高溶氧對(duì)西伯利亞鱘幼魚非特異性免疫指標(biāo)的影響

王曉雯，朱 華，馬國慶

(北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所，漁業(yè)生物技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100068)

高溶氧對(duì)西伯利亞鱘幼魚非特異性免疫指標(biāo)的影響

王曉雯，朱 華*，馬國慶

(北京市水產(chǎn)科學(xué)研究所，漁業(yè)生物技術(shù)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100068)

【目的】為揭示高溶解氧對(duì)西伯利亞鱘幼魚非特異性免疫指標(biāo)的影響?！痉椒ā糠謩e設(shè)置了5個(gè)溶氧水平組(為6、8、10、12、14mg/L)，在養(yǎng)殖試驗(yàn)第100d分析了西伯利亞鱘外周血白細(xì)胞的吞噬活力、脾臟細(xì)胞吞噬活性、血清與黏液中溶菌酶活性、堿性磷酸酶活性和酸性磷酸酶活性以及血清殺菌活力?！窘Y(jié)果】西伯利亞鱘的血清殺菌活力、脾臟巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力和外周血白細(xì)胞吞噬活力分別在10、10、12mg/L下達(dá)到峰值，而肝臟酸性磷酸酶活力無明顯差異，8、10、12、14mg/L下鱘魚堿性磷酸酶活力略微低于6mg/L組?！窘Y(jié)論】在6～12mg/L范圍內(nèi)適當(dāng)提高溶解氧含量可刺激西伯利亞鱘魚血清和脾臟的殺菌活力，但肝臟中堿性磷酸酶參與的免疫防御功能受到略微影響。

西伯利亞鱘；高溶氧；吞噬活力；堿性磷酸酶；酸性磷酸酶；殺菌活力

西伯利亞鱘(Acipenser baeri)屬鱘科(Acipenseridae)，鱘屬(Acipenser)，屬于軟骨硬鱗類[1]，是我國引自歐洲的鱘魚種類，由于其食譜廣、易馴養(yǎng)、生長快[2]，現(xiàn)已成為我國常見的養(yǎng)殖品種，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和研究價(jià)值。近年來，我國逐漸開展了循環(huán)水工廠化養(yǎng)殖模式的研究，為追求高產(chǎn)，人們往往采取高密度養(yǎng)殖，傳統(tǒng)的充氧方式很難保證高密度養(yǎng)殖魚類的健康成長，生產(chǎn)中常用補(bǔ)充液氧的方式來維持水體較高溶解氧水平。

溶解氧是水產(chǎn)養(yǎng)殖的一個(gè)重要環(huán)境因子，水體溶解氧濃度直接關(guān)系到魚類的生存、生長和代謝水平[3]。目前已有一些研究表明高溶解氧可提高魚類的生長速度、調(diào)節(jié)魚類生理平衡[4-5]。但是在超飽和溶氧條件下產(chǎn)生的過多氧自由基(ROS)會(huì)攻擊生物細(xì)胞中蛋白質(zhì)、脂肪和核酸等細(xì)胞結(jié)構(gòu)及組織，導(dǎo)致機(jī)體損傷[6]。況新宇等[7]研究表明，高溶解氧可刺激西伯利亞鱘肝臟提高抗氧化應(yīng)激酶活力，短期內(nèi)肝臟功能受到一定影響，然而30d后魚體得到恢復(fù)。目前，有關(guān)溫度、免疫添加劑和養(yǎng)殖密度等對(duì)鱘魚的免疫力影響的研究比較多[8-14]，但高溶解氧對(duì)鱘魚免疫力影響的研究尚無報(bào)道。為探究高溶解氧的養(yǎng)殖條件是否對(duì)鱘魚免疫力造成影響，本文以西伯利亞鱘(Acipenser baeri)作為試驗(yàn)對(duì)象，從非特異性免疫途徑，研究不同溶解氧濃度對(duì)魚體的影響，從而為環(huán)境因子對(duì)魚類免疫機(jī)能的研究提供數(shù)據(jù)，并以期為鱘魚高密度養(yǎng)殖的進(jìn)一步發(fā)展提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)用魚及飼養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)用西伯利亞鱘幼魚來自北京市十渡鱘魚繁殖基地，運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室后，在循環(huán)水系統(tǒng)中暫養(yǎng)7d，水溫(20±2)℃。養(yǎng)殖容器為藍(lán)色平底圓柱形PP水槽，內(nèi)徑約1m，水深0.5m。其初始體長(L)和體重(W)分別為(17.9±0.36)cm 和(20.83±0.21)g，挑選規(guī)格統(tǒng)一的健康西伯利亞鱘進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

