循環(huán)腫瘤細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化監(jiān)測(cè)在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者診療中的應(yīng)用

陳海濤 陳 平 徐林成

(鹽城市第一人民醫(yī)院，江蘇 鹽城 224005)

循環(huán)腫瘤細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化監(jiān)測(cè)在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者診療中的應(yīng)用

陳海濤 陳 平 徐林成

(鹽城市第一人民醫(yī)院，江蘇 鹽城 224005)

目的 探究循環(huán)腫瘤細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化監(jiān)測(cè)在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者診療中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選擇2016 年1月至2017年1月我院收治的轉(zhuǎn)移性女性乳腺癌患者 325 例(年齡37～66歲)，給予表阿霉素(90 mg/m2)聯(lián)合多西紫杉醇(75 mg /m2) 靜脈化療(既往均未接受此方案)，3 周為 1 周期，共 2 個(gè)周期。同時(shí)，在化療前，化療每個(gè)周期后進(jìn)行循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells，CTCs)個(gè)數(shù)統(tǒng)計(jì)，同時(shí)期以健康女性志愿者200例為空白對(duì)照。結(jié)果 以健康組為空白對(duì)照，對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移組化療前、周期1后、周期2后進(jìn)行靜脈采血檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，癌癥組與健康組血液循環(huán)中CTCs個(gè)數(shù)存在顯著性差異(P<0.05)，且化療前后CTCs個(gè)數(shù)同樣存在顯著性差異(P<0.05)；分別對(duì)化療患者在化療后進(jìn)行隨訪，在1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月進(jìn)行CTCs細(xì)胞個(gè)數(shù)檢測(cè)，6個(gè)月時(shí)對(duì)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移惡化進(jìn)行組織驗(yàn)證，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，發(fā)生組織轉(zhuǎn)移的CTCs細(xì)胞數(shù)達(dá)到(3.89±1.08)個(gè)/10 ml,與未發(fā)生轉(zhuǎn)移者(2.74±1.07)個(gè)/10 ml具有顯著性差異(P<0.05)。結(jié)論 循環(huán)腫瘤細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化監(jiān)測(cè)對(duì)于轉(zhuǎn)移性乳腺癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移以及化療之后效果的驗(yàn)證具有顯著地臨床意義，值得推廣使用。

循環(huán)腫瘤細(xì)胞；轉(zhuǎn)移性乳腺癌；指標(biāo)檢測(cè)

世界范圍內(nèi)，乳腺癌是導(dǎo)致婦女死亡的主要原因之一[1]，其中遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生是導(dǎo)致乳腺癌患者死亡的最主要原因。當(dāng)前，腫瘤檢測(cè)手段主要依賴于影像學(xué)和血清標(biāo)志物?；谀[瘤細(xì)胞播散理論，檢測(cè)循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells,CTCs) 有可能早期發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)情況[2]。然而，外周血循環(huán)中的轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞是否可以成為治療效果和患者癌癥發(fā)病情況的預(yù)估指標(biāo)還不是十分清楚。本研究主要探究循環(huán)腫瘤細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化監(jiān)測(cè)在轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者診療中的應(yīng)用價(jià)值。

1 資料和方法

1.1一般資料

選擇 2016 年1月至2017年1月我院收治的轉(zhuǎn)移性女性乳腺癌患者 325 例(年齡37～66歲) 。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)所有患者簽署自愿捐獻(xiàn)血液樣本和接受化療的知情同意書(shū); (2) 所有患者既往均有明確的病理組織學(xué)診斷，現(xiàn)具有充分的臨床或影像學(xué)證據(jù)確診為轉(zhuǎn)移性乳腺癌，且轉(zhuǎn)移病灶可測(cè)量或可評(píng)估;(3)具有良好的溝通能力和理解力;(4) ECOG 評(píng)分為 0～2，預(yù)計(jì)生存期≥3 個(gè)月;(5) 無(wú)第二腫瘤;(6) 多程治療的患者距末次治療(包括口服化療、靜脈化療、放療、免疫治療等) ≥1 個(gè)月。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)有明確的感染病灶;(2)明顯的認(rèn)知障礙。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意實(shí)施。另選取同期200例健康女性志愿者作為對(duì)照。

1.2方法

1.2.1血樣處理 采集 325例轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者化療前和200例健康志愿者的外周血10 ml， 4 h 內(nèi)處理樣品。將血樣與 10 倍體積的溶血素混合，冰上孵育 15 min，450 r/min離心5 min，棄上清，PBS 洗滌 2 次，制成細(xì)胞懸液。

