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    小兒α和β地中海貧血基因類型分析

    2018-01-19 22:03:59譚榮鑒
    中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥 2018年34期
    關(guān)鍵詞:珠蛋白貧血患兒

    譚榮鑒

    臨床上,地中海貧血是由于人體珠蛋白基因的突變,造成某一種珠蛋白鏈合成減少或者是缺失,從而引起血紅蛋白的組分發(fā)生改變的一組嚴(yán)重威脅人類健康的致死、致殘常染色體隱性遺傳性血液病,包括有α地中海貧血、β地中海貧血[1]。在我國(guó)南方地區(qū),地中海為一種常見單基因遺傳性疾病。曾有研究顯示,常見的α貧血基因缺失類型主要包括 -SEA、-α3.7、-α4.2,除此外 ,-THAI也是我國(guó)南方人群存在的常見缺失類型[2,3]。本次研究中,以對(duì)小兒α和β地中海貧血基因類型進(jìn)行分析探討為目的,對(duì)本院收治的疑似地中海貧血患兒的臨床檢測(cè)資料展開了回顧性分析,現(xiàn)報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1. 1 一般資料 選擇2012年1月~2017年12月本院收治的986例疑似地中海貧血患兒為研究對(duì)象,男672例,女314例,年齡10 d~12歲,平均年齡(2.6±2.1)歲。以《血液病診斷機(jī)療效標(biāo)準(zhǔn)》中“珠蛋白生成障礙性貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)”和《地中海貧血預(yù)防控制操作指南》中“α、β地中海貧血的臨床分類、臨床特征”為依據(jù)。納入標(biāo)準(zhǔn):①血液學(xué)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果:平均紅細(xì)胞體積(MCV)<80 fL和(或)平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)<27 pg。②血紅蛋白電泳結(jié)果證實(shí)存在地中海貧血;③家族中有地中海貧血基因攜帶者或患兒。排除標(biāo)準(zhǔn):已經(jīng)接受輸血治療的地中海貧血患兒。所有患兒家屬均自愿接受臨床檢驗(yàn)并簽署知情同意書,本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

    1. 2 方法

    1. 2. 1 研究方法 采用Gap-PCR檢測(cè)缺失型α地中海貧血,采用RDB技術(shù)對(duì)α和β地中海貧血基因點(diǎn)突變進(jìn)行檢測(cè),利用巢式PCR檢測(cè)疑似HKαα的樣本,同時(shí)利用基因測(cè)序?qū)σ伤坪币姷刂泻X氀臉颖具M(jìn)行驗(yàn)證。

    1. 2. 2 檢測(cè)方法 ①儀器與試劑:PCR擴(kuò)增儀、電泳儀和凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)Bio-Rad公司),XS-1000i全自動(dòng)五分類血球計(jì)數(shù)儀(日本Sysmex公司),5430小型臺(tái)式高速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司),Capillarys2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳分析儀 (法國(guó) Sebia 公司 ),NanoDrop 2000c 微量分光光度計(jì) (美國(guó)Thermo公司),YN-H16恒溫雜交儀(深圳亞能公司),全血DNA快速提取試劑盒和珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測(cè)試劑盒(深圳亞能公司)。②標(biāo)本采集:采集本院收治的疑似地中海貧血患兒靜脈血 2 ml,經(jīng) EDTA-K2 抗凝后 ,在 -80℃條件下保存。③地中海貧血實(shí)驗(yàn)室篩查:經(jīng)XS-1000i全自動(dòng)五分類血球計(jì)數(shù)儀及其配套試劑對(duì)紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、平均紅細(xì)胞血紅蛋白量、平均紅細(xì)胞體積進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)Capillarys 2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳分析儀及其配套試劑對(duì)血紅蛋白、血紅蛋白、胎兒血紅蛋白、異常血紅蛋白進(jìn)行檢測(cè),所有檢測(cè)均嚴(yán)格按照操作說明書進(jìn)行。④基因檢測(cè):首先進(jìn)行基因組DNA提取,采集受試患兒200 μl靜脈血標(biāo)本,以全血DNA快速提取試劑盒說明書操作為依據(jù),對(duì)基因組DNA進(jìn)行提取。而后進(jìn)行缺失基因型檢測(cè)。

