西班牙牛精液輸華傳帶施馬倫貝格病毒的風(fēng)險評估

仇松寅，吳紹強(qiáng)，劉曉飛，張永寧，王 勤，劉丹丹，劉 建，林祥梅

（1. 中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院動物檢疫研究所，北京 100176；2. 中華人民共和國海關(guān)總署，北京 100730）

近年來，我國引進(jìn)大宗種用動物的范圍越來越廣，數(shù)量亦呈增長趨勢。但活動物跨境貿(mào)易成本高昂，因此優(yōu)良家畜的遺傳物質(zhì)貿(mào)易正占據(jù)著越來越重要的地位。我國與歐洲多個國家的反芻動物遺傳物質(zhì)貿(mào)易日益頻繁。精液作為重要的遺傳物質(zhì)，可攜帶和傳播多種致病微生物，因此其進(jìn)口具有一定的致病微生物傳入風(fēng)險[1]。

2011年，施馬倫貝格?。⊿chmallenberg disease）首次發(fā)現(xiàn)于德國西部的施馬倫貝格鎮(zhèn)[2]。其病原體是一種新型布尼亞病毒--施馬倫貝格病毒（Schmallenberg virus，SBV）[3]。隨后，荷蘭、比利時、英國、法國、盧森堡、意大利和西班牙等歐洲其他國家也相繼出現(xiàn)了施馬倫貝格病疫情，引起了國際上的廣泛關(guān)注。有研究顯示，反芻動物精液中存在SBV，并具有感染活性，因此輸華精液存在傳帶SBV的風(fēng)險[4]。

本研究采用定性評估方法，對施馬倫貝格病的病原學(xué)、流行病學(xué)、公共衛(wèi)生學(xué)意義、診斷技術(shù)的最新研究進(jìn)展進(jìn)行簡要綜述，基于歐盟相關(guān)組織公布的有關(guān)施馬倫貝格病的疫情資料，對來自西班牙的牛精液傳帶SBV的風(fēng)險開展評估。

1 危害確認(rèn)

1.1 病原學(xué)

SBV歸屬布尼亞病毒科（Bunyaviride）正布尼亞病毒屬（Orthobunyavirus）辛波血清群（Simbu serogroup）[3]。目前，尚未發(fā)現(xiàn)SBV存在不同血清型。SBV在幼齡倉鼠腎細(xì)胞（BHK-21）和非洲綠猴腎細(xì)胞（Vero）等細(xì)胞系上生長良好，能夠產(chǎn)生明顯的細(xì)胞病變[5]。

1.2 流行病學(xué)

SBV主要感染綿羊、山羊、奶牛、野牛、水牛，以及馬鹿、獐鹿、黇鹿、羊駝和歐洲盤羊等家養(yǎng)和野生反芻動物[2]?；疾游锸潜静〉闹饕獋魅驹?。SBV通過庫蠓叮咬傳播。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)C. obsoletus、C. dewul fi、C. chiopterus、C. scoticus、C. sonorensis、C. punctatus 和C. nubeculosus等7種庫蠓能夠攜帶并傳播SBV[6-9]。此外，SBV也可通過胎盤垂直傳播。目前尚未發(fā)現(xiàn)蚊子傳播該病的證據(jù)[10]。目前研究表明，SBV可通過精液垂直傳播。德國FLI實(shí)驗(yàn)室從SBV抗體陽性公牛的精液中檢測到了SBV活毒；將活毒經(jīng)皮下接種能使健康牛發(fā)病，超過40 d時仍可檢測到SBV基因組，并且發(fā)現(xiàn)SBV在公牛精液中間歇性排毒[4]。

1.3 公共衛(wèi)生學(xué)意義

迄今為止，尚未發(fā)現(xiàn)SBV感染人類的任何證據(jù)[11-12]。但英國科學(xué)家Natasha[13]的試驗(yàn)表明，同屬辛波血清群的可感染人的巴西出血熱病毒（OROV）可與SBV發(fā)生重排。庫蠓等節(jié)肢動物體內(nèi)易發(fā)生蟲媒病毒重組。含有SBV L和S節(jié)段、OROV M節(jié)段的新蟲媒病毒可能是SBV未來傳入人群的方式之一。因此，SBV仍有潛在公共衛(wèi)生安全風(fēng)險。

