對(duì)蝦microRNA的最新研究進(jìn)展?

郭華榮， 王 玉， 左建偉， 陳月如

(1.中國(guó)海洋大學(xué)海洋生命學(xué)院海洋生物遺傳與育種教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東 青島 266003；2.中國(guó)海洋大學(xué)海洋生物進(jìn)化與多樣性研究所，山東 青島 266003)

miRNA(microRNA)是一類(lèi)廣泛存在的長(zhǎng)度約為18～25 nt的單鏈非編碼小RNA，是由具有長(zhǎng)約70～90 bp的發(fā)夾結(jié)構(gòu)前體加工而來(lái)，具有5’端磷酸基和3’端羥基。miRNA的編碼基因常以單拷貝、多拷貝或基因簇的形式存在于基因組中。miRNA在轉(zhuǎn)錄后水平通過(guò)降解靶基因的mRNA或者抑制靶基因mRNA的翻譯來(lái)調(diào)控靶基因的表達(dá)，在生物的生長(zhǎng)、發(fā)育、代謝和免疫等多種生命活動(dòng)中發(fā)揮重要作用[1-2]。自第一個(gè)miRNA：lin-4從線(xiàn)蟲(chóng)(Caenorhabditiselegans)中被發(fā)現(xiàn)以來(lái)[3]，已有大量miRNA從各種模式生物和非模式生物中陸續(xù)被報(bào)道出來(lái)，并且miRNA的生物學(xué)發(fā)生、特征、保守性、作用機(jī)制以及生物學(xué)功能等也逐漸被人們所闡明。對(duì)蝦是我國(guó)重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)品種，其miRNA的研究起步較晚，始于2011年，但近6年來(lái)取得了突飛猛進(jìn)的進(jìn)展。本文綜述了對(duì)蝦miRNA的發(fā)現(xiàn)與鑒定、作用機(jī)制及其生物學(xué)功能方面的研究概況，旨在為對(duì)蝦miRNA的研究提供參考。

1 對(duì)蝦miRNA的發(fā)現(xiàn)與鑒定

對(duì)蝦miRNA的發(fā)現(xiàn)主要是通過(guò)分子克隆和高通量測(cè)序2種方法，而miRNA的鑒定主要有miRNA芯片、熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Northernblot等方法。Ruan等[4]首次從日本囊對(duì)蝦(Marsupenaeusjaponicus)成體血細(xì)胞的總RNA中，分離構(gòu)建了長(zhǎng)度為18～28 nt小RNA文庫(kù)，并通過(guò)熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)和Northernblot技術(shù)鑒定得到了35個(gè)miRNA，并且發(fā)現(xiàn)其中22個(gè)miRNA與對(duì)蝦白斑綜合癥病毒(WSSV)的感染相關(guān)。此后，蝦類(lèi)miRNA的發(fā)現(xiàn)則主要采用高通量測(cè)序和生物信息學(xué)分析的方法。汪元梅[5]運(yùn)用了高通量測(cè)序技術(shù)從凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeusvannamei)中發(fā)現(xiàn)了355個(gè)已知miRNA和32個(gè)新miRNA，并結(jié)合miRNA芯片、實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Northernblot，分析了這些miRNA在凡納濱對(duì)蝦不同組織中的表達(dá)譜，以及飼料中添加復(fù)合多糖對(duì)miRNA表達(dá)量的影響。Xi等[6]對(duì)凡納濱對(duì)蝦肌肉、鰓和肝胰腺的混合樣本進(jìn)行了小RNA的高通量測(cè)序，共獲得了239個(gè)已知miRNA和20個(gè)新miRNA。Zhou等[7]又從深海熱液噴口蝦(Rimicarisexoculata)的肌肉組織中發(fā)現(xiàn)了159個(gè)已知 miRNA和34個(gè)新miRNA。此外，Sun等[8]報(bào)道了日本沼蝦(Macrobrachiumnipponense)miRNA在低氧條件下的表達(dá)譜變化，共發(fā)現(xiàn)了203個(gè)已知miRNA和64個(gè)新miRNA，并分析了低氧條件下特異表達(dá)的miRNA。

