紫外分光光度法測(cè)定原料藥喜樹(shù)堿含量分析

李家敏 周秀玲 王金華 張兵鋒

摘要：由于喜樹(shù)堿內(nèi)酯環(huán)開(kāi)環(huán)后在254 nm波長(zhǎng)下紫外吸收增強(qiáng)，而開(kāi)環(huán)的喜樹(shù)堿毒副作用大。鑒于目前喜樹(shù)堿含量測(cè)定均采用254 nm，且喜樹(shù)堿在大多數(shù)溶劑中溶解性較差，為更準(zhǔn)確便捷地檢測(cè)喜樹(shù)堿原料藥的含量，有必要探索在新的波長(zhǎng)下測(cè)定喜樹(shù)堿含量的方法。將喜樹(shù)堿在200～400 nm掃描，發(fā)現(xiàn)在367 nm處有較大吸收，且溶劑二甲基亞砜無(wú)干擾。因此采用367 nm波長(zhǎng)下測(cè)定喜樹(shù)堿含量，并進(jìn)行含量測(cè)定方法學(xué)考察。喜樹(shù)堿的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.042 3x+0.013 2，r=0.999 6，濃度在4～20 μg/mL與其吸光度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。平均加樣回收率為101.76%，RSD為0.75%，結(jié)果重現(xiàn)性良好，符合方法學(xué)要求。在367 nm波長(zhǎng)下測(cè)定喜樹(shù)堿含量，所受干擾較小，測(cè)定結(jié)果可信度高。

關(guān)鍵詞：喜樹(shù)堿;紫外分光光度法;二甲基亞砜

中圖分類號(hào)：O657.32? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2018）21-0109-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.21.027? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Determination of Camptothecin Content by Ultraviolet Spectrophotometry

LI Jia-min，ZHOU Xiu-ling，WANG Jin-hua，ZHANG Bing-feng

（College of Chemistry and Bioengineering，Yichun University，Yichun 336000，Jiangxi，China）

Abstract： The ultraviolet absorption of camptothecin was increased at 254 nm after the lactonic ring opening，and the toxicity of camptothecin was aslo increased. In view of the current determination of camptothecin content at 254 nm，a new method content was explored for determination of camptothecin.Camptothecin had a large absorption at 367 nm from 200 nm to 400 nm，and dimethyl sulfoxide was undisturbed. Therefore，the content of camptothecin was determined at 367 nm and the methodology was investigated. The regression equation is y=0.042 3x+0.013 2，r=0.999 6. The concentration of camptothecin was in a good linear relationship with its absorbance within the range of 4～20 μg/mL. The average recovery of sample was 101.76% and RSD was 0.75%， the results had good reproducibility and more reliable.

Key words： camptothecin; ultraviolet spectrophotometry; content

喜樹(shù)堿（Camptothecin，CPT）是一種抗癌植物藥，是含有喹啉環(huán)的生物堿。其最早是在1966年，由美國(guó)化學(xué)家從喜樹(shù)中分離提取而得到純度較高的喜樹(shù)堿單體[1]。喜樹(shù)堿具有廣譜的抗癌功效、一定的免疫抑制作用以及抗病毒療效[2]。喜樹(shù)堿主要是作用于I型拓?fù)洚悩?gòu)酶，通過(guò)抑制DNA代謝過(guò)程，發(fā)揮抗腫瘤活性[3，4]。喜樹(shù)堿的水溶性較差，在臨床上應(yīng)用有一定的限制。當(dāng)前采用紫外分光光度法測(cè)定喜樹(shù)堿原料藥的含量時(shí)，一般采用254 nm波長(zhǎng)。研究發(fā)現(xiàn)，喜樹(shù)堿在254 nm波長(zhǎng)處的吸收峰受光和熱的影響較大，有時(shí)甚至?xí)?dǎo)致其最大吸收峰消失[5]。此外，開(kāi)環(huán)的喜樹(shù)堿在此波長(zhǎng)下紫外吸收顯著增強(qiáng)，但喜樹(shù)堿開(kāi)環(huán)后療效降低，毒性增加。因此，用該波長(zhǎng)測(cè)定喜樹(shù)堿原料藥的含量，測(cè)定結(jié)果不能完全真實(shí)反應(yīng)出具有生物活性的喜樹(shù)堿含量。喜樹(shù)堿易溶于二甲基亞砜，難溶于其他有機(jī)溶劑。為更準(zhǔn)確地檢測(cè)喜樹(shù)堿的含量，以二甲基亞砜作為溶劑，并探索喜樹(shù)堿新的檢測(cè)波長(zhǎng)及含量測(cè)定方法，來(lái)用于方便快捷地檢測(cè)喜樹(shù)堿原料藥的含量。

1? 材料與方法

1.1? 藥品與試劑

喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品（天津希恩思生化科技有限公司）;二甲基亞砜（DMSO，天津市永大化學(xué)試劑有限公司）;喜樹(shù)堿原料藥（天津希恩思生化科技有限公司）;去離子水。

1.2? 儀器

SQP天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;TU-1810 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）。

1.3? 方法

1.3.1? 喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品的配制? 精密稱量喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，加入二甲基亞砜溶解，然后轉(zhuǎn)移至100 mL量瓶中定容，搖勻，即得到濃度為100 μg/mL喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液。注意避光，室溫存留備用。

