蒙藥材蒙古山蘿卜有效成分綠原酸抗肝損傷纖維化作用的研究△

楊宏昕 白音夫 常 亮 金 輝 魏艷沛 陳廣榮 劉 靜

(1.內(nèi)蒙古人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017； 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)藥研究所，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 3.內(nèi)蒙古國際蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010065； 4.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010010)

綠原酸是蒙古山蘿卜活性成分，在多種保肝中藥材或民族藥材中均含有綠原酸，綠原酸抗氧化作用可能是有關(guān)藥材保肝作用的主要機理，但是，目前對綠原酸抗肝損傷纖維化作用研究的比較少，特別是對綠原酸抗肝纖維化的分子作用機理有待深入研究。

1 材料

透明質(zhì)酸(HA)、層粘蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原(PC-Ⅲ)、Ⅳ型膠原(C-Ⅳ)試劑盒(均由上海海研生物制劑廠生產(chǎn))，F(xiàn)1-613自動計算I125放免測量儀(北京原子能研究所),TGL-16型高速離心機(上海醫(yī)用分析儀器廠),德國徠卡切片機。

2 方法與結(jié)果

1.2 模型的制備與分組 取小鼠40只，均分分4組，對照組、模型組、綠原酸高劑量組與綠原酸低劑量組(綠原酸100mg和10mg·kg-1)，每組10只，按每10g體質(zhì)量0.1mL灌胃給藥，對照組和模型組用等體積蒸餾水灌胃。除對照組外，其他各組動物按文獻方法[1]，以25%四氯化碳(CCl4)玉米油溶液1mL·kg-1造模，實驗結(jié)束后，動物禁食12h，乙醚麻醉，腹主動脈收集血液備用，切取肝臟。

2.2 肝體指數(shù)測定 取完整肝臟稱質(zhì)量，計算與體質(zhì)量的比值。結(jié)果對照組、模型組、綠原酸高劑量組與綠原酸低劑量組，肝體指數(shù)分別為0.23±0.05、0.27±0.1、0.25±0.09(P<0.05)、0.27±0.1，綠原酸高劑量組較模型組降低8.0%，作用顯著。

2.3 對肝組織勻漿中纖維化物質(zhì)的測定 剪取一塊肝組織于預(yù)冷生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙吸干，分別稱取0.1g放入勻漿管，加入9倍預(yù)冷生理鹽水，采用勻漿器研磨后，4000r·min-1，離心10min，取上清制備成10g·L-1組織勻漿，按試PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN劑盒說明書操作。結(jié)果，PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN，對照組分別為52.1±11.2(ng·L-1)、28.6±5.4(ng·L-1)、72.3±11.3(ng·L-1)、61.3±8.6(ng·L-1)；模型組為78.3±12.6、32.1±6.0、91.1±13.6、87.1±16.7；綠原酸高劑量組為69.6±12.7(P<0.05)、30.3±6.1、82.7±12.3(P<0.05)、71.4±10.4(P<0.05)；綠原酸低劑量組79.6±15.7、35.1±8.2、88.3±12.1、75.1±17.7(P<0.05)，模型組PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN比對照組顯著升高(P<0.05)，綠原酸組較對組均普遍升高，但與模型組比較，綠原酸高劑量組比模型組分別降低12.5%、5.9%、10.2%、22.0%；低劑量組LN降低16.0%，有顯著差異，其他無明顯差異。

2.4 肝組織病理學(xué)觀察 肝組織甲醛固定、切片、HE染色或Masson染色、光鏡觀察肝臟組織病理學(xué)變化。結(jié)果顯示，對照組肝組織形態(tài)、結(jié)構(gòu)正常，匯管區(qū)無纖維化。模型組肝組織呈多發(fā)性變性和壞死，肝細(xì)胞索排列紊亂，細(xì)胞混濁腫脹，空泡樣變性，細(xì)胞膜不完整，結(jié)構(gòu)混亂，膠原纖維明顯增生，中央靜脈和門脈區(qū)纖維索向周圍延伸，形成不完全間隔。綠原酸高劑量組肝小葉較完整，匯管區(qū)結(jié)構(gòu)比較清晰，肝細(xì)胞變性較輕，血管周圍見膠原纖維增生，中央靜脈和門脈區(qū)有少量纖維索放射延伸，但無間隔形成，與模型組相比較，肝損傷明顯減輕。綠原酸低劑量組肝細(xì)胞索排列紊亂，細(xì)胞混濁腫脹，細(xì)胞水腫和脂肪樣變，炎細(xì)胞浸潤，程度與模型組接近。光鏡觀察結(jié)果表明，綠原酸對CCl4所引起的肝損傷具有改善作用。

3 討論

CCl4引起脂質(zhì)過氧化是其主要的肝損傷形成機制，CCl4被肝微粒體酶激活生成三氯甲基自由基和氯自由基，作用細(xì)胞膜磷脂質(zhì)上的不飽和脂肪酸，膜結(jié)構(gòu)的破壞，引起肝細(xì)胞損傷，細(xì)胞外基質(zhì)的增生與降解失去平衡，導(dǎo)致肝臟內(nèi)纖維結(jié)締組織異常沉積形成纖維化[2]。研究表明，綠原酸可以明顯抑制CCl4引起的肝損傷指數(shù)升高，降低肝組織勻漿中的PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN含量，減輕小鼠病理性肝損傷纖維化的作用。其作用機理可能是綠原酸的抗氧化作用減輕阻礙CCl4對肝的氧化損傷作用，但對PC-Ⅲ、C-Ⅳ、HA、LN合成的調(diào)節(jié)機理有待研究。

[1]楊宏昕，等.蒙古山蘿卜酸對實驗性肝纖維化大鼠MMP-1、TIMP-1、TGF-β1和PDGF表達的影響[J].西北藥學(xué)雜志，2017，32(4)：477-480.

[2]Lin X， et al. Methyl helicterate protects against CCl4-induced liver injury in rats by inhibiting oxidative stress， NF-κB activation，F(xiàn)as/ FasL pathway and cytochrome P4502E1 level[J]. Food ChemToxicol，2012，50(10):3413-3420.