目前，高通量測(cè)序結(jié)合熒光實(shí)時(shí)定量PCR和Northern blot驗(yàn)證是發(fā)現(xiàn)與鑒定蝦類(lèi)miRNA的主要方法，越來(lái)越多的研究通過(guò)此法獲得對(duì)蝦miRNA信息，對(duì)蝦的miRNA數(shù)據(jù)庫(kù)在不斷地被充實(shí)，這將為對(duì)蝦miRNA的生物學(xué)功能和作用機(jī)制等方面的研究奠定基礎(chǔ)。

2 對(duì)蝦miRNA的生物合成與加工成熟及其作用機(jī)制

動(dòng)物miRNA的生物合成與加工成熟依次經(jīng)歷了以下幾步：首先，編碼 miRNA 的基因由 RNA 聚合酶 II 轉(zhuǎn)錄生成具有發(fā)夾結(jié)構(gòu)的pri-miRNA；隨后，RNA酶III-Drosha酶從pri-miRNA的發(fā)夾結(jié)構(gòu)的莖部，通過(guò)不對(duì)稱(chēng)剪切，形成60～70 nt的pre-miRNA，形成的pre-miRNA在其5’端有磷酸基團(tuán)，在 3’端有兩個(gè)核苷酸的突出。pre-miRNA 前體能形成典型的莖環(huán)二級(jí)結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)含有不完美配對(duì)的 dsRNA 區(qū)(莖部)，該區(qū)域通過(guò)剪切，最終形成一個(gè)或多個(gè)miRNA成熟體。接著，運(yùn)輸?shù)鞍?Exportin-5在Ran-GTP的幫助下將pre-miRNA從細(xì)胞核中轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中。pre-miRNA 的典型的莖環(huán)二級(jí)結(jié)構(gòu)、磷酸基團(tuán)和兩個(gè)核苷酸的突出，對(duì)于Exportin-5與pre-miRNA的相互作用以及pre-miRNA的順利轉(zhuǎn)運(yùn)都很重要。之后，細(xì)胞質(zhì)中的pre-miRNA又被另一種RNA酶III-Dicer酶進(jìn)一步地加工成熟。Dicer酶的PAZ結(jié)構(gòu)域能識(shí)別pre-miRNA莖環(huán)的莖部3’端突出的兩個(gè)核苷酸，并剪切去掉單鏈的凸環(huán)，加工釋放一個(gè)長(zhǎng)度為22 nt的成熟雙鏈RNA，此RNA具有5’端磷酸基團(tuán)和3’端兩個(gè)突出的核苷酸。隨后，其中的一條鏈參與構(gòu)成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合物(RISC)，從而調(diào)控靶基因的表達(dá)，這條鏈就是成熟的miRNA，而另一條鏈就是miRNA*[1, 9-10]。

