高效液相色譜法在測(cè)定參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B含量中的應(yīng)用效果

王長(zhǎng)琴

（南京中醫(yī)藥大學(xué)連云港附屬醫(yī)院，江蘇 連云港 222000）

高效液相色譜法在測(cè)定參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B含量中的應(yīng)用效果

王長(zhǎng)琴

（南京中醫(yī)藥大學(xué)連云港附屬醫(yī)院，江蘇 連云港 222000）

目的：探討高效液相色譜法在測(cè)定參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B含量中的應(yīng)用效果。方法：選用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱（規(guī)格：4.6 mm×250 mm，5 μm）對(duì)參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B的含量進(jìn)行色譜分析，以乙腈－水（30∶70）作為流動(dòng)相。色譜儀參數(shù)設(shè)置：流速為1.00 mL·min-1，柱溫為35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，進(jìn)樣量為20.0 μL。分析結(jié)束后，觀察樣品中太子參環(huán)肽B的含量。結(jié)果：太子參環(huán)肽B在2.074～41.48 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9997），平均加樣回收率為100.6%(n=5),RSD為1.1%。結(jié)論：高效液相色譜法可作為參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B含量的質(zhì)控與評(píng)價(jià)方法。

參芪麻蓉湯；高效液相色譜法；太子參環(huán)肽B

參芪麻蓉協(xié)定方是南京中醫(yī)藥大學(xué)連云港附屬醫(yī)院的特色方劑。此方由太子參、黃芪、火麻仁、肉蓯蓉等組成，具有良好的益氣養(yǎng)血、潤(rùn)腸通便的功效。太子參為方中君藥，其主要活性成分為太子參環(huán)肽B[1-2]。本研究采用高效液相色譜法對(duì)參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B的含量進(jìn)行測(cè)定，旨在探討該方法在測(cè)定參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B含量中的應(yīng)用效果。

1 儀器與試劑

1.1 檢測(cè)儀器

本研究所用的檢測(cè)儀器主要包括：Agilent 1200液相色譜儀；Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱（規(guī)格：4.6 mm×250 mm，5 μm）；Agilent 1200紫外檢測(cè)器；BP211D型電子天平（由德國(guó)賽多利斯天平有限公司生產(chǎn)，d=0.01 mg）；KQ-600DV型數(shù)控超聲波清洗器（由昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)）。

1.2 檢測(cè)試劑

本研究所用的檢測(cè)試劑主要包括：太子參環(huán)肽B對(duì)照品（由武漢天植生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：CFN90627，純度：≥98%）；參芪麻蓉協(xié)定方（院內(nèi)配方）；乙腈(色譜純，由美國(guó)Fisher公司生產(chǎn))。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選用Agilent Zorbax Eclipse XDB-C18色譜柱（規(guī)格：4.6 mm×250 mm，5 μm）對(duì)參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B的含量進(jìn)行色譜分析，以乙腈－水（30∶70）作為流動(dòng)相。色譜儀參數(shù)設(shè)置：流速為1.00 mL·min-1，柱溫為35 ℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm，進(jìn)樣量為20.0 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備 精密稱取太子參環(huán)肽B對(duì)照品10.37 mg，置于10 mL的量瓶中，加甲醇對(duì)其進(jìn)行溶解，并將其稀釋至刻度線，搖勻后作為對(duì)照品儲(chǔ)備液（濃度為1.037 mg·mL-1）待用。

2.2.2 供試品溶液的制備 取參芪麻蓉協(xié)定方235 g，加水200 mL，煎煮3次后合并濾液并濃縮至250 mL。取濃縮液20 mL，用30 mL的甲醇對(duì)其進(jìn)行提取，重復(fù)提取3次后合并提取液。旋蒸回收提取液至溶劑揮發(fā)完全。用甲醇溶解殘?jiān)?，并將其轉(zhuǎn)移至10 mL的量瓶中，定容至刻度，搖勻即得。

2.3 線性關(guān)系的考察

精密吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液1 mL，置于25 mL的量瓶中，用甲醇溶液定容至刻度并將其搖勻。精密吸取1 μL、2 μL、4 μL、8 μL、20 μL的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，并將其注入液相色譜儀中，測(cè)定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。所得線性回歸方程為：Y＝41.962X+5.957，r=0.9997。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，太子參環(huán)肽B在2.074～41.48 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.4 精密度實(shí)驗(yàn)

