臍血血細胞參數(shù)生物參考區(qū)間的建立與研究

陳小燕，杜 琪

（1.山東省臨沂市婦女兒童醫(yī)院，山東 臨沂 276001；2.山東省臨沂市蘭山區(qū)疾病預防控制中心，山東 臨沂 276001）

1 簡 介

胎兒娩出后，及時進行臍帶結(jié)扎并離斷，將殘留在臍帶內(nèi)以及胎盤近胎兒側(cè)血管內(nèi)的血液收集，可作為新生兒最早的血液標本，臍帶血在新生兒諸多常見疾病中起到良好的預測作用，因而近年來被科研工作者廣泛重視。對新生兒來說，順利進行靜脈穿刺并采集足夠多的標本是一件非常困難的事，對健康狀況較差的患兒或早產(chǎn)兒來說更是如此。采血對新生兒的健康產(chǎn)生影響，發(fā)生血栓栓塞、動脈痙攣甚至局部壞死等[1]。而臍血為剛出生的新生兒的血液檢測提供了可替代的選擇[2]。

臍血全血細胞計數(shù)是最為廣泛應用于評估新生兒臨床狀況的實驗室檢查之一。可對全身狀況進行初步的評估，有利于疾病的診斷和鑒別診斷?？梢詾樾律鷥杭膊〉脑缙谠\斷提供及時有效、創(chuàng)傷性小的檢查方式。臍帶血全血細胞分析的各個檢測指標往往會因為孕婦和嬰兒的生理狀態(tài)不同而發(fā)生變化。因此建立一個全面而準確的生物參考區(qū)間是合理利用臍血全血細胞計數(shù)對新生兒狀況進行評估的前提。因此建立本地區(qū)本實驗室臍血全血細胞分類計數(shù)的生物參考區(qū)間具有重要的臨床意義。

2 方法與材料

2.1 臍血采集

2.1.1 研究對象的選擇

選擇在2016年1月～2016年12月在臨沂市婦婦兒童醫(yī)院出生的健康新生兒共2280例，產(chǎn)婦年齡22～45歲。

2.1.2 臍血采集

采用臍靜脈穿刺法，采集前先準備含EDTA-K2抗凝劑的BD公司生產(chǎn)的抗凝管一支，放在無菌臺，待新生兒娩出后，在距離臍輪約5～8 cm處用止血鉗夾住臍帶的兩端，于兩鉗之間剪斷臍帶，兩分鐘內(nèi)在胎盤的一端選擇臍靜脈，消毒后用采血針向著胎盤最粗臍靜脈的方向穿刺，約采集2 mL的臍帶血，注入含有EDTA-K2抗凝劑的試管中，立即顛倒混勻5～8次，1小時內(nèi)送至實驗室。肉眼觀察標本是否有凝塊、溶血等標本不合格的現(xiàn)象，剔除不合格的標本。于2小時內(nèi)完成血細胞計數(shù)與分類。

2.2 臍血血細胞檢測

2.2.1 檢測儀器與試劑

用Beckman公司生產(chǎn)的DXH800全血動血細胞分析儀進行血液常規(guī)檢測，試劑為該公司配套產(chǎn)品。利用上述試劑與儀器對臍血進行血細胞自動計數(shù)，并自動進行白細胞分類，完全按照儀器與試劑生產(chǎn)廠家的操作說明進行。

2.2.2 檢測項目

白細胞、淋巴細胞百分比、單核細胞百分比、中性粒細胞百分比、嗜酸粒細胞百分比、嗜堿粒細胞百分比、淋巴細胞絕對值、單核細胞絕對值、中性粒細胞絕對值、嗜酸粒細胞絕對值、嗜堿粒細胞絕對值、紅細胞、血紅蛋白、紅細胞壓積、紅細胞平均體積、紅細胞平均血紅蛋白濃度、紅細胞平均血紅蛋白量、紅細胞體積分布寬度、有核紅細胞計數(shù)、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血小板、血小板分布寬度、血小板壓積、大血小板比例共24個指標。

2.3 判斷生物區(qū)間的建立是否需要分組

按新生兒性別將標本分為男性組和女性組；按分娩方式將標本分為剖宮產(chǎn)組和經(jīng)陰分娩組；按出生時新生兒的胎齡，將標本分為早產(chǎn)、足月、過期產(chǎn)三組。按產(chǎn)婦年齡將標本分為≥35歲和＜35歲組。統(tǒng)計分析各組之間臍帶血全血細胞分析24項指標是否有顯著差異。有顯著差異的項目分別建立生物參考區(qū)間，無顯著差異的項目則不再進行分組，建立一個通用的生物參考區(qū)間。

2.4 統(tǒng)計學方法

檢測數(shù)據(jù)中是否有離群值，對各項指標進行正態(tài)性檢驗，采用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件分析。如果服從正態(tài)分布，則各項指標的參考值范圍用均值與標準差來進行估計，雙側(cè)采用x±1.96s確定參考區(qū)間，單側(cè)則采用x±1.64s。如果為偏態(tài)分布，則用百分位數(shù)法，雙側(cè)采用P2.5-P97.5。單側(cè)則采用小于P5或大于P95。