實(shí)驗(yàn)用水為曝氣和過濾后的自來水。實(shí)驗(yàn)期間，水溫為(18±4)℃，每天投喂3次，日投餌量為魚體質(zhì)量的2％，定期排污。取樣前24h內(nèi)停止投喂。

1.2 飼養(yǎng)試驗(yàn)

飼養(yǎng)試驗(yàn)分4組，分別為對(duì)照組A，高溶氧組B、C、D，每組3個(gè)平行，每平行100尾。試驗(yàn)在一個(gè)循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行，投喂方式、飼養(yǎng)管理相同。循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)氣泵增氧，溶氧達(dá)(6.2±0.3)mg/L。試驗(yàn)期間，高溶氧組用納米氣盤充入液氧，通過調(diào)節(jié)每個(gè)氣盤的閥門，控制 B組缸內(nèi)均溶氧(8.5±0.3)mg/L；C組缸內(nèi)均溶氧(10.35±0.4)mg/L；D組缸內(nèi)均溶氧(12.2±0.5)mg/L。試驗(yàn)期間水溫(18±1)℃。飼養(yǎng)試驗(yàn)共100d。在飼養(yǎng)結(jié)束時(shí)，每平行組隨機(jī)取3尾魚進(jìn)行樣品的采集。

1.3 樣品的提取和制備

血清的制備：每平行組每次隨機(jī)取2尾魚，用1mL無菌注射器于西伯利亞鱘尾靜脈采集血液，置于無菌離心管，室溫放置1h后4℃過夜，4℃ 2 000×g離心10min后分別取等量上清混合，保存于-80℃待用。

黏液的制備：將取過血的魚用潔凈自來水沖洗魚體表，再用0.9％滅菌生理鹽水洗滌2次，用吸水紙吸取多余水分。用玻片從魚體鰓蓋后緣向后刮取體表黏液，置于1.5mL的離心管，加入等體積生理鹽水混勻，4℃下10 000×g離心20min，每組2尾等量上清液混合。-80℃保存?zhèn)溆茫瑓⒄枕n雯等[15]的方法。

外周血白細(xì)胞的分離：

采集血液后，加入到等體積的肝素鈉抗凝劑中，再加入等量的RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液(Hyclone，美國)，配成單細(xì)胞懸液后靜置1h。根據(jù)說明書，將細(xì)胞懸液緩慢加到已經(jīng)配置好的具有明顯分層的Percoll(Pharmacia，美國)不連續(xù)密度梯度離心管中，4℃，840×g離心30min，收集不同濃度Percoll界面處的白細(xì)胞層，用PBS重懸后離心(4℃，640×g，5min)，洗滌3次備用。

脾臟組織細(xì)胞的獲?。?/p>

用75％的酒精沖洗西伯利亞鱘體表，然后解剖，取出脾臟，用PBS沖洗3次，剪碎組織，用細(xì)胞篩過濾，濾過的細(xì)胞再加入500μL 0.9％生理鹽水沖洗，4℃，500×g離心5min，棄上清，加入500μLRMPI1640細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，待用。

1.4 外周血白細(xì)胞吞噬活力

參照Zhang等[15，23]的方法，用PBS沖洗下在LB培養(yǎng)基上培養(yǎng)16h的嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)，在10 000×g下離心 5min，用RMPI1640培養(yǎng)基重懸。在65℃水浴滅活1h。將滅活的細(xì)菌加入溶有FITC(終濃度為100μg/mL)的二甲基亞砜(DMSO)溶液中，30℃孵育1h后用PBS洗5次，然后用RMPI1640培養(yǎng)基重懸調(diào)至濃度為1×108個(gè)/mL作為標(biāo)記的嗜水氣單胞菌懸液。取100μL FITC標(biāo)記好的菌液加入到1mL濃度為1×106個(gè)/mL的白細(xì)胞懸液中，混勻后于28℃孵育1h。將白細(xì)胞在500×g下離心10min，PBS洗滌3次，再加入1mL 0.125％臺(tái)盼藍(lán)孵育5min，淬滅胞外熒光。用PBS洗滌2～3次，用0.9％生理鹽水重懸細(xì)胞，上流式細(xì)胞儀(Partec，德國)分析。以不孵育FITC標(biāo)記細(xì)菌的西伯利亞鱘白細(xì)胞為對(duì)照首先在FSC和SSC二維點(diǎn)陣圖選取白細(xì)胞區(qū)域，然后再以FL1(FITC)直觀柱狀圖統(tǒng)計(jì)該區(qū)域FITC陽性(吞噬標(biāo)記嗜水氣單胞菌)的白細(xì)胞，每份樣品檢測10 000以上個(gè)白細(xì)胞，比較不同溶解氧含量試驗(yàn)組的FITC陽性白細(xì)胞數(shù)，以每1 000個(gè)白細(xì)胞吞噬嗜水氣單胞菌的個(gè)數(shù)表示白細(xì)胞吞噬活力，每組測3個(gè)平行，求平均值。

