復方中藥對奶?；厝樾Ч懊谌橄嚓P(guān)因子的影響

肖勁邦，姜思汛，巫曉峰，鄧俊良，左之才，曹隨忠，余樹民，朱潁琨，錢柏霖，沈留紅

（四川農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，動物疫病與人類健康四川省重點實驗室/奶牛疾病研究中心，成都 611130）

復方中藥對奶牛回乳效果及泌乳相關(guān)因子的影響

肖勁邦，姜思汛，巫曉峰，鄧俊良，左之才，曹隨忠，余樹民，朱潁琨，錢柏霖，沈留紅*

（四川農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院，動物疫病與人類健康四川省重點實驗室/奶牛疾病研究中心，成都 611130）

【目的】探究復方中藥對奶?；厝樾Ч盎厝槠谀膛Ｑ迕谌橄嚓P(guān)因子胰島素樣生長因子1（IGF-1）、信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子5（STAT5）和轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）含量的影響?！痉椒ā窟x取規(guī)模化奶牛場妊娠后期、即將干乳、產(chǎn)奶量為（15.42±0.71）kg的的健康奶牛80頭。隨機分為A、B、C、D組，每組20頭，采用逐漸干奶法回乳，回乳開始當天記為第0天，A組為對照組，不飼喂復方中藥，B、C、D組均從回乳第1天開始，每日上午8:00分別飼喂復方中藥400、500、600 g，回乳完成后停止飼喂復方中藥。分別采集回乳期奶牛第0、1、3、5、7、9和11天尾靜脈血，并記錄奶牛單日產(chǎn)奶量，ELISA法檢測回乳期奶牛血清IGF-1、STAT5和TGF-β1含量?！窘Y(jié)果】回乳期各組奶牛產(chǎn)奶量均隨時間推移降低，A、B、C、D組回乳時間分別為11、7、5、5 d。在奶?；厝槠?，各組奶牛血清IGF-1和STAT5含量均隨時間推移呈下降趨勢，并在回乳期后回升，而各組奶牛血清TGF-β1含量均呈上升趨勢，并在回乳期后下降；回乳期奶牛產(chǎn)奶量與IGF-1和STAT5含量均分別呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），與TGF-β1含量呈極顯著負相關(guān)（P＜0.01）；IGF-1與 STAT5含量呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），而 TGF-β1與 IGF-1、STAT5含量分別呈極顯著負相關(guān)（P＜0.01）。【結(jié)論】復方中藥能明顯促進回乳期奶?；厝?，飼喂500 g/日即可達到最佳回乳效果。在奶?；厝槠冢琁GF-1和STAT5是奶?；厝榈呢撜{(diào)控因子，而TGF-β1是奶牛回乳的正調(diào)控因子。

奶牛；復方中藥；轉(zhuǎn)化生長因子β1；信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子5；胰島素樣生長因子1

泌乳相關(guān)內(nèi)分泌因子對哺乳動物生長、發(fā)育、泌乳等過程中的激素調(diào)控，具有不可替代的作用。目前研究較多的內(nèi)分泌細胞因子主要有胰島素樣生長因子 1（Insulin-like growth factor 1，IGF-1）、轉(zhuǎn)化生長因子 β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）和信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子5（signal transduction and transcriptional activation factor of 5，STAT5）等[1]，它們參與調(diào)控雌激素（estrogen，E）、孕酮（progesterone，P4）、催乳素（prolactin，PRL）、胰島素（insulin，INS）、腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocortical，ACTH)和生長激素（growth hormone，GH）等生殖激素[2-3]，并與之共同形成乳腺發(fā)育和泌乳的調(diào)控網(wǎng)絡。目前運用復方中藥對人和小鼠等動物催乳或回乳的研究已有報道[4-5]，并顯示均與泌乳激素及因子呈一定相關(guān)性[6-7]。奶牛經(jīng)過泌乳期，機體消耗嚴重，需要通過干乳期恢復自身體質(zhì)及更新乳腺組織，為下一個泌乳期做充分準備，但傳統(tǒng)回乳方式效果差，易產(chǎn)生乳房炎、流產(chǎn)和抗生素殘留等副作用[8]，因此，回乳復方中藥在奶?；厝槠诘倪\用有著較廣闊的研究前景[9]。但目前還未見復方中藥對回乳期奶牛泌乳激素、因子、產(chǎn)奶量及回乳時間等影響的研究報道。所以，本研究旨在探究復方中藥對回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1和STAT5含量的影響，為進一步研究復方中藥對回乳期奶牛泌乳相關(guān)因子的調(diào)控機理，以及為尋求更安全、有效的回乳技術(shù)措施，改進奶?；厝榉椒?，降低回乳期奶牛乳房炎發(fā)生率提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗動物

