HPLC法測定茯珍兒科膠囊中茯苓酸含量

魏立華，陳蕓生

（1.南平市第二醫(yī)院，福建 南平354200；2.南平市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，福建 南平354200）

HPLC法測定茯珍兒科膠囊中茯苓酸含量

魏立華1，陳蕓生2

（1.南平市第二醫(yī)院，福建 南平354200；2.南平市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，福建 南平354200）

目的 建立高效液相色譜法測定茯珍兒科膠囊中茯苓酸含量。 方法 采用高效液相色譜法，色譜柱為Diamonsil C18柱（4.6×250 mm，5 μm）分析柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液，檢測波長為242 nm，流速為1.0 mL／min，進(jìn)樣量10 μL，柱溫為35℃。 結(jié)果 茯苓酸在5.05～30.75 μg／mL濃度范圍呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系（r＝0.9999），平均加樣回收率為98.2%，RSD為1.45%。 結(jié)論 本方法簡便、快速、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于茯珍兒科膠囊的質(zhì)量控制。

茯珍兒科膠囊；茯苓酸；高效液相色譜法

茯珍兒科類制劑在兒科中應(yīng)用較為廣泛，在臨床上用于治療兒童痰濕驚厥、嘔吐腹瀉以及腸痛納呆等多種病癥，功能清邪退熱、定驚除痰。茯珍兒科膠囊是多種中藥提取相應(yīng)成分進(jìn)行加工制成，主要含茯苓、竹黃、牛黃等6種中藥成分，其中茯苓是君藥，而茯苓中的重要有效成分是茯苓酸［2］。茯珍兒科膠囊中茯苓酸的含量對(duì)于該藥物功效有著重要的影響，因此，制藥過程中確保茯苓酸的含量是關(guān)鍵環(huán)節(jié)。為了定量控制茯珍兒科膠囊中茯苓酸的含量，進(jìn)而確定方中茯苓的質(zhì)量，以保證茯珍兒科膠囊治療效果的發(fā)揮，本實(shí)驗(yàn)選用高效液相色譜法測定茯珍兒科膠囊中茯苓酸的含量。

1 儀器和試藥

高效液相色譜儀E2695（美國 Waters公司）；茯珍兒科膠囊（福建省南平市第二醫(yī)院提供）；茯苓酸對(duì)照品（批號(hào)：20110501，含量 99.1%，成都瑞芬思生物科技有限公司）。主要試劑包括甲醇、乙腈、二次蒸餾水、磷酸。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18柱色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；選用乙晴－0.1%磷酸溶液作為流動(dòng)相；以242 nm為茯苓酸的檢測波長；色譜柱溫度保持在35℃；保持流速1.0 mL／min；每次進(jìn)樣量均為10 μL。

2.2 對(duì)照品溶液制備 精密稱量茯苓酸對(duì)照品，以甲醇為溶劑配制15 μg／mL茯苓酸溶液，作為茯苓酸對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 精密稱量茯珍兒科膠囊約3 g，在100 mL試劑瓶中以50 mL甲醇為溶劑溶解；稱定重量，超聲處理45 min放冷；再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻過濾；取續(xù)濾液25 mL于分液漏斗中，加入2%氯化鈉溶液25 mL，采用環(huán)己烷對(duì)樣品進(jìn)行提?。还蔡崛?次，每次30 mL，合并環(huán)己烷液，蒸干；殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，備用。

2.4 線性關(guān)系考察 精密吸取上述制備的茯苓酸對(duì)照品溶液 2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分別置 10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻；分別精密吸取上述5份溶液10 μL，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積；以進(jìn)樣濃度、峰面積分別為橫、縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：

茯苓酸 Y＝10512X＋1650.5，r＝0．999 9

結(jié)果表明：茯苓酸在 5.05～30.75 μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 μL，上述色譜條件下，分別在溶液制備后的0、2、4、6、8 h進(jìn)樣測定，以峰面積計(jì)算RSD為0.94%。測定結(jié)果表明：供試品溶液制備后8 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)考察

2.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取茯苓酸對(duì)照品溶液（C＝11.1 μg·mL-1）10 μL，在上述色譜條件下，連續(xù)重復(fù)測定6次，以峰面積計(jì)算RSD為0.53%，表明本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)考察 分別精密稱取同批號(hào)茯珍兒科膠囊6份，按照供試品溶液的制備方法測定并計(jì)算茯苓酸的含量，結(jié)果見表3，提示該測定方法重復(fù)性較好。