1.4 診斷

OIE發(fā)布的施馬倫貝格病技術(shù)報告指出，根據(jù)流行病學(xué)和臨床癥狀可對施馬倫貝格病作出初步診斷，通過實(shí)驗(yàn)室診斷可進(jìn)行確診，包括病毒分離與鑒定、中和試驗(yàn)、免疫熒光、熒光定量PCR和ELISA等。其中：病毒分離與鑒定、中和試驗(yàn)、免疫熒光等檢測方法，因需要SBV活病毒，目前僅在歐洲少數(shù)幾個實(shí)驗(yàn)室內(nèi)使用，難以在其他國家或?qū)嶒?yàn)室推廣應(yīng)用；而熒光定量PCR和ELISA因有敏感性高、特異性強(qiáng)，且不需要活病毒等優(yōu)點(diǎn)，成為SBV檢測的重要手段和方法[14]。

2 傳入評估

考慮到病原體在國際貿(mào)易商品中攜帶跨境傳播的基本規(guī)律，主要從西班牙畜群疫病流行風(fēng)險（R1）、精液帶毒風(fēng)險（R2）、帶毒精液漏檢風(fēng)險（R3）3個方面，來綜合評價SBV的傳入風(fēng)險。

2.1 疫病流行風(fēng)險（R1）

2.1.1 疫病流行狀況 2012年3月13日西班牙Córdoba省Hinojosa del Duque地區(qū)的綿羊和山羊群暴發(fā)首起施馬倫貝格病疫情。截至2012年5月10日，西班牙牛群、綿羊群、山羊群共計暴發(fā)17起疫情。因該病不是OIE須通報疫病，2012年5月以后的SBV感染數(shù)據(jù)不詳。西班牙官方?jīng)]有對施馬倫貝格病采取任何監(jiān)測和防控措施，也沒有任何數(shù)據(jù)表明疫情得到有效控制。對SBV傳播媒介--庫蠓的調(diào)查結(jié)果表明，西班牙境內(nèi)廣泛分布可以傳播SBV的庫蠓，包括Culicoides imicola 、Culicoides obsoletus complex、Culicoides pulicaris complex。

2.1.2 小結(jié) 2012年5月10日以后，西班牙境內(nèi)施馬倫貝格病的發(fā)生、傳播和擴(kuò)散情況無法獲知。由于不屬于須通報疫病，西班牙沒有制定與施馬倫貝格相關(guān)的疫病及媒介節(jié)肢動物監(jiān)控計劃，也沒有針對施馬倫貝格病采取任何防控措施，況且西班牙境內(nèi)廣泛存在可以傳播SBV的庫蠓。因此，提供精液的反芻動物流行施馬倫貝格病的風(fēng)險為“高”。

2.2 精液帶毒風(fēng)險（R2）

2.2.1 采精中心管理情況

2.2.1.1 新引進(jìn)動物的管理 原產(chǎn)地預(yù)檢：隔離動物且至少14 d，在此期間防范動物被媒介昆蟲叮咬，病原體檢測結(jié)果需為陰性。運(yùn)輸：對轉(zhuǎn)運(yùn)的動物及其運(yùn)輸工具進(jìn)行消毒和驅(qū)蟲。檢疫：運(yùn)達(dá)第1天在檢疫入口處，采用原產(chǎn)地預(yù)檢方法進(jìn)行重復(fù)檢測，至少21 d后再用新方法進(jìn)行檢測。檢疫期間，每隔7 d對動物和畜舍按照Barricade/DiazipolG?規(guī)程進(jìn)行1次噴霧消毒，防止動物被媒介昆蟲叮咬。