選擇四川省某規(guī)?；膛霭敕忾]統(tǒng)一舍飼，體重（582±41）kg、2～4胎中國荷斯坦奶牛 150頭。從中選取即將進入回乳期，體況良好，健康，乳房、乳汁均正常，產(chǎn)奶量為（15.42±0.71）kg的妊娠后期奶牛80頭。隨機分為A、B、C、D組，每組20頭。各組均采用逐漸干奶法進行回乳，回乳當天記為第0天，A組為對照組，不飼喂復方中藥，B、C、D組從回乳第1天開始，每日上午8∶00分別飼喂復方中藥400、500、600 g，直至停奶。

1.2 回乳方式

本試驗采用逐漸干奶法[10]，即：停喂多汁飼料，減少精料喂量，以青干草為主，控制飲水，適當加強運動。在回乳第1天，擠奶次數(shù)由3次改為2次，第2天改為1次，逐漸減少擠奶次數(shù)，當日產(chǎn)奶量為3～5 kg時，停止擠奶。

1.3 試驗藥物

復方中藥由四川農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院奶牛疾病研究中心研發(fā)。由麥芽，樸硝，升麻，柴胡，香附，薏仁，蠶蛻，白術(shù)，黃芩，知母，蘇梗，芡實，五味子，蒲公英，甘草等組成，均購自成都荷花池中藥材專業(yè)市場（一等品）。按比例配方粉碎過60目篩，塑料袋500 g/袋分裝備用。

1.4 試驗試劑

IGF-1、TGF-β1和STAT5雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測（ELISA）試劑盒，均由美國RD公司提供。

1.5 試驗方法

1.5.1 血清收集

試驗奶?；厝殚_始當天記為第0天，依次采集第 0、1、3、5、7、9 和 11 天尾靜脈血 10 mL，置于未加抗凝劑的離心管中，室溫下靜置1 h，離心力352 g離心10 min，轉(zhuǎn)移上層血清于EP管中，-20℃凍存，待檢。

1.5.2 ELISA檢測

采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（ELISA）測定IGF-1、TGF-β1和STAT5的水平，步驟嚴格按照說明書進行。

1.6 統(tǒng)計分析

SPSSl9.0軟件進行統(tǒng)計學分析，K-S檢驗計量資料是否服從正態(tài)分布，以平均數(shù)±標準差（±S）表示，兩組間采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析，相關(guān)性分析采用雙變量Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 復方中藥對回乳期奶牛產(chǎn)奶量的影響

如表1所示，在奶牛回乳期，各組奶牛產(chǎn)奶量均隨時間推移呈下降趨勢，回乳期需要時間分別是11、7、5和5 d，回乳第0天，各組奶產(chǎn)量差異不顯著（P＞0.05）；第1天，B組產(chǎn)奶量極顯著高于D組（P＜0.01）；第3～5天，A、B 組產(chǎn)奶量均極顯著高于C、D組（P＜0.01），第 3～7 天，A 組產(chǎn)奶量極顯著高于 B組（P＜0.01）；C、D組產(chǎn)奶量在整個回乳期差異均不顯著（P＞0.05）。

表1 復方中藥對回乳期奶牛奶產(chǎn)量的影響Table1 Effects of compound traditional Chinese medicine on the milk yield of dairy cows during the period of milk with drawal kg/d，±S

表1 復方中藥對回乳期奶牛奶產(chǎn)量的影響Table1 Effects of compound traditional Chinese medicine on the milk yield of dairy cows during the period of milk with drawal kg/d，±S

注：同行肩標有不同小寫字母表示差異顯著（P＜0.05），不同大寫字母表示差異極顯著（P＜0.01），有相同大、小寫字母表示差異不顯著（P＞0.05）。下表同。Note：Means in the same list with different superscripts（lowercase letters for the 0.05 level，capital letters for the 0.01 level）differ significantly between groups.Means in the same list with same letters represent no significant difference（P＞0.05）.The same below.

分組Group時間Time A（n=20） B（n=20） C（n=20） D（n=20）第0天第1天第3天第5天第7天第9天第11天15.43±0.60A 15.30±0.92AB 13.33±0.42A 10.44±0.74A 8.08±0.74A 6.73±1.064.38±0.7315.22±0.71A 15.91±0.57A 10.23±1.16B 7.45±0.94B 4.31±0.68B——15.27±0.72A 15.22±0.75AB 9.38±0.92BC 4.85±2.00C— —15.76±0.84A 14.45±0.68B 8.47±0.88C 3.94±0.51C— —