表2 精密度試驗(yàn)

表3 重復(fù)性試驗(yàn)

2.8 回收率試驗(yàn) 分別精密稱取同批號(hào)茯珍兒科膠囊 2 g（其中茯苓酸含量約為 0.058 9 mg／g），9 份，精密加入茯苓酸對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5 mL，平行操作3份，按含量測定法測得峰面積，并計(jì)算含量，計(jì)算回收率。見表4。

表4 回收率試驗(yàn)

2.9 樣品含量測定 取3批茯珍兒科膠囊（批號(hào)為 170 521、170 603、170 625），分別按照供試品溶液的制備方法測定并計(jì)算茯苓酸的含量，含量分別為0.086 5、0.090 2、0.088 3 mg·g-1，RSD 為 1.36%。

3 討 論

茯珍兒科膠囊作為兒科用藥，其中茯苓為君藥，發(fā)揮諸多功效。既往研究提示茯苓中主要的化學(xué)成分有兩種，即多糖類成分和三萜類成分［4-5］。既往在茯苓相關(guān)成分含量測定上，主要是研究其三萜類成分，或其單一成分測定或其多個(gè)成分測定，如茯苓酸、去氫土莫酸等，其中以茯苓酸的含量測定相關(guān)報(bào)道最多［6］。本研究選擇檢測獲珍兒科膠囊中的茯苓酸屬于三萜類中的主要有效成分，具有顯著的抗炎、調(diào)節(jié)免疫功能、利尿、抗腫瘤的藥理作用，其含量的測定對(duì)于保障茯珍兒科膠囊的藥物功效有著重要的意義。

當(dāng)前測定中藥三萜類成分的方法主要有光譜學(xué)、生物學(xué)以及色譜學(xué)等，尤以高效液相色譜法為最常用的方法，故本研究建立高效液相色譜法測定茯珍兒科膠囊中的茯苓酸含量。首先根據(jù)茯苓酸的最大紫外吸收確定檢測波長為242 nm；再考察甲醇和乙醇兩種溶劑的提取效率，結(jié)合茯苓有效成分含量測定的既往文獻(xiàn)，確定以甲醇為提取溶劑；同步考核超聲30、45、60 min提取情況，結(jié)果表明超聲45 min提取已完全。其次流動(dòng)相的選擇：流動(dòng)相是影響高效液相色譜（HPLC）性能的重要因素，最初選擇甲醇、乙晴、磷酸等進(jìn)行實(shí)驗(yàn)選擇最合適的流動(dòng)相。先采用甲醇-乙晴-磷酸、乙晴-水以及乙晴-0.2%磷酸作為流動(dòng)相進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其基線不穩(wěn)定，導(dǎo)致茯苓酸色譜峰值不明顯，容易導(dǎo)致測定的峰面積存在較大誤差；后根據(jù)流動(dòng)相溶劑的極性，將乙晴與磷酸溶液調(diào)整一定的混合溶劑比例，最終選用乙晴-0.1%磷酸溶液為流動(dòng)相，具有較平穩(wěn)的基線，可明顯分離出茯苓酸的吸收峰與雜質(zhì)峰，在色譜上呈現(xiàn)明顯波峰。此外，該流動(dòng)相的保留時(shí)間與測定分析時(shí)間相匹配。

［1］ 趙英博，徐斌，昝俊峰，等.不同產(chǎn)地茯苓中茯苓酸含量的比較研究［J］.中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（7）：41-42.

［2］ 沈玉萍，李軍，賈曉斌．中藥茯苓化學(xué)成分的研究進(jìn)展［J］．南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，28（3）：297-300．

［3］ 于世林.高效液相色譜方法及應(yīng)用［M］.2版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［4］ 程水明，桂元，沈思，等．茯苓皮三萜類物質(zhì)抗氧化活性研究［J］．食品科學(xué)，2011，32（9）：27-30．

［5］ 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2010年版（二部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［6］ 楊鵬飛.桂枝茯苓膠囊及其單味藥獲苓化學(xué)成分和生物活性研究［D］.北京：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，2012：3215-3218.

R284.1

A

1000-338X（2017）06-0035-02

2017-10-09

魏立華（1971—），女，主管中藥師，主要從事醫(yī)院臨床藥劑工作。