2.2.1.2 飼養(yǎng)動物的控制和監(jiān)測措施 每隔7 d對動物和畜舍按照Barricade/DiazipolG?規(guī)程進(jìn)行1次噴霧消毒，防止動物被媒介昆蟲叮咬。

2.2.1.3 采精期間的監(jiān)控措施 采精期間，公牛在初次采精、末次采精及每隔28 d，各進(jìn)行1次檢測。

2.2.2 供精牛、牛精液檢驗(yàn)檢疫流程 西班牙對2011年5月31日之后采集的供精牛和精液按照如下方式進(jìn)行SBV檢測。

2.2.2.1 預(yù)檢疫 采精前，利用RT-qPCR對牛精液進(jìn)行1次SBV檢測。

2.2.2.2 檢疫 利用RT-qPCR，在采精第1天和采精后第21天，對牛精液各進(jìn)行1次SBV檢測。

2.2.2.3 健康檢查 采精前、采精當(dāng)天和采精后每隔28 d，利用ELISA和RT-qPCR，對采精中心飼養(yǎng)的供精牛各進(jìn)行1次SBV檢測。

2.2.2.4 SBV檢查 對即將啟運(yùn)至輸入國的牛精液均進(jìn)行SBV的RT-qPCR檢測。

2.2.3 小結(jié) 雖然研究證實(shí)SBV抗體陽性公牛的精液中存在SBV活毒，存活時間超過40 d，且可在公牛精液中間歇性排毒，但西班牙采精中心對采精動物及其精液的SBV檢疫和檢測非常規(guī)范嚴(yán)格，又有規(guī)范的消毒和防媒介昆蟲叮咬措施。以上措施可將西班牙施馬倫貝格病疫區(qū)牛精液中攜帶SBV的風(fēng)險降為“低”。

3.3 帶毒精液漏檢的風(fēng)險（R3）

施馬倫貝格病的血清學(xué)檢測方法主要是ELISA方法。目前已有IDvet、IDEXX、LSI和Svanova等多家公司生產(chǎn)和銷售商業(yè)化ELISA檢測試劑盒。該方法的診斷敏感性高于97.2%，診斷特異性高于99.5%。FLI就牛精液中SBV熒光定量RT-PCR檢測方法的敏感性和特異性進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)PCR方法的敏感性為96.9%，特異性為100%。因此，僅對供精動物進(jìn)行血清學(xué)檢測或僅對精液進(jìn)行熒光PCR檢測均存在漏檢的可能性，無法完全保證精液的衛(wèi)生安全。在保證供精動物血清學(xué)檢測結(jié)果陰性的前提下，再對供精動物及精液進(jìn)行境內(nèi)境外兩次熒光PCR檢測，這樣可將帶毒精液的漏檢風(fēng)險降至最低。

由于進(jìn)口反芻動物精液時，對不同供精動物提供的精液進(jìn)行單獨(dú)分裝，因此設(shè)群體數(shù)量為1；假設(shè)供精動物已經(jīng)感染SBV，在境外對供精動物進(jìn)行血清學(xué)檢測時使用的ELISA方法敏感性為97.2%，對供精動物血液的病原學(xué)檢測使用的熒光定量PCR方法敏感性為96.9%，進(jìn)境后在口岸對精液實(shí)施病原學(xué)檢測使用的熒光定量PCR方法敏感性為96.4%，則感染動物帶毒精液經(jīng)過境外檢疫和口岸檢疫后被漏檢放行的概率約為3/100 000。由于疫區(qū)易感動物的感染率低于100%，且供精動物均采取高水平的獨(dú)立飼養(yǎng)，因此實(shí)際的漏檢概率將更低。