2.2 復方中藥對回乳期奶牛血清IGF-1含量的影響

如表2所示，在奶?；厝槠冢鹘M奶牛血清IGF-1含量均隨時間推移呈下降趨勢，并在回乳期后回升，回乳第0天，B組奶牛血清IGF-1含量顯著高于 C 組（P＜0.05）；第 1天，各組奶牛血清 IGF-1含量差異均不顯著（P＞0.05）；第 3～7天，A 組奶牛血清IGF-1含量極顯著高于 B、C、D 組（P＜0.01）；第9天，A、B組奶牛血清IGF-1含量均極顯著低于C、D組（P＜0.01），A 組極顯著高于B 組（P＜0.01）；第 11天，對照組奶牛血清IGF-1含量極顯著低于中藥組（P＜0.01）；C、D組奶牛血清IGF-1含量在整個回乳期均差異性不顯著（P＞0.05）。

2.3 復方中藥對回乳期奶牛血清TGF-β1含量的影響

如表3所示，各組奶牛血清TGF-β1含量在回乳期均呈上升趨勢，并在回乳期后下降?；厝榈?～3天，各組間 TGF-β1含量差異均不顯著（P＞0.05）；第7天，A、B組 TGF-β1含量極顯著高于 C、D 組（P＜0.01）；第 9～11天，B 組 TGF-β1含量極顯著高于其他3組（P＜0.01）；C、D 組 TGF-β1含量在整個回乳期差異均不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明復方中藥可促使回乳期奶牛血清TGF-β1含量上升。

2.4 復方中藥對回乳期奶牛血清STAT5含量的影響

如表4所示，在奶?；厝槠?，各組奶牛血清STAT5含量呈下降趨勢，并在回乳期后明顯升高。第0～1天，STAT5含量在 4組間差異均不顯著（P＞0.05）；第3～5天，A、B組 STAT5含量均極顯著高于 C、D 組（P＜0.01），A 組STAT5含量顯著高于 B 組（P＜0.05）；第7～9天，A、B組STAT5含量均極顯著低于C、D組（P＜0.01）；第11天，A組STAT5含量極顯著低于B、C、D 組（P＜0.01）；C、D 組STAT5含量在整個回乳期均差異性均不顯著（P＞0.05）。

表2 復方中藥對回乳期奶牛血清IGF-1含量的影響Table2 The effects of compound traditional Chinese medicine on IGF-1 of dairy cows during the period of milk with drawal ng·mL-1，±S

表2 復方中藥對回乳期奶牛血清IGF-1含量的影響Table2 The effects of compound traditional Chinese medicine on IGF-1 of dairy cows during the period of milk with drawal ng·mL-1，±S

分組Group時間Time A（n=20） B（n=20） C（n=20） D（n=20）第0天第1天第3天第5天第7天第9天第11天56.04±3.81ab 54.88±3.93a 49.03±1.53A 46.78±1.70A 43.25±2.59A 42.20±2.76A 38.20±1.08A 57.34±3.24a 54.99±4.24a 43.78±2.42Ba 39.80±2.48B 38.17±1.48Ba 38.59±1.02B 45.20±1.30B 53.55±3.12b 54.08±2.69a 41.24±2.37BCb 39.43±1.56B 39.14±1.01B 45.79±2.85C 46.84±2.13B 55.88±3.14ab 54.74±2.45a 40.29±1.60C 40.80±2.30B 40.38±1.06Bb 45.82±2.09C 45.79±3.24B

表3 復方中藥對回乳期奶牛血清TGF-β1含量的影響Table3 The effects of compound traditional Chinese medicine on serun TGF-β1 levels of dairy cows in dry period ng·mL-1

表4 復方中藥對回乳期奶牛血清STAT5含量的影響Table4 The effects of compound traditional Chinese medicine on STAT5 of dairy cows during the period of milk with drawal ng·mL-1，±S

表4 復方中藥對回乳期奶牛血清STAT5含量的影響Table4 The effects of compound traditional Chinese medicine on STAT5 of dairy cows during the period of milk with drawal ng·mL-1，±S

分組Group時間Time A（n=20） B（n=20） C（n=20） D（n=20）第0天第1天第3天第5天第7天第9天第11天9.29±0.13A 9.49±0.26A 9.40±0.23Aa 9.28±0.22A 8.59±0.27A 8.35±0.15A 8.40±0.22A 9.50±0.22A 9.35±0.24A 9.03±0.31Ab 8.51±0.22B 8.03±0.21B 9.27±0.21B 10.67±0.91B 9.52±0.22A 9.52±0.17A 8.55±0.23B 7.91±0.16C 9.57±0.25C 11.13±0.75C 10.98±0.90B 9.49±0.29A 9.45±0.24A 8.56±0.31B 8.09±0.26C 9.61±0.37C 10.89±0.56C 11.47±0.91B

2.5 回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1和STAT5含量和產(chǎn)奶量間的相關(guān)性