1.5 血清殺菌活力

LB液體培養(yǎng)基27℃培嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila，由上海海洋大學(xué)呂利群教授惠贈(zèng))，待菌液渾濁，于10 000r/min下離心1min，傾倒培養(yǎng)基，用0.85％生理鹽水將菌液調(diào)整到1×106/L制備細(xì)菌懸液。取200μL血清混合于200μL細(xì)菌懸液，28℃下溫育1h，取細(xì)菌和血清混合物涂在LB平板上，28℃下培養(yǎng)48h，計(jì)算各平板中細(xì)菌菌落數(shù)，以涂有0.85％生理鹽水的作為對(duì)照組，計(jì)算血清的殺菌百分率，殺菌率=(1-試驗(yàn)組菌落數(shù)/對(duì)照組菌落數(shù))×100％[16]。

1.6 血清溶菌酶活力

參照Hutchinson等[17]的方法，以0.75mg/mL的溶壁微球菌凍干粉為底物，用磷酸鉀鹽緩沖液(pH=6.4)作為底物懸液。取190μL預(yù)冷的細(xì)菌懸液加入酶標(biāo)板內(nèi)，并加入10μL待測樣品，混勻，于570nm處測定其OD值A(chǔ)0。之后于37℃溫育40min，取出后冷卻至室溫，測其吸光度值A(chǔ)。測定的溶菌酶活力為U=(A0-A)/A。每個(gè)樣品測3個(gè)平行。

1.7 堿性磷酸酶活力、酸性磷酸酶活力

試驗(yàn)中各試驗(yàn)組堿性磷酸酶和酸性磷酸酶活力均采用南京建成生物工程技術(shù)研究所提供的試劑盒進(jìn)行測定。

1.8 脾臟巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)測定

解剖魚，取出脾臟，用PBS沖洗后，剪碎，用100目細(xì)胞篩過濾，加入500μL細(xì)胞培養(yǎng)液l RMPI1640，4℃，500×g下離心 5min，棄去上清，再加入 500μL細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

參照文獻(xiàn)[18]，采用NBT法測定呼吸爆發(fā)。將細(xì)胞懸液調(diào)為1×107cells/mL，在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上每孔加入100μL，每尾魚做3個(gè)平行，空白對(duì)照為加入100μL生理鹽水。將細(xì)胞培養(yǎng)板放入28℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1h，待細(xì)胞貼壁后棄掉培養(yǎng)液，每孔再加入 100μL NBT，繼續(xù)培養(yǎng) 1h，再棄掉 NBT，用 PBS沖洗后，加入75％乙醇固定10min，棄掉乙醇，加入120μL KCL(2 mol/L)和140Μl DMSO(1mg/mL)，混勻后，用酶標(biāo)儀(BioTek，美國)600nm吸光值。

1.9 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值(M)±標(biāo)準(zhǔn)差(SD)表示，利用SPSS17.0軟件的ANOVA單因素方差分析，對(duì)不同組織間均值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異分析。首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn)，如果ANOVA分析有意，再用Duncan進(jìn)行兩兩比較。顯著性水平設(shè)為P＜0.05。