在miRNA的加工成熟過(guò)程中Drosha酶是一個(gè)必不可少的組份，對(duì)蝦Drosha酶在基因克隆、序列結(jié)構(gòu)和功能方面的研究已有報(bào)道。徐丹丹[11]從對(duì)蝦中克隆得到了Drosha基因，并發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦Drosha蛋白與果蠅(D.Melanogaster)的Drosha蛋白有很高的同源性，具有保守的RNaseIII與dsRBD結(jié)構(gòu)域，在對(duì)蝦各組織中均有表達(dá)。Huang等[12]也克隆得到了日本囊對(duì)蝦中的Drosha基因，分析了其結(jié)構(gòu)和功能，并且發(fā)現(xiàn)了它的作用之一是直接影響對(duì)蝦miRNA的加工成熟過(guò)程。RNA聚合酶III Dicer酶也是RNAi通路中的一個(gè)關(guān)鍵組份，蝦中的Dicer酶基因也已被成功克隆出來(lái)，其表達(dá)和生物學(xué)功能也有了研究報(bào)道。Su等[13]從斑節(jié)對(duì)蝦中克隆出了Dicer-1基因。Yao等[14]也從凡納濱對(duì)蝦中成功克隆了Dicer-1基因的cDNA全長(zhǎng)，并且發(fā)現(xiàn)Dicer-1基因與其他物種中的Dicer-1基因具有保守性，與斑節(jié)對(duì)蝦中的Dicer-1基因相似性最高，達(dá)97.7%，并且Dicer-1基因在對(duì)蝦的各個(gè)組織中也均有表達(dá)。后來(lái)又有一些研究，分別從凡納濱對(duì)蝦[15]、日本囊對(duì)蝦和斑節(jié)對(duì)蝦[16]中克隆出了Dicer-2基因，并發(fā)現(xiàn)它們之間也具有較高的序列相似性。對(duì)蝦中的Dicer-1酶與miRNA的加工有關(guān)，而Dicer-2酶則與長(zhǎng)的雙鏈RNA加工成siRNA有關(guān)；此外，Dicer-1和Dicer-2也都與對(duì)蝦響應(yīng)病毒感染有關(guān)。miRNA要發(fā)揮其生物學(xué)功能，必須參與構(gòu)成誘導(dǎo)沉默復(fù)合物(RISC)，而Argonaute-2蛋白是該復(fù)合物的重要組份。凡納濱對(duì)蝦[15]、日本囊對(duì)蝦和斑節(jié)對(duì)蝦[17]中的Argonaute-2基因也已被成功克隆，并且研究發(fā)現(xiàn)，它們之間也具有較高的序列相似性。此外，有研究結(jié)果顯示，Argonaute-2蛋白在對(duì)蝦中也參與RNAi過(guò)程[17]。由于miRNA的加工成熟過(guò)程所需要的核心組份具有物種間的高度保守性，因而可以預(yù)見(jiàn)的是，對(duì)蝦miRNA的生物合成和加工成熟機(jī)制也具有一定的保守性。

miRNA可以通過(guò)與靶基因的mRNA的3’UTR(非翻譯區(qū))序列互補(bǔ)配對(duì)，介導(dǎo)靶基因mRNA的降解(完全的互補(bǔ)配對(duì))或者翻譯抑制(不完全的互補(bǔ)配對(duì))來(lái)調(diào)控靶基因的表達(dá)[1]。這是較早發(fā)現(xiàn)的比較經(jīng)典的miRNA調(diào)控靶基因的模型。后來(lái)的研究又發(fā)現(xiàn)，miRNA可以和編碼區(qū)以及5’UTR區(qū)結(jié)合；可調(diào)控某些非編碼基因的表達(dá)；miRNA甚至能夠上調(diào)靶基因的表達(dá)；miRNA還可以通過(guò)解除對(duì)靶基因的抑制來(lái)促進(jìn)其翻譯等[18]。

