CCDC34在胃癌中的表達(dá)及與患者預(yù)后的相關(guān)性研究

趙亞軍 蔡善保（通訊作者）

（1新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院 河南 新鄉(xiāng) 453003）

（2安徽省腫瘤醫(yī)院腹部外科 安徽 合肥 230000）

卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)基因或其表觀遺傳的改變與許多惡性腫瘤有關(guān)，特別是在轉(zhuǎn)移侵襲性較高的腫瘤中多發(fā)現(xiàn)其表達(dá)異常。近年多項(xiàng)研究表明，CCDC家族分子與腫瘤細(xì)胞侵襲、遷移及轉(zhuǎn)移表型的獲得有著直接的聯(lián)系[1-3]。我們采用免疫組化法檢測胃癌中CCDC34與微血管密度的表達(dá)，探討其在胃癌中的表達(dá)情況及其與胃癌血管生成的關(guān)系。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集2010年6月至2012年3月間我院普外科行根治性手術(shù)的胃癌患者標(biāo)本80例及配對的癌旁正常組織。其中：男61例，女19例，平均年齡62.4±8.2歲，病理類型均為腺癌。

1.2 免疫組織化學(xué)染色

所有標(biāo)本用4%甲醛固定24h，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片厚4um，貼附于預(yù)先用1%多聚賴氨酸處理的載玻片，65℃烤片1h，采用SP法按常規(guī)步驟進(jìn)行檢測，兔抗人CCDC34多克隆抗體滴度為1∶50，鼠抗人CD31多克隆抗體滴度為1∶100，以磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照，用已知陽性標(biāo)本作為陽性對照。

1.3 免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

在光學(xué)顯微鏡下觀察，免疫組化染色以細(xì)胞核和/或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)特異性片狀或顆粒狀棕黃色著色為陽性細(xì)胞。觀測10個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)1000個(gè)腫瘤細(xì)胞。計(jì)算陽性細(xì)胞百分率。陰性：無棕黃色染色或陽性細(xì)胞百分率＜10%；陽性：陽性細(xì)胞百分率10%～50%；強(qiáng)陽性：陽性細(xì)胞百分率＞50%。

1.4 腫瘤微血管密度計(jì)數(shù)

首先在低倍鏡下觀察整張切片，在腫瘤浸潤區(qū)確定微血管最密集的3個(gè)視野，然后在高倍鏡下計(jì)數(shù)視野范圍內(nèi)陽性染色的微血管。取3個(gè)視野計(jì)數(shù)結(jié)果的均數(shù)為該切片的MVD。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)和ANOVA單因素方差分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法，CCDC34與腫瘤微血管密度值相關(guān)性采用Spearman法分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 CCDC34在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)情況

如圖1所示，80例胃癌組織中CCDC34的陽性表達(dá)率為80.0%，主要定位于細(xì)胞質(zhì)中，其中28例呈高表達(dá)，36例呈低表達(dá)，而在癌旁正常組織中無表達(dá)。與正常胃組織相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1 在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)情況

2.2 CD31在胃癌及癌旁組織中的表達(dá)情況

CD31主要表達(dá)于血管內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜。如圖2，與癌旁正常組織相比，胃癌組織中CD31標(biāo)記的腫瘤微血管密度值明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖2 胃癌及癌旁正常組織中MVD值的比較

2.3 胃癌組織中抗體表達(dá)的相關(guān)性分析

相關(guān)分析顯示：在胃癌組織中二者的表達(dá)呈顯著正相關(guān)性，說明兩者在胃癌的發(fā)生發(fā)展中密切相關(guān)。

2.4 CCDC34表達(dá)情況與胃癌患者預(yù)后

如圖3所示,與低表達(dá)CCDC34的胃癌患者相比，高表達(dá)的患者總生存期明顯降低，危險(xiǎn)系數(shù)HR為1.42，提示胃癌患者抗體的表達(dá)水平與預(yù)后關(guān)聯(lián)密切。

圖3 差異表達(dá)的胃癌患者預(yù)后生存曲線

3.討論

胃癌是最常見的消化道腫瘤之一，其死亡率居所有惡性腫瘤的第二位。盡管這些年來隨著我國醫(yī)療水平的提高，胃癌的死亡率有所下降，但其依然是一種嚴(yán)重危害人類健康的疾病，且中晚期胃癌患者預(yù)后更差。胃癌的病理生理機(jī)制復(fù)雜，是受多基因調(diào)控的復(fù)雜基因改變的過程，其生長和轉(zhuǎn)移的重要基礎(chǔ)是腫瘤內(nèi)血管的支持。因此，在胃癌中深入開展有關(guān)腫瘤血管生成研究及開發(fā)新的有潛在價(jià)值的靶點(diǎn)及藥物顯得尤為迫切和必要。

本研究結(jié)果顯示，胃癌組織中CCDC34表達(dá)的陽性率為80%，而在對應(yīng)癌旁正常組織中并不表達(dá)。腫瘤分化程度越差，胃癌組織中的高表達(dá)率越高；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者較無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達(dá)率更高；同時(shí)，隨著TNM分期的增加，CCDC34的高表達(dá)率也隨之呈上升趨勢；進(jìn)一步生存分析發(fā)現(xiàn)，與低表達(dá)的胃癌患者相比，高表達(dá)者總生存期更短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上述結(jié)果提示：CCDC34表達(dá)上調(diào)可能在胃癌發(fā)生、發(fā)展中扮演著促癌基因的角色，強(qiáng)陽性表達(dá)可能與胃癌的侵襲、轉(zhuǎn)移及預(yù)后密切相關(guān)。另外，我們還發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中CCDC34高表達(dá)與CD31標(biāo)記的MVD呈顯著正相關(guān)，在胃癌中強(qiáng)陽性表達(dá)的患者往往提示腫瘤分化差、病期晚、預(yù)后差以及較高的腫瘤微血管密度值。因此，CCDC34在胃癌中可能作為新型血管生長因子促進(jìn)其腫瘤血管的生成。

綜上所述，CCDC34可能成為胃癌抗血管生成治療的潛在靶點(diǎn)，值得未來進(jìn)一步深入探索，將其發(fā)展并投入到臨床。

[1]黃晶，肖琳，鞏小婷.新分子CCDC134的功能研究[D].第十屆國際免疫學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議,2008.

[2]Kobayashi S.Identification of a new secretory factor,CCDC3,in adipocytes and endothelial cells.Biochem Biophys Res Commun. 2010;39:29-35.

[3]張秋杰.胃癌組織中CDX2表達(dá)及其與Ki67的關(guān)系分析[J].實(shí)用癌癥雜志,2016.

[4]鐘佳伶.CCDC134、UCHL1基因與胃腸癌轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究[D].北京，協(xié)和醫(yī)學(xué)院,2012.