2 結(jié)果

2.1 不同溶解氧下西伯利亞鱘的外周血白細(xì)胞吞噬活力

通過流式細(xì)胞術(shù)檢測西伯利亞鱘幼魚的外周血白細(xì)胞吞噬活力，如圖1(a)和圖1(b)所示，圖1(a)是白細(xì)胞的FSC-SSC圖，去掉信號(hào)感染的選擇Q2區(qū)域細(xì)胞進(jìn)行綠色熒光的檢測，圖1(b)中FL1 subject顯示吞噬掉細(xì)菌的細(xì)胞。各組FITC陽性白細(xì)胞數(shù)量統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果見圖2。可知，在溶解氧含量為12mg/L，白細(xì)胞吞噬活力達(dá)到峰值，且在溶解氧含量為10、14mg/L相比對(duì)照組，6、8mg/L組顯著升高(P<0.05)，而在溶解氧含量12mg/L下的白細(xì)胞吞噬活力具極顯著差異(P>0.05)。表明，溶解氧的升高，促進(jìn)白細(xì)胞的吞噬作用，但升至14mg/L，白細(xì)胞吞噬活力有所降低。

2.2 不同溶解氧下西伯利亞鱘的血清殺菌活力

5種溶氧條件下，西伯利亞鱘幼魚血清殺菌活力結(jié)果如圖3所示。8mg/L相比其余各組達(dá)到最大值(P<0.05)，而溶解氧含量再升高到12、14mg/L，血清殺菌活力下降，與溶解氧含量6mg/L的活力相一致。

2.3 不同溶解氧下西伯利亞鱘的血清溶菌酶活力

在高溶氧含量下西伯利亞鱘幼魚血清溶菌酶活力水平也相比6mg/L下的活力高，但無顯著性差異(P>0.05)，如圖4所示。

2.4 不同溶解氧含量下西伯利亞鱘肝臟堿性磷酸酶活力、酸性磷酸酶活力

在不同溶解氧含量下，西伯利亞鱘幼魚肝臟堿性磷酸酶活力(見圖5)和酸性磷酸酶活力(見圖6)的差異大體一致，均低于6mg/L組。酸性磷酸酶活力差異不顯著，堿性磷酸酶活力的差異具有顯著差異，這暗示西伯利亞鱘可能在高氧狀態(tài)下機(jī)體生命代謝受到一定的影響。

2.5 不同溶解氧含量下西伯利亞鱘脾臟巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力

西伯利亞鱘幼魚脾臟巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)活動(dòng)在高氧組(8、10、12mg/L)均高于 6mg/L 組，并在10mg/L溶氧含量下達(dá)到峰值(光密度值0.124±0.035)，溶解氧含量14mg/L組巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)活動(dòng)降到最低值，顯著低于其余各組(P<0.05)，可見14mg/L的溶氧含量影響到魚體巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活動(dòng)。不同溶解氧含量西伯利亞鱘脾臟巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力如圖7所示。

圖1 西伯利亞鱘外周血白細(xì)胞吞噬FITC標(biāo)記嗜水氣單胞菌流式細(xì)胞術(shù)檢測圖Figure 1 Detection figure of FITC-labled A.hydrophila phagosytized by sturgeon leukocyte

圖2 不同溶解氧含量西伯利亞鱘幼魚外周血白細(xì)胞吞噬活力Figure 2 Phagocytic activity of leucocytes of sturgeon in different DO group

圖3 不同溶解氧下西伯利亞鱘的血清殺菌活力Figure 3 Serum bactericidal activity of sturgeon in different DO group

圖4 不同溶解氧下西伯利亞鱘的血清溶菌酶活力Figure 4 Lysozyme activity of serum in sturgeon under different DO

3 討論

魚類屬于低等脊椎動(dòng)物，具有特異性和非特異 性免疫功能，以保護(hù)魚體免受病原侵襲。病原進(jìn)入機(jī)體后，首先接觸的是魚體的體表黏液細(xì)胞、內(nèi)皮組織和吞噬細(xì)胞，這些構(gòu)成了魚體內(nèi)非特異性免疫應(yīng)答的第一道防線[15]，在防御病原入侵及清除體內(nèi)病原過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。影響魚體免疫功能的因素很多，如個(gè)體遺傳發(fā)育、溫度[10]、溶解氧含量[19]、鹽度脅迫[20]等。已有報(bào)道表明高水溫對(duì)雜交鱘的非特異性免疫有顯著的抑制作用，同樣慢性低氧脅迫抑制黃顙魚的免疫機(jī)能，嚴(yán)重抑制巨噬細(xì)胞的活性。本文探究了高氧對(duì)西伯利亞鱘幼魚非特異性免疫機(jī)能的影響，研究結(jié)果顯示高氧脅迫下，高溶解氧組的西伯利亞鱘血清溶菌酶活力高于低溶氧組，而血清殺菌活力和巨噬細(xì)胞活力均在10mg/L組達(dá)到峰值，而更高的解氧含量(14mg/L)導(dǎo)致肝臟的代謝受到一定影響。

