食品中肌醇的微生物檢測方法

□ 曾鳳澤 烏蘭察布醫(yī)學高等專科學校 姚宇澤 烏蘭察布市獸藥監(jiān)察所

肌醇屬于維生素B族的范疇，有助于為人體細胞正常生長提供營養(yǎng)支持，有助于保障動物生理功能正常性。在對肌醇含量進行檢測的過程中，高效液相色譜法、質(zhì)譜法和氣相色譜法均十分常見，但均存在一定的不足之處，如氣相色譜法衍生化效率低下、氣質(zhì)聯(lián)用法檢測成本高。而微生物檢測方法憑借其較高的靈敏度和重現(xiàn)性，在食品肌醇含量的測定過程中得到了廣泛使用?；诖耍瑸榱顺浞痔嵘〈己繙y定的準確率，本研究運用微生物檢測方法測定了維生素飲料中的肌醇含量，現(xiàn)將結(jié)果總結(jié)如下。

1 食品微生物檢測方法概述

食品微生物檢測是運用微生物學的理論與方法，檢驗食品中微生物的種類、數(shù)量、性質(zhì)及其對人的健康的影響，以判別食品是否符合質(zhì)量標準的檢測方法?，F(xiàn)階段，食品微生物檢驗方法是食品質(zhì)量管理必不可少的重要組成部分，它貫徹“預防為主”的方針，可以有效地防止或者減少人畜共患病情況的發(fā)生，保障人民的身體健康。食品微生物檢驗是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標之一，也是判定被檢食品是否食用的科學依據(jù)之一。通過食品微生物檢驗，可以判斷食品加工環(huán)境及食品衛(wèi)生情況，能夠?qū)κ称繁患毦廴镜某潭茸鞒稣_的評價，為各項衛(wèi)生管理工作提供科學依據(jù)。肌醇是人體內(nèi)重要的生長因子，主要以六磷酸酯的形式存在，若人體內(nèi)缺乏含量充足的肌醇，極容易誘發(fā)脫發(fā)和濕疹等病癥。有學者在研究中證實，肌醇對肝臟生長和骨髓發(fā)育起到了十分重要的作用，有助于實現(xiàn)對心肌細胞的有效保護?，F(xiàn)階段，在各類保健食品和功能性食品的生產(chǎn)過程中，肌醇已經(jīng)成為一種常見的添加劑。食品是人體攝入肌醇的主要來源，肌醇能有效降低膽固醇和預防濕疹，對降低肝臟脂肪和預防動脈硬化起到了十分重要的作用。借助于微生物檢測方法實現(xiàn)對食品中肌醇含量的科學測定，有助于判斷所攝入食品的健康性和科學性，為個體飲食結(jié)構(gòu)的合理調(diào)整提供科學的參考依據(jù)。

2 肌醇的微生物檢測——以維生素飲料為例

2.1 一般資料

微生物檢測試驗所采用的試驗材料主要包含高壓滅菌器、旋渦混合器、離心機以及生化培養(yǎng)箱等設備。為了保證在檢驗試驗過程中數(shù)據(jù)精準度，在機械設備的選擇方面，本文根據(jù)以往試驗開展過程中主要采用的生產(chǎn)品牌類型，選定了擁有質(zhì)量保證的某品牌設備，同時，根據(jù)國家標準，選擇某款維生素飲料作為研究對象，對肌醇水平進行檢測。

2.2 方法

針對某款維生素飲料所開展的肌醇微生物檢測試驗，主要分為試驗材料制備和試驗培養(yǎng)兩個部分。

（1）試驗人員首先需要進行的是肌醇儲備液的制備。在試驗當中，試驗人員將已經(jīng)完成干燥處理的標準肌醇物質(zhì)進行稱取，稱取數(shù)量為0.005 g，將其放入到容量瓶內(nèi)部，利用蒸餾水對其進行定容。容量瓶總?cè)萘繛?50 mL，完成定容后肌醇標準液濃度為每毫升0.2 mg。隨后，試驗人員利用試驗設備，吸取容量瓶內(nèi)部的肌醇標準液，吸取總量為10 mL，將其加入到容量為200 mL的容量瓶當中，再次利用蒸餾水對其進行定容。此時，容量瓶內(nèi)部的肌醇溶液濃度為每毫升10 μg，完成中間液制備，將兩組液體共同存放如冰箱中低溫保存。試驗開展時，由試驗人員將中間液取出，進行吸取10 mL液吸取，并將兩次吸取中間液分別放入到100 mL容量瓶和50 mL容量瓶內(nèi)部，利用蒸餾水進行定容。