1.2.2CTCs 檢測(cè)系統(tǒng) CTCs 檢測(cè)和表征技術(shù)進(jìn)步包括: (1)基于圖像方法，經(jīng)典的免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC) ，美國(guó)食品和藥物管理局(FDA) 批準(zhǔn)的 Cell Search系統(tǒng)(Veridex) ，Ariol系統(tǒng)，鐳射掃描細(xì)胞計(jì)數(shù)。

1.2.3治療方案及療效評(píng)價(jià) 給予表阿霉素(90 mg/m2) 聯(lián)合多西紫杉醇(75 mg/m2) 靜脈化療(既往均未接受此方案) ，3 周為 1 周期，共 2 個(gè)周期。用藥前后給予地塞米松和昂丹司瓊預(yù)防不良反應(yīng)。根據(jù)實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn) RECIST1.1 版進(jìn)行療效評(píng)價(jià)[3]，分為CR、PR、SD和PD。以CR+PR計(jì)算有效率(RR) 。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1一般資料比較

健康對(duì)照組與乳腺癌轉(zhuǎn)移組一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 一般資料比較

2.2化療前后血液循環(huán)中CTCs個(gè)數(shù)比較

以健康組為空白對(duì)照，對(duì)乳腺癌轉(zhuǎn)移組化療前、周期1后、周期2后進(jìn)行靜脈采血檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，癌癥組與健康組血液循環(huán)中CTCs個(gè)數(shù)存在顯著性差異(P<0.05)，且化療前后CTCs個(gè)數(shù)同樣存在顯著性差異(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 化療前后血液循環(huán)中CTCs個(gè)數(shù)比較(/10ml)

注：*是指與健康組相比，P<0.05；#是指與化療前相比，P<0.05。

2.3CTCs細(xì)胞數(shù)與預(yù)后發(fā)生癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移比較

分別對(duì)化療患者在化療后進(jìn)行隨訪，在1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月進(jìn)行CTCs細(xì)胞個(gè)數(shù)檢測(cè)，6個(gè)月時(shí)對(duì)是否發(fā)生轉(zhuǎn)移惡化進(jìn)行組織驗(yàn)證，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，發(fā)生組織轉(zhuǎn)移的CTCs細(xì)胞數(shù)與未發(fā)生惡化者具有顯著性差異(P<0.05)，見(jiàn)表3。

表3 CTCs細(xì)胞數(shù)與預(yù)后發(fā)生癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移比較(/10 ml)

注：*是指與未惡化組相比，P<0.05。

3 討 論

乳腺癌占全球女性侵襲性癌癥的 22.9%。中國(guó)女性乳腺癌發(fā)病年齡較西方女性偏小，并且發(fā)病時(shí)處于絕經(jīng)前的比例較高(60%～70%)。絕經(jīng)前罹患乳腺癌的患者因年輕及卵巢功能活躍等因素，往往較絕經(jīng)后罹患乳腺癌的患者更易出現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，預(yù)后也較差[4]。從理論上講，轉(zhuǎn)移性乳腺癌是不可治愈性疾病，治療目的是盡可能延長(zhǎng)患者的生存期及提高患者的生活質(zhì)量。因此，轉(zhuǎn)移性乳腺癌研究的一個(gè)重要目標(biāo)就是找到可以方便準(zhǔn)確預(yù)測(cè)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的生物標(biāo)記物以提示治療效果和患者實(shí)時(shí)病情[5]。 隨著對(duì)轉(zhuǎn)移性乳腺癌的深入研究， 對(duì)于手術(shù)后切除預(yù)后預(yù)測(cè)，療效評(píng)估及復(fù)發(fā)監(jiān)測(cè)，體液檢測(cè)在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中逐漸進(jìn)入更為廣泛的研究。其主要指血液中包含的兩種可以用于分析腫瘤分子表型的物質(zhì)， 即循環(huán)腫瘤細(xì)胞(circulating tumor cells，CTCs)和循環(huán)腫瘤DNA(circulating tumor， ctDNA)[6-7]。循環(huán)腫瘤細(xì)胞是指能在腫瘤患者外周血中檢測(cè)到、來(lái)源于實(shí)體腫瘤、逃離宿主免疫殺傷后存活的異質(zhì)性腫瘤細(xì)胞。進(jìn)入血液循環(huán)而未被清除的腫瘤細(xì)胞通過(guò)遷移、黏附、相互聚集形成微小癌栓，并在一定條件下發(fā)展為轉(zhuǎn)移灶。CTCs以單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)(又稱循環(huán)腫瘤微栓子，CTM)存在于循環(huán)系統(tǒng)中[8]。研究發(fā)現(xiàn) CTCs 的形成與上皮細(xì)胞—間充質(zhì)轉(zhuǎn)化機(jī)制有關(guān)。 血液中的 CTCs既可能是直接從病灶脫落進(jìn)入血液中的上皮特征 CTCs，也可能是經(jīng)歷 EMT 由原發(fā)灶或轉(zhuǎn)移灶脫落進(jìn)入并生存于血液循環(huán)中的 CTCs。最新研究發(fā)現(xiàn)， CTM與間質(zhì)細(xì)胞表型 CTCs密切相關(guān)，并且高比例的間質(zhì)細(xì)胞表型CTCs與化學(xué)治療耐藥有關(guān)[9]。