圖5 不同溶解氧含量西伯利亞鱘肝臟酸性磷酸酶活力Figure 5 ACP activity of liver in sturgeon under different DO

圖6 不同溶解氧含量西伯利亞鱘肝臟堿性磷酸酶活力Figure 6 AKP activity of liver in sturgeon under different DO

圖7 不同溶解氧含量西伯利亞鱘脾臟巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力Figure 7 Respiratory burst of splenic macrophage in sturgeon under different DO

巨噬細(xì)胞和外周血白細(xì)胞是重要的免疫細(xì)胞，對(duì)侵入機(jī)體的異物及衰老死亡的細(xì)胞具有吞噬功能，發(fā)揮非特異性免疫功能。巨噬細(xì)胞可依賴其分泌的細(xì)胞因子發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用；白細(xì)胞，可吞噬異物產(chǎn)生抗體，在機(jī)體損傷治愈、抵抗病原入侵起到重要作用[15]。外周血白細(xì)胞吞噬活力是衡量魚類非特異性免疫力高低的一個(gè)重要指標(biāo)，吞噬作用是清除侵入魚體的病原的主要途徑。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，12mg/L溶解氧組的外周血白細(xì)胞吞噬活力高于其余各組，14mg/L組反而較低。提示過高的溶解氧含量下，西伯利亞鱘的外周血參與的免疫過程受到一定抑制。

活化的脾臟巨噬細(xì)胞內(nèi)部會(huì)產(chǎn)生顯著的有氧代謝爆發(fā)，電子發(fā)生轉(zhuǎn)移，最終產(chǎn)生豐富的反應(yīng)性氧中間體，此過程為氧呼吸爆發(fā)。這些氧中間體均具有顯著的化學(xué)反應(yīng)性，作用靶分子范圍廣泛，是最有效的抗菌物質(zhì)。本文用NBT法檢測魚體的脾臟巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力，結(jié)果顯示，隨著溶解氧含量的升高，魚體的脾臟巨噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)活力逐漸升高，在溶氧為10mg/L時(shí)達(dá)到峰值，并且在溶氧14mg/L的活力顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，表明溶解氧含量在一定范圍的升高可促進(jìn)鱘魚體內(nèi)脾臟巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力，促進(jìn)非特異性免疫，然而溶解氧含量升高至14mg/L時(shí)脾臟巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力下降。

溶菌酶是一種專門作用于微生物細(xì)胞壁的水解酶，又稱為N-乙酰基胞壁酰水解酶，其功能是水解G+菌細(xì)胞壁上的乙酞氨基鍵，使進(jìn)入體內(nèi)的細(xì)菌細(xì)胞壁溶解[21]，廣泛存在于魚類的血清、皮膚黏液和組織器官當(dāng)中，作為魚類的非特異性免疫物質(zhì)之一，在魚體防御系統(tǒng)中扮演著重要角色。本試驗(yàn)中，西伯利亞鱘在養(yǎng)殖100d時(shí)，溶解氧高的組血清溶菌酶活力高于溶解氧含量低的組，但無顯著差異(P>0.05)。這與在黃顙魚的不同溶氧試驗(yàn)中4個(gè)溶解氧濃度處理組的溶菌酶活力變化趨勢不一致，但兩個(gè)試驗(yàn)中不同溶氧組血清溶菌酶活力均無顯著差異[19]。經(jīng)過100d不同溶氧下的養(yǎng)殖，各組血清溶菌酶活力無明顯差異，表示溶菌酶不可作為鱘魚對(duì)長期高氧脅迫的應(yīng)激信號(hào)。