3 對(duì)蝦miRNA的生物學(xué)功能

目前關(guān)于對(duì)蝦miRNA的生物學(xué)功能方面的研究主要集中在對(duì)蝦與病毒感染和先天性免疫相關(guān)miRNA的研究?jī)蓚€(gè)方面。其中，有3篇報(bào)道致力于挖掘?qū)ξr中與病毒感染相關(guān)的miRNA。Zeng等[19]、Huang等[20]和Kaewkascholkul等[21]分別從凡納濱對(duì)蝦、日本囊對(duì)蝦和斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeusmonodon)中發(fā)現(xiàn)了一系列響應(yīng)WSSV感染的對(duì)蝦miRNA。有5篇報(bào)道則深入研究了對(duì)蝦特定miRNA在響應(yīng)病毒感染過(guò)程中所發(fā)揮的作用及其作用機(jī)制。Huang等[22]發(fā)現(xiàn)日本囊對(duì)蝦miR-7通過(guò)靶向作用于WSSV早期基因，從而在宿主-病毒相互作用中發(fā)揮重要功能。Xu等[23]發(fā)現(xiàn)了凡納濱對(duì)蝦中的Dorsal/miR-1959/Cactus反饋調(diào)節(jié)環(huán)路能促進(jìn)WSSV的感染，其中，Dorsal蛋白是NF-kB家族成員，Cactus是Dorsal的一個(gè)胞質(zhì)抑制劑。Zuo等[24]也報(bào)道了凡納濱對(duì)蝦中的miR-1959 所介導(dǎo)的NF-kB通路的反饋調(diào)節(jié)環(huán)路，并認(rèn)為此環(huán)路與病原生物感染和免疫刺激相關(guān)。 Huang等[25]發(fā)現(xiàn)羅氏沼蝦(M.rosenbergii)的miR-9041和miR-9850通過(guò)調(diào)控STAT(Signal transducer and activator of transcription，STAT)基因，從而促進(jìn)WSSV在宿主中的復(fù)制。Shu等[26]發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦miR-965通過(guò)靶向作用于病毒的wsv240基因，來(lái)抑制病毒對(duì)對(duì)蝦的感染。此外，他發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦miR-965還能夠靶向作用于對(duì)蝦的ATG5基因，從而促進(jìn)對(duì)蝦對(duì)病毒的吞噬作用。另外，還有6篇報(bào)道關(guān)注于對(duì)蝦的先天性免疫相關(guān)miRNA。Liu等[27]報(bào)道了日本囊對(duì)蝦miR-1所介導(dǎo)的對(duì)吞噬過(guò)程的調(diào)節(jié)作用。Yang等[28]發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證了日本囊對(duì)蝦中與吞噬、凋亡或體液免疫系統(tǒng)相關(guān)的24個(gè)miRNA。Yang等[29]指出對(duì)蝦miR-100通過(guò)調(diào)控胰蛋白酶基因來(lái)調(diào)控細(xì)胞的凋亡，從而促進(jìn)對(duì)蝦的抗病毒能力。Xu等[30]闡釋了對(duì)蝦對(duì)病毒感染的細(xì)胞免疫反應(yīng)。Gong等[31]報(bào)道了miR-1000-p53通路在調(diào)控對(duì)蝦細(xì)胞凋亡以響應(yīng)病毒感染中的作用。He等[32]指出對(duì)蝦中的兩個(gè)miRNA(miR-71和miR-13b)與病毒感染以及宿主的自噬作用有重要的關(guān)系。

此外，Huang等[12]還報(bào)道了miRNA加工成熟過(guò)程中的一個(gè)重要組分—Drosha酶在對(duì)蝦抗病毒感染中的重要作用，Labreuche等[33]解析了RNAi機(jī)器(RNAi machinery)在對(duì)蝦抗病毒中的功能。Su等[13]和Yao等[14]指出對(duì)蝦的Dicer-1酶也與對(duì)蝦的免疫反應(yīng)有關(guān)。Chen等[15]、Li等[16]和Yang等[17]則分別揭示了對(duì)蝦Dicer2酶和Argonaute2蛋白在對(duì)蝦免疫反應(yīng)中的作用。這些報(bào)道對(duì)人們深入了解對(duì)蝦病毒感染機(jī)制起到了極大的促進(jìn)作用。

了解對(duì)蝦病毒自身的miRNA在其對(duì)抗宿主免疫反應(yīng)中的作用，可以更清楚地闡明對(duì)蝦病毒感染機(jī)制。He等[34]研究發(fā)現(xiàn)，在宿主體內(nèi)，病毒的miRNA能通過(guò)靶向作用于自身的基因來(lái)提高其對(duì)對(duì)蝦的感染能力。Huang等[35]則發(fā)現(xiàn)了病毒miRNA可參與調(diào)控對(duì)蝦血淋巴細(xì)胞的凋亡過(guò)程。Ren等[36]報(bào)道了在WSSV感染日本囊對(duì)蝦時(shí)，WSSV中的2個(gè)miRNA(WSSV-miR-N13和WSSV-miR-N23)通過(guò)靶向作用于Toll通路中的核心基因Dorsal，來(lái)抑制對(duì)蝦中的Spz-Toll-Dorsal-ALF信號(hào)通路，從而促進(jìn)病毒的感染。