1.3.2? 喜樹(shù)堿原料藥供試品溶液的配備? 精密稱量喜樹(shù)堿原料藥約10 mg，加入二甲基亞砜溶解，于100 mL的量瓶中定容，搖勻，即得喜樹(shù)堿原料藥供試品溶液。注意避光，室溫保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3? 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制? 精密移取0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液置于10 mL量瓶中，然后分別向各個(gè)量瓶中加入二甲基亞砜定容。以二甲基亞砜作為調(diào)零溶液，在367 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定以上喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 最大吸收波長(zhǎng)的確定

在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)對(duì)溶劑二甲基亞砜和喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行掃描，全波長(zhǎng)掃描結(jié)果見(jiàn)圖1。由圖1可見(jiàn)，喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液在254 nm處有最大吸收峰，同時(shí)發(fā)現(xiàn)其在367 nm處也有一較大吸收峰;二甲基亞砜在254 nm波長(zhǎng)處有明顯吸收，但它在367 nm波長(zhǎng)處基本無(wú)吸收。因此，試驗(yàn)最終選定367 nm作為測(cè)定波長(zhǎng)。

2.2? 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

以二甲基亞砜作為調(diào)零溶液，在367 nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定“1.3.3”喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的吸光度。最終測(cè)定的吸光度依次是0.177、0.357、0.523、0.695、0.855。以喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度x（μg/mL）為橫坐標(biāo)，吸光度y為縱坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬合線性回歸方程。由此得線性回歸方程為：y=0.042 3x+0.013 2，r=0.999 6。結(jié)果表明，喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度在4～20 μg/mL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（圖2）。

2.3? 精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)確量取喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.8 mL，共6份，分別置于10 mL的量瓶中，加二甲基亞砜定容，以二甲基亞砜溶液為調(diào)零溶液，在367 nm處測(cè)吸光度，其結(jié)果見(jiàn)表1。平均吸光度為0.357，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.33%，符合精密度試驗(yàn)要求，說(shuō)明儀器精密度較好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

2.4? 重復(fù)性

量取喜樹(shù)堿供試品溶液0.8 mL共6份，分別置于已編好號(hào)的10 mL量瓶中，用二甲基亞砜定容，同時(shí)以二甲基亞砜作為調(diào)零溶液，在367 nm處測(cè)吸光度，試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，平均吸光度為0.377，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差RSD為0.37%，表明此方法具有良好的重現(xiàn)性。

2.5? 穩(wěn)定性

準(zhǔn)確吸取喜樹(shù)堿供試品溶液0.8 mL，接著轉(zhuǎn)移至10 mL的量瓶中，并向其中加二甲基亞砜定容，以二甲基亞砜溶液為空白，在367 nm處每隔20 min測(cè)定1次吸光度，共測(cè)6次，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可知，平均吸光度為0.357，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.56%，說(shuō)明此測(cè)定方法穩(wěn)定性較好。

2.6? 加樣回收率

取測(cè)得含量的喜樹(shù)堿供試品溶液6份，各0.6 mL置于10 mL的量瓶中，編好序號(hào)。1、2、3號(hào)中分別加入精密量取的喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.6 mL，4、5、6號(hào)中分別加入精密量取的喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品0.8 mL。接著向各個(gè)量瓶中分別加入二甲基亞砜定容，并且以二甲基亞砜溶液作為空白，在367 nm處測(cè)定吸光度。計(jì)算加樣回收率、平均加樣回收率和RSD，精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4。由表4可知，平均加樣回收率為101.76%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.75%，符合加樣回收率要求，說(shuō)明此方法測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確度較好。

2.7? 喜樹(shù)堿含量測(cè)定

準(zhǔn)確量取0.8 mL的喜樹(shù)堿供試品溶液，置于10 mL的量瓶中，加入二甲基亞砜定容。在367 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，平行3次，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可求得喜樹(shù)堿原料藥的含量，結(jié)果見(jiàn)表5。由表5可知，喜樹(shù)堿原料藥的平均含量為99.10%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.16%。

3? 小結(jié)與討論

紫外分光光度法是原料藥以及制劑含量測(cè)定常用的分析方法之一。目前對(duì)喜樹(shù)堿的含量測(cè)定簡(jiǎn)便快捷的方法是采用紫外分光光度法，采用的測(cè)定波長(zhǎng)為254 nm。對(duì)喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品溶液進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，結(jié)果表明，喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品在254 nm處有最大吸收峰，同時(shí)它在367 nm處也有一較大的吸收峰。結(jié)合唐明珠[5]的研究，喜樹(shù)堿在254 nm處雖然有最大吸收，但其受光和熱的影響較大，結(jié)果重現(xiàn)性低;而在367 nm下的吸收峰卻受光和熱的影響較小。二甲基亞砜在254 nm處有一明顯吸收峰，這與喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大吸收峰有重疊，但在367 nm處基本無(wú)吸收，選取367 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)可避免上述問(wèn)題。

采取紫外分光光度法在367 nm波長(zhǎng)處測(cè)定喜樹(shù)堿原料藥含量時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=0.042 3x+0.013 2，r=0.999 6，說(shuō)明喜樹(shù)堿標(biāo)準(zhǔn)品濃度與其在367 nm處的吸光度之間具有良好的線性關(guān)系。同時(shí)利用標(biāo)準(zhǔn)曲線和紫外分光光度計(jì)得出喜樹(shù)堿原料藥的平均含量為99.10%，并且精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性以及加樣回收率均良好，符合含量測(cè)定要求。所以，在367 nm波長(zhǎng)下，以二甲基亞砜為溶劑，選用紫外分光光度法測(cè)定喜樹(shù)堿原料藥的含量具有一定的可行性，可為喜樹(shù)堿原料藥的含量測(cè)定等提供一種更加準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、適用的方法。

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