豬場(chǎng)規(guī)范化采樣技術(shù)及要求

張文通，魏 鳳，李 峰，王金良，苗立中，沈志強(qiáng)，

（1.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600）

豬場(chǎng)采集樣品是豬場(chǎng)疫病防控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。樣品采集質(zhì)量的高低直接影響豬病實(shí)驗(yàn)室診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，進(jìn)而影響豬場(chǎng)對(duì)疫病的防控。樣品規(guī)范化采集是獲得高質(zhì)量樣品的必要條件，本文就豬場(chǎng)規(guī)范化采樣相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行了綜述。

1 樣品采集必要性

豬場(chǎng)樣品的采集是動(dòng)物疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查或免疫監(jiān)測(cè)所不可缺少的重要步驟。絕大多數(shù)傳染病的確診必須通過(guò)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)，就必須用特異的診斷方法或分離到病原才能確診為某種傳染病[1-4]。因此需要采集病料，送檢到實(shí)驗(yàn)室。采樣是從整體樣品采（抽）取具有代表性的樣品，通過(guò)感官檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查，了解樣品的病原學(xué)指標(biāo)，作出正確評(píng)估。采樣方法、采樣數(shù)量和樣品質(zhì)量直接決定監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和監(jiān)測(cè)結(jié)論的科學(xué)性。采樣人員必須是獸醫(yī)技術(shù)人員，按照正確的方法采樣。

2 樣品規(guī)范化采集要求

采樣原則：合理、適時(shí)、典型、無(wú)菌、適量、安全[5-7]。凡是血液凝固不良、天然孔流血的病死動(dòng)物，應(yīng)耳尖采血涂片，首先排除炭疽，炭疽病死的動(dòng)物嚴(yán)禁解剖。采樣時(shí)必須無(wú)菌，避免樣本的交叉感染。解剖時(shí)先胸腔后腹腔；先取實(shí)質(zhì)性器官，后取腸道等易污染的組織器官及內(nèi)容物。采取的樣品應(yīng)具有代表性，采取的臟器組織為病變明顯的部位；肉眼難以判定時(shí)，應(yīng)全面系統(tǒng)采集病料。病料最好在使用藥物前采取，死亡動(dòng)物的內(nèi)臟采取最遲不超過(guò)6 h，否則難以采集合格病料。血液樣品在采集時(shí)應(yīng)根據(jù)采樣對(duì)象、檢驗(yàn)?zāi)康拇_定采血方法與采血部位。同時(shí)防止環(huán)境污染和疫病傳播，做好環(huán)境消毒和廢棄物處理，預(yù)防人畜共患病感染。采集常規(guī)病料應(yīng)滿(mǎn)足診斷的需要，在發(fā)病初期或癥狀典型時(shí)采樣。采集血液樣品時(shí)，如果用于病毒檢驗(yàn)，在動(dòng)物發(fā)病初體溫升高期間采集。進(jìn)行免疫效果監(jiān)測(cè)時(shí)，禽流感滅活苗在免疫21 d后；O型口蹄疫豬在28 d后，其他家畜在21 d后。用于診斷時(shí)，應(yīng)采集1～5只（頭）病死動(dòng)物的有病變的器官組織、血清、抗凝血。免疫效果監(jiān)測(cè)時(shí)，規(guī)模場(chǎng)按照1%，但家禽不少于30份，家畜不少于20份血清。

3 樣品采集

3.1 采樣前器械物品準(zhǔn)備

器械：采樣箱、保溫箱、解剖刀、剪刀、鑷子、酒精棉、酒精燈、棉簽、保定動(dòng)物專(zhuān)用工具、注射器、針頭；試管架、離心機(jī)、離心管、易封口樣品袋、塑料樣品盒、膠布、封口膜、冰袋等。記錄用品：不干膠標(biāo)簽、簽字筆、油性記號(hào)筆、采樣單、采樣登記表及記錄本等。防護(hù)用具：口罩、防護(hù)服、防護(hù)帽、膠靴、乳膠手套等防護(hù)用品。

3.2 樣品采集方法

根據(jù)動(dòng)物種類(lèi)確定采血部位。選用真空管、無(wú)菌注射器、無(wú)菌采血瓶等采血器材采血，采血量須滿(mǎn)足試驗(yàn)需要。若需抗凝血，則視試驗(yàn)要求選擇抗凝劑。如需血清，則待血凝固后無(wú)菌分離血清并分裝于滅菌瓶（管）中。

分泌物、滲出物拭子采集。棉簽插入后捻轉(zhuǎn)2～3圈，兩個(gè)拭子一并置入盛0.8 mL左右的生理鹽水或0.01 M PBS（含雙抗）的1.5 mL EP管中。其它動(dòng)物拭子采集類(lèi)似。

實(shí)質(zhì)臟器的采集。無(wú)菌采集肺臟、肝臟、脾臟、扁桃體、淋巴結(jié)等臟器組織塊放入無(wú)菌容器內(nèi)。每塊組織應(yīng)單獨(dú)放在無(wú)菌容器中，注明采樣動(dòng)物名稱(chēng)、日期、組織。注意防止組織間互相污染。