當(dāng)然，也有少量報(bào)道是關(guān)于對(duì)蝦miRNA的其它生物學(xué)功能的，例如：季鵬飛[37]報(bào)道了克氏原螯蝦(Procambarusclarkii)中響應(yīng)鹽脅迫條件的miRNA；Ikeda等[38]則揭示了有“活化石”之稱(chēng)的蝌蚪蝦(Triopscancriformis)中miRNA的進(jìn)化，同時(shí)闡述了其RNAi機(jī)器的各組分。隨著研究的不斷深入，相信越來(lái)越多的對(duì)蝦miRNA的生物學(xué)功能將會(huì)被人們所發(fā)現(xiàn)和關(guān)注。

4 展望

對(duì)蝦miRNA的研究起步較晚，始于2011年，雖然已在發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦中與病毒感染和自身免疫相關(guān)的miRNA方面取得了重要的研究進(jìn)展，但尚有許多研究工作有待于進(jìn)一步開(kāi)展，主要包括：(1)新的對(duì)蝦miRNA及其靶基因的挖掘。目前報(bào)道的對(duì)蝦miRNA的數(shù)量仍比較少，況且miRNA的表達(dá)具有組織特異性和發(fā)育階段的特異性。因此，發(fā)現(xiàn)新的miRNA有利于我們深入理解對(duì)蝦的多種生物學(xué)過(guò)程。但是，由于目前對(duì)蝦的全基因組序列尚未公布，序列信息已知的基因其數(shù)量非常有限，大大限制了對(duì)對(duì)蝦miRNA的靶基因的挖掘。一旦對(duì)蝦的全基因組序列的測(cè)序和注釋工作完成，將有效推動(dòng)對(duì)蝦miRNA的生物學(xué)功能及其作用機(jī)制的研究進(jìn)展。(2)對(duì)蝦miRNA的其它生物學(xué)功能尚有待進(jìn)一步地探索。目前，對(duì)蝦miRNA生物學(xué)功能方面的研究的主要關(guān)注點(diǎn)是病毒感染對(duì)蝦和對(duì)蝦的先天性免疫反應(yīng)過(guò)程。然而，這些研究目前大多停留在相關(guān)miRNA的發(fā)現(xiàn)，以及初步揭示這些miRNA與相應(yīng)生命活動(dòng)之間的相關(guān)性這一層面上。因此，病毒感染對(duì)蝦的機(jī)理以及對(duì)蝦響應(yīng)病毒感染所引發(fā)的先天性免疫反應(yīng)的分子機(jī)制仍有待于進(jìn)一步闡明。此外，對(duì)蝦miRNA所具有的其他生物學(xué)功能目前報(bào)道的仍非常少，因此，發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦miRNA的其它生物學(xué)功能，尤其是在調(diào)控發(fā)育方面的功能及其作用機(jī)制可能成為今后研究的新方向。

參考文獻(xiàn)：

[1] Bartel D P. MicroRNAs: Genomics, biogenesis, mechanism, and function[J]. Cell, 2004, 116(2): 281-297.

[2] Ambros V. The functions of animal microRNAs[J]. Nature, 2004, 431(7006): 350-355.

[3] Lee R C, Feinbaum R L, Ambros V. TheC.elegansheterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin-14[J]. Cell, 1993, 75(5): 843-854.

[4] Ruan L, Bian X, Ji Y, et al. Isolation and identification of novel microRNAs fromMarsupenaeusjaponicus[J]. Fish &Shellfish Immunology, 2011, 31(2): 334-340.