    1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Excel 2007軟件整理數(shù)據(jù),經(jīng)描述性統(tǒng)計(jì)方式對(duì)986例小兒α和β地貧基因突變類型及頻率分布進(jìn)行分析。

    2 結(jié)果

    2. 1 地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果 檢出地中海貧血758例(76.88%),其中α地中海貧血400例(40.57%),β地中海貧血332例(33.67%),αβ復(fù)合型地中海貧血者26例(2.64%)。

    2. 2 地中海貧血基因類型分布特征與突變頻率 400例α地中海貧血患兒中,檢出17種α地中海貧血突變基因類型,-SEA/aa所占比例為76.5%。332例β地中海貧血患兒中,檢出24種突變基因類型,IVS-2-654(C→T)雜合子所占比例為33.4%,mm1-42(-TCTT)雜合子所占比例為33.4%。26例αβ復(fù)合型地中海貧血患兒中,突變基因類型以IVS-2-654/N+--SEA/aa和 IVS-2-654/N + -α3.7/aa為主。

    2. 3 罕見地中海貧血基因檢測(cè)結(jié)果 檢出HKαα/ααQS、α-地中海貧血突變基因類型CD61(AAG→TAG)/--SEA 1例,β地中海貧血基因突變類型CD5(CCT→C)1例。

    3 討論

    世界衛(wèi)生組織對(duì)地中海的診斷標(biāo)準(zhǔn)中指出,6歲以下兒童 ,血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為 120 g/L,若是不足這一水平 ,則可視為貧血[4]。在我國(guó),貧血是兒童保健重點(diǎn)防治項(xiàng)目。曾有文獻(xiàn)報(bào)道,在6歲以下貧血患兒中,有90.00%以上為缺鐵性貧血,6 個(gè)月 ~2 歲嬰幼兒中 ,缺鐵性貧血更為常見[5,6]。

    曾有研究顯示,在地中海貧血人群中,絕大部分患者均會(huì)攜帶地中海貧血缺失基因,但是并未表現(xiàn)出明顯的臨床癥狀[7,8]。目前的最終目標(biāo)依舊是選擇性阻止重型地中海貧血胎兒的出生?,F(xiàn)階段,地中海貧血干預(yù)防控手段中,對(duì)陰性人群的研究相對(duì)較少,多集中在地中海貧血篩查陽性人群的地中海貧血基因型分布的研究[9,10]。

    本次研究中,以對(duì)小兒α和β地中海貧血基因類型進(jìn)行分析探討為目的,對(duì)本院收治的疑似地中海貧血患兒的臨床檢測(cè)資料展開了回顧性分析,結(jié)果顯示,檢出地中海貧血758例(76.88%),其中α地中海貧血400例,β地中海貧血332例,αβ復(fù)合型地中海貧血者26例,400例α地中海貧血患兒中,檢出17種α地中海貧血突變基因類型,-SEA/aa所占比例為76.5%。332例β地中海貧血患兒中,檢出24種突變基因類型,IVS-2-654(C→T)雜合子所占比例為33.4%,mm1-42(-TCTT)雜合子所占比例為33.4%。26例αβ復(fù)合型地中海貧血患兒中,突變基因類型以IVS-2-654/N+-- SEA/aa和IVS-2-654/N+-α3.7/aa為主。檢出HKαα/ααQS、α-地中海貧血突變基因類型CD61(AAG→TAG)/--SEA1例,β地中海貧血基因突變類型CD5(CCT→C)1例。這一結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)結(jié)果相似[11]。

    綜上所述,小兒地中海貧血的基因突變類型呈現(xiàn)出復(fù)雜多樣性,存在罕見病例,臨床治療中應(yīng)對(duì)其給予足夠的重視。

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