（2）與此同時，試驗人員需要同時開展菌液的制備處理。首先選定在無菌環(huán)境當中，利用酵母菌進行活化，并將其在30 ℃培養(yǎng)基當中進行24 h培養(yǎng)。為了能夠保證培養(yǎng)活力，在培養(yǎng)當中需要培養(yǎng)到二至三代，再將其后代斜面當中的菌種作為儲備菌種，放入2 ℃環(huán)境中保存，保存時間控制在半個月以內(nèi)。在開展試驗前一天從保存環(huán)境去除，運用生理鹽水對其進行滅菌，使其成為菌懸液，進入到離心管內(nèi)部。啟動離心管，進行3 min離心處理，每分鐘離心2000轉(zhuǎn)。完成后通過漩渦振蕩器進行菌懸液于生理鹽水的混合完成三次以上的洗滌。洗滌完成后，將其加入試管內(nèi)部，借助分光光度計對其波長進行測量。測量結(jié)果顯示透光率達到60%以上時表明該菌懸液的透光率能夠利用增減菌液量的方式來實現(xiàn)調(diào)節(jié)。

（3）完成處理之后，試驗人員需要將已經(jīng)完成制備的肌醇溶液進行處理，通過高壓滅菌器對標準液進行高壓消化，消化時長為一小時，溫度為120 ℃。處理之后將其冷卻至室溫，再利用鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液進行調(diào)試，使其轉(zhuǎn)變?yōu)槲⑺嵝?。pH值測試為5，進行250 mL量瓶定容。此時，利用蒸餾水-肌醇標準液與已經(jīng)完成測定的培養(yǎng)基共同加入試管當中，試管內(nèi)部肌醇含量為0～10 μg。除不含有肌醇（即為0肌醇試管）不進行菌懸液接入外，其余試管均加入50 μL菌懸液。開啟漩渦振蕩器對每一個試管進行震蕩，使其內(nèi)部肌醇標準液與菌懸液混合，再打開培養(yǎng)箱，調(diào)整培養(yǎng)箱內(nèi)部溫度，溫度達到30 ℃后，加入混合溶液進行培養(yǎng)，并對培養(yǎng)結(jié)果進行測量。

2.3 結(jié)果分析

通過對試驗結(jié)果進行統(tǒng)計和分析可以看到，在肌醇變化的標準曲線當中，肌醇試樣0～10 μg試管呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系。其中肌醇含量與吸光度之間呈現(xiàn)出正比關(guān)系。通過計算統(tǒng)計可以得出肌醇、吸光度二者變量的回歸方程為y=0.0875x+0.7328，其中相關(guān)系數(shù)R2約為0.994。與此同時，在對所選樣本維生素飲料進行平行試驗當中，可以透過試驗結(jié)果對所選幾種不同品牌的維生素功能飲料進行數(shù)據(jù)觀察，最終得到精密度情況。三組維生素飲料測試樣本雖然存在一定的精密度差別，但是彼此之間差別較小，表明三個品牌維生素飲料內(nèi)部肌醇水平相對接近。除此之外，在所進行的回收率試驗方面，通過與其他類型食品試驗的對比分析，能夠較為明顯地觀察到維生素飲料實驗品在肌醇標準溶液方面回收率情況。相比于其他類型食品試驗，維生素飲料的回收率相對穩(wěn)定，大體區(qū)間維持在98.6%～100.3%，準確度較高。

3 討論

通過試驗方式對維生素飲料試驗樣品進行肌醇水平的微生物檢測可以看到，所采用的葡萄汁酵母菌測定方法，具有簡單、實用等特點。所完成的結(jié)果檢出符合微生物測定要求，其檢出限更低、靈敏度更高，保障了檢出結(jié)果的準確無誤。這些結(jié)果都從側(cè)面證明了微生物操作方法能夠較好地還原食品當中肌醇含量水平。但同時，微生物檢測方法所存在的不足之處，也同樣是明顯的。其中檢驗過程復雜，檢驗標準液、中間液制備過程過于繁瑣。對于實驗室和試驗人員的要求極高，因此所受到的客觀影響因素液較為普遍[1]。

筆者提出，在今后的微生物試驗檢測方法應用當中，試驗檢測人員需要注重多個方面的檢測細節(jié)。首先，在器皿的洗滌方面，試驗人員應當對試驗器皿是否存在污染進行觀察，對污染較為嚴重的器皿，需要選用堿性洗液對其加以洗滌，再利用蒸餾水對其進行加熱處理，以保證處理完成后的器皿可以直接應用于試驗現(xiàn)場之中[2]。其次，對于應用材料葡萄汁酵母菌的活化過程，需要采用專門使用的培養(yǎng)基，培養(yǎng)基需要保證菌種自身所擁有的生長特點，并維持在一個完全標準化的無菌環(huán)境中進行操作。值得注意的是，試驗人員在肌醇測定過程中所采用的培養(yǎng)基，應當嚴格控制配制流程，一旦配制流程出現(xiàn)錯誤，很有可能造成培養(yǎng)成功率降低，對測定結(jié)果的準確性產(chǎn)生不利影響。因此，要確保檢測過程的順利進行，就要杜絕外界干擾的發(fā)生[3]。

4 結(jié)語

將微生物檢測方法作為測定食品中肌醇含量的主要方法，能夠有效提升檢測的靈敏度，具有方便快捷的優(yōu)勢，且檢測所需時間較短，檢出限較低，與其他檢測方法相比，具有不可比擬的優(yōu)勢，在食品檢測過程中具有較強的推廣價值，值得被廣泛借鑒使用。