[5] 汪元梅. 凡納濱對(duì)蝦miRNAs的挖掘及表達(dá)分析[D]. 廣州: 華南農(nóng)業(yè)大學(xué), 2012.

Wang Y M. MiRNAs Discovery and Expression Analysis in Pacific White Shrimp,Litopenaeusvannamei[D]. Guangzhou: South China Agricultural University, 2012.

[6] Xi Q Y, Xiong Y Y, Wang Y M, et al. Genome-wide discovery of novel and conserved microRNAs in white shrimp (Litopenaeusvannamei)[J]. Molecular Biology Reports, 2015, 42(1): 61-69.

[7] Zhou Y, He Y, Wang C, et al. Characterization of miRNAs from hydrothermal vent shrimpRimicarisexoculata[J]. Marine Genomics, 2015, 24: 371-378.

[8] Sun S, Fu H, Ge X, et al. Identification and comparative analysis of the oriental river prawn (Macrobrachiumnipponense) microRNA expression profile during hypoxia using a deep sequencing approach[J]. Comparative Biochemistry and Physiology Part D: Genomics and Proteomics, 2016, 17: 41-47.

[9] Gregory R I, Shiekhattar R. MicroRNA biogenesis and cancer[J]. Cancer Research, 2005, 65(9): 3509-3512.

[10] 馬圣運(yùn), 白玉, 韓凝, 等. miRNA* 生物合成及其功能研究的新發(fā)現(xiàn)[J]. 遺傳, 2012, 34(4): 383-388.

Ma S Y, Bai Y, Han N, et al. Recent research progress of biogenesis and functions of miRNA*[J]. Hereditas, 2012, 34(4): 383-388.

[11] 徐丹丹. 對(duì)蝦WSSV感染相關(guān)miRNA的篩選及Drosha在抗WSSV中的作用[D]. 廈門(mén)： 廈門(mén)大學(xué)， 2011.

Xu D D. The screening of miRNAs involved in WSSV Infection and the Role of Drosha in Shrimp Against WSSV[D].Xiamen: Xiamen University 2011.

[12] Huang T, Xu D, Zhang X. Characterization of shrimp Drosha in virus infection[J]. Fish &Shellfish Immunology, 2012, 33(3): 575-581.

[13] Su J, Oanh D T H, Lyons R E, et al. A key gene of the RNA interference pathway in the black tiger shrimp,Penaeusmonodon: Identification and functional characterization of Dicer-1[J]. Fish &Shellfish Immunology, 2008, 24(2): 223-233.

[14] Yao X, Wang L, Song L, et al. A Dicer-1 gene from white shrimpLitopenaeusvannamei: Expression pattern in the processes of immune response and larval development[J]. Fish &Shellfish Immunology, 2010, 29(4): 565-570.

[15] Chen Y H, Jia X T, Zhao L, et al. Identification and functional characterization of Dicer2 and five single VWC domain proteins ofLitopenaeusvannamei[J]. Developmental & Comparative Immunology, 2011, 35(6): 661-671.

[16] Li X, Yang L, Jiang S, et al. Identification and expression analysis of Dicer2 in black tiger shrimp (Penaeusmonodon) responses to immune challenges[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2013, 35(1): 1-8.

[17] Yang L, Li X, Jiang S, et al. Characterization of Argonaute2 gene from black tiger shrimp (Penaeusmonodon) and its responses to immune challenges[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2014, 36(1): 261-269.

[18] 鄭永霞, 焦炳華. miRNA 的生物形成及調(diào)控基因表達(dá)機(jī)制[J]. 生命的化學(xué), 2010(6): 821-826.

Zheng Y X, Jiao B H. Biogenesis of microRNA and mechanism of the regulation of gene expression[J]. Chemistry of Life, 2010 (6): 821-826.

[19] Zeng D, Chen X, Xie D, et al. Identification of highly expressed host microRNAs that respond to white spot syndrome virus infection in the Pacific white shrimpLitopenaeusvannamei(Penaeidae)[J]. Genet Mol Res, 2015, 14: 4818.