CTCs可以預(yù)測(cè)患者預(yù)后。一項(xiàng)國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)[12]，當(dāng) CTCs>3個(gè)/10 ml，則轉(zhuǎn)移性乳腺癌的5年生存率較低，治療效果也較差； 但如果治療后 CTCs水平可下降(<3 個(gè)/10 ml)，則預(yù)后較好。該研究表明， CTCs數(shù)量的多少與轉(zhuǎn)移性乳腺癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移以及預(yù)后關(guān)系密切，可用于判斷轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者預(yù)后。同時(shí)Cohen 等人發(fā)現(xiàn)，CTCs≥2 個(gè)是轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的不良預(yù)后因素(HR： 2.78，95% CI：1.10～7.02)， 并且與圍手術(shù)期死亡率相關(guān)。乳腺癌轉(zhuǎn)移患者 CTCs平均數(shù)目普遍多于無(wú)轉(zhuǎn)移的患者， 而且可切除的乳腺癌轉(zhuǎn)移患者CTCs 陽(yáng)性率遠(yuǎn)低于不可切除患者。結(jié)合本次試驗(yàn)結(jié)果顯示，CTCs計(jì)數(shù)不僅在晚期腫瘤患者的預(yù)后評(píng)估方面具有意義， 其治療前后的數(shù)目變化， 也可在一定程度上反映療效， 可能在療效監(jiān)測(cè)方面具有意義。治療前 CTCs超出 5 個(gè)/7.5 ml的轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者， 約一半患者的 CTCs數(shù)目可在治療中降低。若CTCs數(shù)目無(wú)變化或增高， 則提示治療無(wú)效。

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Application of circulating tumor cell dynamic change monitoring in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer in China

CHEN Hai-tao CHEN Ping XU Lin-cheng

(First People's Hospital of Yancheng, Yancheng 224005, China)

Objective: To explore the application value of circulating tumor cell dynamic monitoring in diagnosis and treatment of metastatic breast cancer. Methods: 325 patients (aged 37～66 years) with metastatic female breast cancer admitted in our hospital from January 2016 to January 2017, were treated with epirubicin (90mg/m2) combined with docetaxel (75mg/m2) intravenous chemotherapy (previously not accepted this program), 3 weeks for 1 cycle, a total of 2 cycles. At the same time, before chemotherapy, the number of CTCs was counted after each cycle of chemotherapy, and 200 healthy volunteers were used as controls. Results: The results showed that there were significant differences in the number of CTCs between the cancer group and the healthy group (P<0.05) . There was significant difference between the two groups (P>0.05) . There was significant difference between the cancer group and the healthy group (P<0.05). The patients were followed up after chemotherapy. The number of CTCs was detected at 1 month, 3 months and 6 months respectively. The number of CTCs was significantly different between the two groups (P<0.05). The results showed that the number of CTCs in the tissue metastasis was (3.89±1.08)cells/10ml, which was significantly different from that in the untreated group [(2.74±1.07) cells/10ml] (P<0.05). Conclusion: The results show that the monitoring of circulating tumor cell dynamics is of great clinical significance in the detection of metastatic breast cancer and the effect of chemotherapy after chemotherapy, which is worthy of popularization.

circulating tumor cells; metastatic breast cancer; index detection

陳海濤(1982—)，男，江蘇鹽城人，本科，主治醫(yī)師，主要從事病理診斷工作。

R446.1

A

1004-7115(2018)01-0018-03

10.3969/j.issn.1004-7115.2018.01.005

2017-10-20)