魚體肝臟堿性磷酸酶、酸性磷酸酶均直接在生物體內(nèi)參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移代謝，是機(jī)體生長代謝、保持內(nèi)環(huán)境溫度以維持機(jī)體健康所必需的酶。堿性磷酸酶參與機(jī)體免疫預(yù)防主要機(jī)制是催化有機(jī)磷酸酯水解，釋放磷酸離子，可以改變細(xì)菌表面結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)其異己性，從而被體內(nèi)吞噬細(xì)胞吞噬和降解。酸性磷酸酶是動(dòng)物體內(nèi)巨噬細(xì)胞溶菌酶的標(biāo)志酶，在體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝，主要存在于肝臟、脾臟和紅細(xì)胞，溶酶體的水解作用是機(jī)體攻擊異物的主要機(jī)制之一[22]。酸性磷酸酶和堿性磷酸酶都受著營養(yǎng)狀況、環(huán)境變化及疾病的影響，當(dāng)免疫水平降低或增高時(shí)它們也會(huì)發(fā)生變化。本實(shí)驗(yàn)中西伯利亞鱘肝臟酸性磷酸酶活力在不同溶解氧條件下未發(fā)生明顯變化，堿性磷酸酶活力在溶氧含量8、10、12、14mg/L的均明顯低于溶氧6mg/L的。表明西伯利亞鱘在高氧脅迫下的代謝能力有所減弱或者免疫調(diào)節(jié)能力有所下降。

綜上所述，在不同溶解氧含量的條件下，西伯利亞鱘的血清殺菌活力、脾臟巨噬細(xì)胞的呼吸爆發(fā)活力的最高值均出現(xiàn)在10mg/L組，外周血白細(xì)胞吞噬活力的最高值出現(xiàn)在12mg/L，而14mg/L組的各項(xiàng)非特異性免疫指標(biāo)均出現(xiàn)降低?？梢娨欢ǔ潭鹊靥岣呷芙庋鹾靠纱碳\魚血清和脾臟的殺菌活力。而肝臟酸性磷酸酶活力無明顯變化，堿性磷酸酶活力有略微下降，可見肝臟中堿性磷酸酶參與的免疫防御功能受到一些影響。

[1] 謝忠明，孫大江，王樹京，等.鱘魚養(yǎng)殖技術(shù)[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000：258-263.

[2] 曲秋芝，高艷麗.西伯利亞鱘的人工繁殖[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2005，12(4)：492-495.

[3] WEI L Z，ZHANG X M，HUANG G Q.Effects of limited dissolved oxygen supply on the growth and energy allocation of Juvenile Chinese Shrimp，F(xiàn)enneropenaeus chinensis[J].World Aquaculture Society，2009，40(4)：483-492.

[4] 張釗，李榮，郭惠，等.不同溶解氧水平對(duì)工廠化養(yǎng)殖大菱鲆生長及肌肉生化組分的影響[J].水產(chǎn)科學(xué)，2014，33(8)：520-523.

[5] 胡國宏，孫廣華，朱世成，等.低溶氧量對(duì)懷頭鲇呼吸代謝耗氧率的影響[J].動(dòng)物學(xué)雜志，2002，37(2)：46-48.

[6] FANG Y Z.Reactive oxygen species in organisms[C].FANG Y Z，ZHENG R L，Eds.Theory and application of free radical biology.Beijing：Science Press，2002：122-126

[7] 況新宇，王曉雯，朱華.高溶氧量對(duì)西伯利亞鱘抗氧化酶活力及肝臟損傷相關(guān)指標(biāo)的影響[J].水產(chǎn)科技情報(bào)，2016(4)：198-202.

[8] 田照輝，徐紹剛，王巍，等.急性熱應(yīng)激對(duì)西伯利亞鱘HSP70m RNA表達(dá)、血清皮質(zhì)醇和非特異性免疫的影響[J].水生生物學(xué)報(bào)，2013，37(2)：344-350.

[9] 白海文.溫度對(duì)施氏鱘幼魚生長、消化及免疫功能影響的研究[D].上海：上海海洋大學(xué)，2012.

[10] 王靜波，曹歡，王小亮，等.高水溫對(duì)雜交鱘主要免疫指標(biāo)的影響[J].大連水產(chǎn)學(xué)院學(xué)報(bào)，2015(5)：484-488.

[11] 宋超，牛翠娟，朱華.不同多糖對(duì)史氏鱘非特異性免疫反應(yīng)的影響[J].水生生物學(xué)報(bào)，2009，33(3)：455-460.

[12] 李莎，管敏，郭文韜，等.微生物制劑對(duì)中華鱘生長、消化酶及非特異性免疫酶活性的影響[J].水產(chǎn)學(xué)雜志，2014(1)：50-54.

[13] 劉紅柏，盧彤巖，張春燕，等.黃芪對(duì)史氏鱘抗氧化能力及免疫力的影響[J].大連海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，21(3)：231-235.