[20] Huang T, Xu D, Zhang X. Characterization of host microRNAs that respond to DNA virus infection in a crustacean[J]. BMC Genomics, 2012, 13(1): 159.

[21] Kaewkascholkul N, Somboonviwat K, Asakawa S, et al. Shrimp miRNAs regulate innate immune response against white spot syndrome virus infection[J]. Developmental and Comparative Immunology, 2016, 60: 191-201.

[22] Huang T, Zhang X. Functional analysis of a crustacean microRNA in host-virus interactions[J]. Journal of Virology, 2012, 86(23): 12997-13004.

[23] Xu X, Yuan J, Yang L, et al. The Dorsal/miR-1959/Cactus feedback loop facilitates the infection of WSSV inLitopenaeusvannamei[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2016, 56: 397-401.

[24] Zuo H, Yuan J, Chen Y, et al. A MicroRNA-Mediated Positive Feedback Regulatory Loop of the NF-κB Pathway inLitopenaeusvannamei[J]. The Journal of Immunology, 2016, 196(9): 3842-3853.

[25] Huang Y, Wang W, Ren Q. Two host microRNAs influence WSSV replication via STAT gene regulation[J]. Scientific Reports, 2016, 6: 23643.

[26] Shu L, Li C, Zhang X. The role of shrimp miR-965 in virus infection[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2016, 54: 427-434.

[27] Liu C, Wang J, Zhang X. The involvement of MiR-1-clathrin pathway in the regulation of phagocytosis[J]. PloS One, 2014, 9(6): e98747.

[28] Yang G, Yang L, Zhao Z, et al. Signature miRNAs involved in the innate immunity of invertebrates[J]. PloS One, 2012, 7(6): e39015.

[29] Yang L, Yang G, Zhang X. The miR-100-mediated pathway regulates apoptosis against virus infection in shrimp[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2014, 40(1): 146-153.

[30] Xu D, Liu W, Alvarez A, et al. Cellular immune responses against viral pathogens in shrimp[J]. Developmental and Comparative Immunology, 2014, 47(2): 287-297.

[31] Gong Y, Ju C, Zhang X. The miR-1000-p53 pathway regulates apoptosis and virus infection in shrimp[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2015, 46(2): 516-522.

[32] He Y, Sun Y, Zhang X. Noncoding miRNAs bridge virus infection and host autophagy in shrimp in vivo[J]. The FASEB Journal, 2017: fj. 201601141RR.

[33] Labreuche Y, Warr G W. Insights into the antiviral functions of the RNAi machinery in penaeid shrimp[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2013, 34(4): 1002-1010.

[34] He Y, Yang K, Zhang X. Viral microRNAs targeting virus genes promote virus infection in shrimp in vivo[J]. Journal of Virology, 2014, 88(2): 1104-1112.

[35] Huang T, Cui Y, Zhang X. Involvement of viral microRNA in the regulation of antiviral apoptosis in shrimp[J]. Journal of Virology, 2014, 88(5): 2544-2554.

[36] Ren Q, Huang X, Cui Y, et al. Two white spot syndrome virus microRNAs target the Dorsal gene to promote virus infection inMarsupenaeusjaponicusshrimp[J]. Journal of Virology, 2017, 91(8): e02261-16.

[37] 季鵬飛. 克氏原螯蝦在鹽脅迫條件下差異化的microRNA表達(dá)譜的研究[D]. 南京: 南京大學(xué), 2014.

Ji P F. A pilotStudy of Crayfish (Procambarusclarkii)MicroRNA Profile Under Salt Stress[D]. Nanjing: Nanjing University, 2014.

[38] Ikeda K T, Hirose Y, Hiraoka K, et al. Identification, expression, and molecular evolution of microRNAs in the “l(fā)iving fossil”Triopscancriformis(tadpole shrimp)[J]. Rna-a Publication of the Rna Society, 2015, 21(2): 230-242.