3 結(jié) 果

3.1 男性新生兒與女性新生兒臍血血細胞參數(shù)的比較

根據(jù)新生兒性別，將所有標本分為男、女兩組。對臍血全血細胞分析各項指標進行分析，其中紅細胞（P=0.005）、血紅蛋白（P=0.002）、白細胞（P=0.011）、血小板（P=0.021）、血小板壓積（P=0.032）在男女新生兒之間具有顯著性差異，其他項目之間沒有顯著性差異。

3.2 分娩方式對臍血全血細胞分析各項參數(shù)的影響

根據(jù)分娩方式的不同，臍血被分為經(jīng)陰分娩組與剖宮產(chǎn)組，將臍血全血細胞分析各項指標進行分析，其中紅細胞（P=0.009）、血紅蛋白（P＜0.001）、紅細胞壓積（P＜0.001）、有核紅細胞（P＜0.001）、血小板（P=0.009）在經(jīng)陰分娩組與剖宮產(chǎn)組之間具有顯著性差異，其他項目之間沒有顯著性差異。

3.3 不同胎齡新生兒臍血全血細胞分析比較表

根據(jù)分娩胎齡的不同，將臍血標本分為早產(chǎn)組與足月產(chǎn)組和過期產(chǎn)組，對臍血全血細胞分析各項指標進行分析，其中紅細胞（P=0.020）、血紅蛋白（P=0.030）、紅細胞壓積（P=0.041）、紅細胞平均體積（P=0.001）、有核紅細胞（P=0.032）、網(wǎng)織紅細胞（P=0.011）、血小板（P=0.031）、血小板壓積（P=0.035）在三組之間具有顯著性差異，其他項目之間沒有顯著性差異。

4 討 論

臍血對于剛出生的新生兒來說，是理想的實驗室檢查的標本來源。它不僅能反映胎兒造血系統(tǒng)的狀況，也能反映新生兒在圍生期的狀況，如圍生期窒息，胎糞污染、絨毛膜羊膜炎等[4]。臍血全血細胞分析與諸多因素有關(guān)，以往的研究表明，新生兒在宮內(nèi)發(fā)生的情況，如宮內(nèi)窒息、感染、新生兒溶血均會影響全血細胞分析的結(jié)果。有研究表明，胎兒的分娩方式、新生兒體重、胎盤娩出方式均可影響臍血采集質(zhì)和量。宮內(nèi)感染時，新生兒臍血與正常新生兒的白細胞等參數(shù)有顯著差異[5]。臍血與成人或兒童期的血液標本有很大不同，白細胞、網(wǎng)織紅細胞、白蛋白、免疫球蛋白、尿素氮等都存在顯著差異[6]，因此不能用成人的血細胞檢測的生物參考區(qū)間來評估新生兒的臍血標本。臍血與兒童期血液標本也存在很大差異[7]。因此，需要單獨建立臍血的生物參考區(qū)間，才能在臨床上進行更好的應用。

Yu Hsun Chang等研究發(fā)現(xiàn)，新生兒性別對臍帶血有核紅細胞計數(shù)、MCHC的影響有統(tǒng)計學意義[8]。Lee等[4]進行的研究中，性別對臍帶血中嗜堿性粒細胞百分比和有核紅細胞比例有明顯影響。我們的研究發(fā)現(xiàn)除紅細胞、白細胞、血小板、血小板壓積與性別有關(guān)外，血紅蛋白濃度也與性別有關(guān)，但MCV、MCH、MCHC與性別無關(guān)。

Lee等進行的研究中，分娩方式對單核細胞、嗜堿性粒細胞有一定的影響[4]。而Yu-Hsun Chang等進行的研究發(fā)現(xiàn)，剖腹產(chǎn)影響臍血中紅細胞、血紅蛋白、紅細胞壓積、和血小板計數(shù)、白細胞計數(shù)及部分白細胞分類結(jié)果，但對MCV、MCH、MCHC沒有顯著影響[8]。在我們的研究中，剖腹產(chǎn)的新生兒臍血中紅細胞、血紅蛋白、紅細胞壓積、有核紅細胞計數(shù)、血小板計數(shù)都較經(jīng)陰分娩的新生兒低。

毛維玉等研究了孕20-24周的臍靜脈穿刺標本的白細胞、紅細胞等血細胞參數(shù)，與成人相比，具有顯著性差異[11]。我們的研究中，早產(chǎn)兒與足月兒及過期產(chǎn)的新生兒相比，紅細胞計數(shù)、血紅蛋白、紅細胞壓積增高，而MCV，有核紅細胞、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、血小板、血小板壓積有所下降。

[1] Ramasethu J.Complications of vascular catheters in the neonatal intensive care unit[J].Clin Perinatol, 2008,35(1):199-222.

[2] Lee J C,Ahern T P,Chaves F P,et al.Utility of hematologic and volume,conductivity,and scatter parameters from umbilical cord blood in predicting chorioamnionitis[J].Int J Lab Hematol,2010,32(3):351-359.

[3] Walka M M,Sonntag J,Kage A,et al.Complete blood counts from umbilical cords of healthy term newborns by two automated cytometers[J].Acta Haematol,1998,100(4):167-173.

[4] Lee H R,Shin S,Yoon J H,et al.[Complete blood count reference values of donated cord blood from Korean neonates][J]. Korean J Lab Med,2009,29(3):179-184.

[5] 毛維玉.581例臍帶血細胞各參數(shù)結(jié)果分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志, 2005(07):75-76.