[14] 曹陽，李二超，陳立僑，等.養(yǎng)殖密度對(duì)俄羅斯鱘幼魚的生長、生理和免疫指標(biāo)的影響[J].水生生物學(xué)報(bào)，2014(5)：968-974.

[15] 韓雯，王秀華，王玉娟，等.皂角苷對(duì)大菱鲆非特異免疫的增強(qiáng)作用[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào)，2014，38(7)：999-1008.

[16] ZHANG J，CHEN L，SUN L.SmLMWPTP，a teleost low molecular weight protein tyrosine phosphatase，inhibits the immune response of peripheral blood leukocytes in a manner that depends on the conserved P-loop[J].Developmental&Comparative Immunology，2013，40(2)：103-111.

[17] 秦啟偉，吳灶和，周永燦，等.餌料維生素C對(duì)青石斑魚的非特異性免疫調(diào)節(jié)作用[J].熱帶海洋學(xué)報(bào)，2000，19(1)：58-63.

[18] HUTCHINSON T H，MANNING M J.Seasonal trends in serum lysozyme activity and total protein concentration in dab(Limanda limanda L)sampled from Lyme Bay，U.K.[J].Fish&Shellfish Immunology，1996，6(7)：473-482.

[19] SECOMBES C J.Isolation of salmonid macrophages and analysis of their killing activity[J].Techniques in Fish Immunology，1990：137-163.

[20] 沈凡，樊啟學(xué)，楊凱，等.不同溶氧條件下黃顙魚免疫機(jī)能及抗病力的研究[J].淡水漁業(yè)，2010，40(4)：44-49

[21] 王曉雯，朱華，況新宇，等.鹽度脅迫對(duì)雜交鱘生理及存活的影響[J].水產(chǎn)科學(xué)，2015(10)：597-602.

[22] GRINDE B，JOLLES P.Purification and characteristic of two lysozymes from rainbow trout(salmogairdneri)[J].European Journal of Biochemistry，1998(173)：169-273.

[23] 牟海津，江曉路，劉樹青，等.免疫多糖對(duì)櫛孔扇貝酸性磷酸酶、堿性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性的影響[J].青島海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，1999(3)：463-464.

Effects of Hyperoxia on Non-specific Immunology in Acipenser Baeri

WANG Xiao-wen，ZHU Hua，HU Hong-xia，MA Guo-qing
(1.Beijing Key Laboratory of Fishery Biotechnology，Beijing Fisheries Research Institute，Beijing 100068，China)

【Objective】Evaluate the effects of hyperoxia on non-specific immunity of juvenile sturgeon.【Methods】Acipenser baeri juveniles with body weight of(20.83±0.21)g were raised in different five dissolved oxygen level(6，8，10，12，14mg·L-1).The serum immune indicators，activities of lysozyme，ACP，AKP and antibacterial in mucus and serum were analyzed at 100d after the hyperoxia stress.【Results】The results showed that the antibacterial activity of serum，leukocytes phagocytic activity，respiratory burst of macrophage in spleen respectively reached maximum at group of 10mg·L-1，10mg·L-1，12mg·L-1.What’s more，the activity of ACP in liver of all groups did not have remarkable differences，and activities of AKP in 8，10，12，14mg·L-1group were slightly lower than in 6mg·L-1group.【Conclusion】In conc-lusion，some level of high dissolved oxygen within 6～12mg·L-1could promote the antibacterial activity of serum and spleen to a certain degree.However，the immune defense function of alkaline phosphatase in liver was influenced slightly.

Acipenser baer；hyperoxia；phagocytosis；alkaline phosphatase；acid phosphatase；antibacterial activity

S943

A

1000-2650(2017)01-0093-06

10.16036/j.issn.1000-2650.2017.01.014

2016-10-28

國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2015BAD25B01)；現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系北京市鱘魚、鮭鱒魚創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(SCGWZJ2 0161104)；中央引導(dǎo)地方科技發(fā)展專項(xiàng)(名優(yōu)水產(chǎn)良種選育與養(yǎng)殖技術(shù)推廣Z161100004516003)。

王曉雯，助理研究員，主要研究方向?yàn)樗a(chǎn)免疫生理，E-mail：wxw211@126.com。*責(zé)任作者：朱華，研究員，主要研究方向?yàn)樗a(chǎn)養(yǎng)殖與生理生態(tài)，E-mail：zhuhua@bjfishery.com。

(本文審稿：耿 毅；責(zé)任編輯：秦碧雯；英文審稿：劉益平)