PPARγ在賁門腺癌中表達(dá)及生物學(xué)意義

葛宇君

（嘉興市第二醫(yī)院心胸外科 浙江 嘉興 314001）

賁門癌在我國是一種常見的消化道惡性腫瘤。目前，手術(shù)切除是賁門癌的主要治療方式，但預(yù)后不佳，術(shù)后5年生存率統(tǒng)計只有20%左右。其病理類型腺癌居多，且放化療效果不佳。因此尋找新的高效，低毒的藥物成為了腫瘤治療新的方向。過氧化物酶體增殖物激活受體（PPARs）是屬于核受體超家族的一類核轉(zhuǎn)錄因子。PPARs可分為三種亞型，包括PPARα，PPAR β/δ，PPARγ。PPARγ在多種腫瘤組織中均有表達(dá)，包括：肺癌、胃癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、膀胱癌、十二指腸癌、乳腺癌、甲狀腺癌。并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著促進(jìn)細(xì)胞分化，抑制腫瘤細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和血管生成等重要作用。本研究采用RT-PCR的方法檢測賁門腺癌中PPARγmRNA的表達(dá)量，研究其與賁門腺癌的生物學(xué)特性間的關(guān)系。

1.研究對象

標(biāo)本為手術(shù)切除的50例賁門腺癌組織及遠(yuǎn)端癌組織（離癌組織邊緣5cm以上，手術(shù)后殘端為陰性）。術(shù)前均未進(jìn)行放化療。

2.PCR操作方法

提取賁門腺癌組織及其遠(yuǎn)端癌組織的總RNA作為實驗組和對照組。按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA，進(jìn)行檢測后以cDNA為模版擴(kuò)增PPARγ基因，擴(kuò)增β-actin基因做為內(nèi)參照基因。操作方法：反應(yīng)體系為25μL，各引物添加量為：正向引物0.5μL，反向引物0.5μL，模版DNA2μL 。PPARγmRNA上游引物：5'TGGAGAAAATCTGGCACCAC3'，下游引物：5'GAGGCGTACAGGGATAGCAC3'，β-actin上游引物5'TGGAGAAAATCTGGCACCAC3'，下游引物5'-GCATTATGAGACATCCCCCAC-3'。PCR反應(yīng)參數(shù)：94℃預(yù)變性2min，94℃變性30s，60℃退火30s，72℃延伸45s，72℃再延伸5min，總計35個循環(huán)，

3.數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

實驗數(shù)據(jù)使用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)呈非正態(tài)分布，方差不齊，故采用Mann Whitney U檢驗，組間比較使用Kruskal-Wallis H檢驗?；虮磉_(dá)量計算采用2-ΔΔCt法。

4.PCR檢測結(jié)果

4.1 在癌組織中PPARγ的中位表達(dá)量為1.07498，其在遠(yuǎn)癌組織中位表達(dá)量3.25193。結(jié)果顯示PPARγ在賁門癌組織與遠(yuǎn)端癌組織之間的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.01），PPARγmRNA在賁門癌組織中的表達(dá)水平較遠(yuǎn)癌組織低。

4.2 PPARγ在賁門腺癌組織表達(dá)與腫瘤的TNM分期（P=0.01）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.01）、侵潤深度（P=0.01）、分化程度（P=0.013）有關(guān)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。與患者的年齡、性別無相關(guān)性（P＞0.05）。

5.討論

PPARγ分布在不同組織中，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化、凋亡與代謝平衡等多種生物功能。在結(jié)合和激活配體后，PPARγ和視黃酸受體（RXR）形成異二聚體，然后結(jié)合過氧化物酶體增殖物反應(yīng)元件（PPRE）活化靶基因并激活目的基因轉(zhuǎn)錄發(fā)揮其調(diào)控作用。PPARγ具有多種抑制腫瘤的機(jī)制，主要包括：（1）阻滯細(xì)胞周期。（2）誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。（3）抑制腫瘤血管生成。（4）減少腫瘤細(xì)胞侵襲性。

在胃癌發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后中么立萍[1]等研究認(rèn)為PPARγ表達(dá)存在相關(guān)性。劉鵬飛、馬秀梅[2，3]等報道認(rèn)為PPARγ在胃癌的發(fā)生發(fā)展和浸潤轉(zhuǎn)移中可能起著抑制作用。在食管癌中，目前研究認(rèn)為PPARγ表達(dá)降低可能與食管癌轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良相關(guān)[4]。

目前，在賁門腺癌與PPARγ的生物學(xué)特性間的相關(guān)性研究較少。RT-PCR結(jié)果顯示賁門癌組織和遠(yuǎn)端癌組織中PPARγ的表達(dá)量差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P=0.01），在賁門腺癌組織中PPARγmRNA的表達(dá)水平要低于遠(yuǎn)癌組織，與在食管癌中PPARγmRNA表達(dá)趨勢一致。我們發(fā)現(xiàn)PPARγmRNA的表達(dá)水平與腫瘤的分化程度相關(guān)，隨著分化程度的降低PPARγmRNA的表達(dá)量也隨之減少（P=0.013）。與TNM分期有關(guān)，與侵襲和轉(zhuǎn)移，侵潤深度（P＜0.05）有關(guān)。與年齡、性別無關(guān)（P＞0.05）。RT-PCR的實驗結(jié)果提示在賁門癌的發(fā)生發(fā)展可能有PPARγ的參與，其在賁門癌組織中的表達(dá)水平的降低提示賁門腺癌的發(fā)生和進(jìn)展可能與PPARγ抗腫瘤活性喪失或者下調(diào)相關(guān)。

綜上所述，PPARγ在賁門癌組織中的表達(dá)與其預(yù)后相關(guān)，可能是賁門癌預(yù)后的一個有用指標(biāo)，可對賁門癌的發(fā)展及預(yù)后做出準(zhǔn)確的判斷，并更好地進(jìn)行個體化治療。