綜上，在對供精動物和精液采取兩次檢疫措施后，從西班牙施馬倫貝格病疫區(qū)進(jìn)口牛精液漏檢SBV的風(fēng)險為“低”。

4 暴露評估

SBV作為蟲媒病病原，在進(jìn)入我國后將主要通過庫蠓叮咬傳播。我國存在可攜帶并傳播SBV的C. Obsoletus和C. Chiopterus等種類的庫蠓。這些種類的庫蠓在我國東北區(qū)、華北區(qū)、蒙新區(qū)、青藏區(qū)、西南區(qū)、華南區(qū)和華中區(qū)均有分布[15]。SBV隨精液進(jìn)口傳入我國后，可經(jīng)生殖系統(tǒng)進(jìn)入畜群，母畜感染病毒后可能出現(xiàn)流產(chǎn)癥狀，病毒可經(jīng)畸形胎兒的排出進(jìn)入環(huán)境并與媒介節(jié)肢動物接觸，從而傳播至我國畜群并在環(huán)境中長期存在。我國反芻動物飼養(yǎng)量大，養(yǎng)殖模式分散，畜牧業(yè)生產(chǎn)管理水平總體不高，不同地區(qū)的飼養(yǎng)條件參差不齊，環(huán)境中存在可攜帶并傳播SBV的媒介節(jié)肢動物。因此，攜帶SBV的反芻動物精液進(jìn)入國內(nèi)被使用后，SBV與我國本地反芻動物和媒介生物接觸的可能性大，暴露評估的風(fēng)險為“高”。

5 后果評估

施馬倫貝格病為新發(fā)動物疫病，可危害牛、羊等多種反芻動物以及家犬，且傳播迅速。該病的發(fā)生與流行曾給部分歐洲國家造成了較為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，且干擾了國際貿(mào)易，引起全球廣泛關(guān)注。我國是以食用豬肉、牛肉和羊肉為主的國家，也是世界上的豬、牛、羊養(yǎng)殖大國。如果施馬倫貝格病隨進(jìn)境商品或媒介傳入我國并發(fā)生流行，除了因引起動物流產(chǎn)、胎兒死亡、種用價值喪失、奶產(chǎn)量減少等造成直接損失外，還將引起多種間接經(jīng)濟(jì)損失，會使乳品加工、外貿(mào)等多種行業(yè)的發(fā)展受到影響。目前，已有部分國家對來自歐盟的相關(guān)產(chǎn)品采取了貿(mào)易限制措施，因此施馬倫貝格病有可能成為動物和動物產(chǎn)品國際貿(mào)易的一個重要障礙。如果我國發(fā)生該病，許多國家將會對我國的動物和動物產(chǎn)品進(jìn)口實(shí)施限制或禁運(yùn)措施，退運(yùn)或銷毀來自我國的畜產(chǎn)品，緊急取消家畜和畜產(chǎn)品貿(mào)易合同，從而影響我國對外貿(mào)易的正常進(jìn)行，甚至引發(fā)國際間的貿(mào)易摩擦與糾紛，影響雙邊或多邊國際關(guān)系。同時，眾多研究表明，布尼亞病毒科的病毒容易發(fā)生變異。我國境內(nèi)布尼亞病毒科引起的發(fā)熱伴血小板減少綜合征以及赤羽病等均有存在，一旦SBV傳入并發(fā)生重排，后果將極為嚴(yán)重。綜上，SBV隨著牛精液傳入我國的后果評估結(jié)果為“高”。

6 結(jié)論

綜合分析從西班牙施馬倫貝格病疫區(qū)進(jìn)口牛精液攜帶SBV并傳入我國的可能性、在我國發(fā)生流行的可能性以及其可能引起的后果，通過對供精動物及精液的境外管理和境內(nèi)檢測等降低風(fēng)險措施進(jìn)行分析，綜合考慮目前關(guān)于施馬倫貝格病的研究進(jìn)展、西班牙動物疫病防控策略、種用動物飼養(yǎng)管理及其人工授精管理體系等情況，認(rèn)為目前不能全面解除產(chǎn)自西班牙的牛精液和胚胎禁令，但通過采取適當(dāng)?shù)娘L(fēng)險管理和檢疫措施后，可以將西班牙牛精液傳帶SBV風(fēng)險降低為“低”。