其它樣品采集。皮膚、奶樣、精液、胚胎、腸內(nèi)容物、糞樣、尿液、腦、脊髓等。用注射器采集，采集樣品置于含雙抗的0.01 M PBS中。

3.3 樣品包裝

液體：離心管，封口瓶。有形病料：塑料自封袋，大袋套小袋，分病例包裝。

3.4 樣品標(biāo)識(shí)

管上、瓶上、袋上都要用防脫色記號(hào)筆標(biāo)識(shí)清楚。樣品編號(hào)要與“采樣單”對(duì)應(yīng)，具有唯一性、可追溯性。采樣單一式三份（被采樣單位、采樣/送檢單位、檢測(cè)單位）。采樣單記錄內(nèi)容包括：動(dòng)物場(chǎng)（廠）地址、動(dòng)物種類(lèi)、群體規(guī)模、發(fā)病日期、臨床癥狀、治療用藥、樣品編號(hào)、采樣人、采樣日期等。

3.5 樣品的運(yùn)輸

樣品運(yùn)輸儲(chǔ)存容器：應(yīng)為密封容器，防止?jié)B漏，造成環(huán)境污染或疫情擴(kuò)散。樣品運(yùn)輸溫度：樣品應(yīng)在低溫下保存和運(yùn)輸。樣品，若能在4 h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，冷藏運(yùn)輸（保溫箱內(nèi)放置冰袋）；若4～24 h內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，要先冷凍后（可將樣品置-20℃冷凍），再冷藏運(yùn)輸。若大于24 h，則運(yùn)輸環(huán)境溫度應(yīng)控制在-20℃以下（干冰），途中不能超過(guò)48 h。

4 注意事項(xiàng)

注意事項(xiàng)包括：炭疽等人畜共患病的個(gè)人防護(hù)，采樣后的無(wú)害化處理，畜禽及其產(chǎn)品無(wú)害化處理，采樣廢棄物無(wú)害化處理，環(huán)境消毒、采樣器械消毒、樣品外包裝消毒等。

5 重大豬病采集內(nèi)容

豬瘟：主要采集扁桃體、淋巴結(jié)、脾臟、腎臟和血清。豬繁殖與呼吸綜合征：主要采集肺臟、血清、扁桃體、脾臟、淋巴結(jié)、糞便；死產(chǎn)和流產(chǎn)胎兒的脾、肺、血清和胸水也是最適宜的檢驗(yàn)材料。豬流行性乙型腦炎：主要采集患病仔豬或產(chǎn)死胎兒的腦組織、腦積液和血液。豬細(xì)小病毒?。捍嬖谟诹鳟a(chǎn)或產(chǎn)死胎兒的新鮮臟器（腦、腎、肝、肺、睪丸、胎盤(pán)及腸系膜淋巴結(jié)等），其中以腸系膜淋巴結(jié)和肝臟的分離率最高。豬偽狂犬?。褐饕杉X和扁桃體；另外，鼻咽分泌物也可用于病毒分離。豬圓環(huán)病毒2型：主要采集肺臟、淋巴結(jié)、腎臟和血清。豬口蹄疫：采集未破裂或剛破裂的水皰皮（液），對(duì)新發(fā)病死亡的動(dòng)物可采取脊髓、扁桃體、淋巴組織等。豬傳染性胃腸炎：主要采集十二指腸、空腸及回腸的黏液。豬流行性腹瀉：主要采集糞便及腸道內(nèi)容物。豬輪狀病毒病：主要采集糞便和腸內(nèi)容物。

豬巴氏桿菌病（豬肺疫）：采集急性病豬的血液、局部水腫液、肺、肝、脾、淋巴結(jié)等。豬大腸桿菌?。翰杉∷雷胸i小腸內(nèi)容物和腸系膜淋巴結(jié)。豬鏈球菌?。翰杉?、脾、淋巴結(jié)、關(guān)節(jié)液、膿汁等。副豬嗜血桿菌病：采集治療前發(fā)病豬的漿膜表面滲出物及肝、關(guān)節(jié)液等。豬傳染性胸膜肺炎：采集鼻、支氣管分泌物和肺臟。豬沙門(mén)氏菌?。ㄗ胸i副傷寒）：急性病例可采集肝、淋巴結(jié)等實(shí)質(zhì)器官，慢性病例不易分離。豬衣原體?。嚎刹杉汉筒∷镭i的肝臟、脾臟、肺臟、排泄物、流產(chǎn)胎兒等病料。仔豬梭菌性腸炎（仔豬紅痢）：主要采集小腸內(nèi)容物，內(nèi)臟器官則不一定能分離出細(xì)菌。豬痢疾（血?。翰杉Y(jié)腸黏液和糞便。豬附紅細(xì)胞體?。翰杉?，應(yīng)加入抗凝劑。

6 小結(jié)

據(jù)了解，大量養(yǎng)豬場(chǎng)往實(shí)驗(yàn)室送檢的樣品存在很多規(guī)范[8-9]。比如送檢病料采集部位不正確、組織樣品太大、血清嚴(yán)重溶血、樣品腐臭、標(biāo)識(shí)不清等，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員收集到這樣的樣品，經(jīng)常出現(xiàn)各種各樣的窘境；這樣的樣品檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室結(jié)果不能夠用于豬場(chǎng)疫病的防控。因此，規(guī)范化采集樣品就顯得極為重要。