝蒿樣品對(duì)DCs表面分子CD40、CD86及CD80的表達(dá)沒有顯著差異；對(duì)DCs細(xì)胞因子IL-12和TNF-α的分泌，除野生高劑量優(yōu)于栽培一枝蒿外，低劑量之間沒有顯著差異；對(duì)DCs內(nèi)吞抗原FITCDextran的能力沒有顯著性差異。不除蛋白和除蛋白的野生一枝蒿樣品對(duì)促進(jìn)DCs成熟和功能的影響沒有顯著差異，不除蛋白和除蛋白的栽培一枝蒿樣品對(duì)促進(jìn)DCs成熟和功能的影響也沒有顯著差異。這些結(jié)果表明除蛋白和不除蛋白樣品對(duì)DCs的成熟和功能沒有影響，但是除蛋白后樣品中的多糖得率顯著降低。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用超聲法制備野生及栽培一枝蒿粗多糖，多糖含量分別為26.18%和22.14%；Sevage法除蛋白，去除蛋白質(zhì)后多糖含量分別為30.94%和27.06%。

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DCs表面分子CD40、CD86及CD80表達(dá)，ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子IL-12和TNF-α的表達(dá)水平，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)刺激后DCs抗原吞噬能力，結(jié)果顯示，野生及栽培一枝蒿多糖均可以顯著增強(qiáng)DCs表面分子CD40、CD86及CD80、細(xì)胞因子IL-12和TNF-α的表達(dá)（P＜0.05）；降低DCs抗原吞噬能力，且相同劑量野生及栽培一枝蒿多糖對(duì)DCs的免疫活性無顯著性差異（P＞0.05），除蛋白和不除蛋白的野生及栽培一枝蒿多糖的免疫活性均無顯著差異（P＞0.05）。

新疆野生和栽培一枝蒿多糖含量差異較小，野生與栽培一枝蒿多糖對(duì)DCs的成熟和功能作用相當(dāng)，除蛋白對(duì)野生和栽培一枝蒿的免疫活性影響不大。

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（責(zé)任編輯 李楠）

Immunoregulative Action of Polysaccharides in Wild and Cultivated Artemisia rupestris in Xinjiang on Bone Marrow Dendritic Cells

YANG Yu1YANG Xiu-mei1ZHAO Gan2YU Yi1ZHANG Hui-zhen1ZHANG Ai-lian1
（1. Xinjiang Key Laboratory of Biological Resources and Genetic Engineering，College of Life Science and Technology，Xinjiang University，Urumqi 830046；2. Key Laboratory of Medical Molecular Virology of the Ministry of Health and Ministry of Education，Shanghai Medical College，F(xiàn)udan University，Shanghai 200032）

This work is to study and compare the effects of crude polysaccharides in wild Artemisia rupestris（WARCP）and cultivated A. rupestris （CARCP）on the maturation and function of bone marrow dendritic cells（DCs）. The WARCP and CARCP were isolated by ultrasonic extraction，the protein was removed by Sevage，the polysaccharides content of them were measured by anthrone-sulfuric acid method，the maturation of DCs were detected by flow cytometry，and the expressions of IL-12 and TNF-α were examined by ELISA. As results，the polysaccharides contents of WARCP and CARCP were 26.18% and 22.14% respectively，while the polysaccharides contents of WARCP and CARCP after removing protein were 30.94% and 27.06% respectively. Both WARCP and CARCP significantly enhanced the expression level of CD40，CD86 and CD80 on the CD11c + DCs from mice’s bone marrow（P ＜ 0.05），significantly promoted the expression of IL-12 and TNF-α（P ＜ 0.05），significantly reduced the capabilities of DCs phagocytosis to FITC-Dextran，and their immunoregulative actions at the same dose of them was not significant（P ＞ 0.05），there was no significant differences on immunoregulative action of WARCP and CARCP between removing and not removing protein（P ＞ 0.05）. In conclusion，there is little difference between WARCP and CARCP，and both enhance the maturation and function of mouse’s bone marrow DCs in little differencen.

wild Artemisia rupestris L.；cultivated Artemisia rupestris L.；polysaccharides；dendritic cells

10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2016.07.031

2016-01-26

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31360224）

楊雨，男，碩士研究生，研究方向：新型疫苗佐劑；E-mail：lsjyjyy@126.com

張愛蓮，女，副教授，研究方向：新型疫苗佐劑；E-mail：xjzal@163.com