精密吸取同一份供試品溶液20 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得峰面積的RSD為0.74%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.5 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一份樣品5份，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定峰面積并計(jì)算其中太子參環(huán)肽B的含量，然后以太子參環(huán)肽B的含量計(jì)算RSD。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：RSD為0.86%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)具有可重復(fù)性。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一份樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，分別于制備后0 h、2 h、4 h、8 h、16 h、32 h測(cè)定峰面積。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：峰面積的RSD為1.68%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明供試品溶液在制備后32 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取同一份樣品5份（各1.0 g），加入一定量的對(duì)照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定太子參環(huán)肽B的回收率與RSD。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，太子參環(huán)肽 B的平均加樣回收率為100.6%(n=5),RSD為1.1%。詳見表1。

表1 太子參環(huán)肽B加樣回收試驗(yàn)結(jié)果的分析(n=5)

2.8 樣品測(cè)定

精密吸取供試品溶液20.0 μL，注入液相色譜儀中，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，采用外標(biāo)法對(duì)供試品溶液中太子參環(huán)肽B的含量進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)線性關(guān)系計(jì)算樣品中太子參環(huán)肽B的含量為32.663 μg/μL。詳見圖1。

圖1：供試品溶液（參芪麻蓉協(xié)定方溶液）的HPLC圖1太子參環(huán)肽B

3 討論

參芪麻蓉協(xié)定方是南京中醫(yī)藥大學(xué)連云港附屬醫(yī)院研制的特色方劑，適用于治療氣血兩虧、腸燥津虧型慢性功能性便秘。此方由太子參、黃芪、當(dāng)歸、火麻仁、肉蓯蓉、桃仁、石斛、陳皮、枳殼等藥物組成。方中的太子參味甘，微苦，性平，可入脾經(jīng)肺經(jīng)，具有益氣健脾、生津潤(rùn)肺的功效；黃芪和當(dāng)歸味甘，性溫，二者共用可氣血并補(bǔ)；火麻仁、肉蓯蓉、桃仁味甘，質(zhì)潤(rùn)，三者共用可潤(rùn)腸通便；石斛可養(yǎng)陰生津、增水行舟；陳皮、枳殼可行氣導(dǎo)滯。上述諸藥合用可共奏益氣補(bǔ)血、潤(rùn)腸通便之功。有研究表明[3-4]，太子參的主要活性成分為太子參環(huán)肽B。廖芳平[5]等在臨床研究中發(fā)現(xiàn)，太子參在不同柱溫條件下的HPLC 圖譜無明顯差異。在本次研究中，筆者采用高效液相色譜法對(duì)參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B的含量進(jìn)行測(cè)定。研究結(jié)果顯示，太子參環(huán)肽B在2.074～41.48 μg/mL范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.9997），平均加樣回收率為100.6%(n=5),RSD為1.1%。

綜上所述，高效液相色譜法具有操作簡(jiǎn)單、實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，可作為參芪麻蓉協(xié)定方中太子參環(huán)肽B含量的質(zhì)控與評(píng)價(jià)方法。

[1] 徐雪琴,龍全江,趙劍.太子參化學(xué)成分、藥理作用與產(chǎn)地加工技術(shù)研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2014,28(4): 73-75.

[2] 王媚,宋建平,韓樂,等.太子參環(huán)肽B含量分析及其動(dòng)態(tài)研究[J].中藥材,2010,33(8):1225-1227.

[3] 韓怡,巢建國(guó),谷巍,等.不同產(chǎn)地太子參環(huán)肽B含量測(cè)定[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2012,26(5):69-71.

[4] 楊昌貴,周濤,肖承鴻,等.不同種源太子參生物量與太子參環(huán)肽B含量的分析[J].貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2014,36(1):14-16.

[5] 廖芳平,吳錦忠,陳劍鋒,等. 柘榮太子參HPLC指紋圖譜的研究[J].中國(guó)野生植物資源,2006,25(5):39-43.

R917

B

2095-7629-（2017）20-0153-02

王長(zhǎng)琴，女，1986年1月出生，漢族，江蘇連云港人，本科學(xué)歷，學(xué)士學(xué)位，主管中藥師，主要從事中藥學(xué)相關(guān)工作