如表5所示，在奶?；厝槠?，產(chǎn)奶量與IGF-1和STAT5含量均分別呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），而產(chǎn)奶量與 TGF-β1含量呈極顯著負相關(guān)（P＜0.01）；IGF-1與 STAT5含量呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），而TGF-β1與IGF-1、STAT5含量分別呈極顯著負相關(guān)（P＜0.01）。

表5 回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1和STAT5含量和產(chǎn)奶量的相關(guān)性Table5 Correlation between the levels of INS，HC and IGF-1 milk yield during the period of milk with drawal

3 討論

3.1 復方中藥對回乳期奶牛產(chǎn)奶量的影響

目前，口服麥芽，外敷芒硝等方式促進婦女回乳的研究已報道較多[11-12]。王雄[4]利用“回乳抑增一號”（麥芽、牡蠣、浙川貝等）使婦女溢乳改善，郝振華等[5]利用麥芽治療婦女產(chǎn)后溢乳有明顯療效。現(xiàn)有回乳方中多含有麥芽，且已經(jīng)人工合成麥角衍生物——卡麥角林，其可明顯抑制PRL生成，進而控制泌乳[13]。然而，復方中藥運用于奶牛回乳還未見研究報道，本試驗結(jié)果顯示，在奶牛回乳期，各組奶牛產(chǎn)奶量均隨時間推移呈降低趨勢，回乳第1天，B產(chǎn)奶量極顯著高于 C 組（P＜0.01）；第 3～5天，A 和 B組產(chǎn)奶量極顯著高于C、D組（P＜0.01），且A產(chǎn)奶量極顯著高于B（P＜0.01），表明了復方中藥具有較好回乳效果，可能是復方中藥以炒麥芽消食、回乳[4，12]；升麻、柴胡、香附、白術(shù)疏肝理氣；黃芩、知母、蘇梗安胎；五味子、蒲公英固精斂陰，清熱解毒，統(tǒng)籌全局，斷其生化之源，使肝氣調(diào)達四運，有效抑制乳汁分泌而回乳，C、D組產(chǎn)奶量在整個回乳期差異均不顯著（P＞0.05），表明回乳期奶牛飼喂復方中藥500 g/日時，回乳效果即可達到最佳。

3.2 復方中藥對回乳期奶牛血清IGF-1含量的影響

IGF-1是一類功能復雜的多肽因子，可促進乳腺泌乳[1]。A.L.Macrina等[6]研究表明，乳腺組織中存在IGF-1及其受體，可直接通過受體作用于乳腺，對乳腺最終分化完全、發(fā)育成熟與乳汁生成以及新生兒的生長發(fā)育具有調(diào)控作用[14]，R.Murney等[15]和H.Hernandez等[16]也表示IGF-1與奶牛產(chǎn)奶量相關(guān)性顯著。本研究結(jié)果表示，在奶?；厝槠冢錓GF-1含量依次呈階梯式下降，而第0和1天、第3和5天、第7和9天、第9和11天之間差異均不顯著（P＞0.05），與上述結(jié)果趨勢一致，可能是復方中藥可促進回乳期奶牛血清IGF-1含量下降，反饋抑制乳腺泌乳細胞分泌。表明奶牛IGF-1不僅在奶牛青春期乳腺生長和泌乳期起正向調(diào)控，且在奶?；厝槠诳山档虸GF-1含量，促進回乳進行。

王昶[17]和唐中生等[18]發(fā)現(xiàn)丹參可使大鼠血清和肝組織IGF-1表達量上升，張弛等[19]利用丹參、黃芩等組成的復方中藥在兔上獲得相同研究結(jié)果，石寶明等[20]利用益母草、王不留行、黃芩等組成的復方中藥顯著增加泌乳大鼠產(chǎn)奶量及血清IGF-1含量，本試驗結(jié)果顯示，在奶?；厝檫^程中，對照組奶牛血清IGF-1含量較復方中藥組下降慢，C和D組奶牛血清IGF-1含量下降較B組快，而C和D組差異不顯著（P＞0.05）。表明復方中藥降IGF-1效果明顯，其中C、D組效果較好，在回乳期后中藥組IGF-1含量均上升，表明復方中藥可使奶?？焖倩厝?，減少IGF-1低含量持續(xù)時間，回乳期完成之后，IGF-1回升，以滿足懷孕后期胎犢快速生長發(fā)育的需要。

3.3 復方中藥對回乳期奶牛血清TGF-β1含量的影響

TGF-β1是一種多效的細胞因子，可影響上皮細胞增殖、凋亡并維持細胞外基質(zhì)穩(wěn)態(tài)，對乳腺形態(tài)發(fā)生及分泌功能均有重要作用。已有研究表明，TGF-β1可誘導乳腺上皮干細胞群衰老，抑制乳腺發(fā)育，并與乳腺泌乳的終止信號密切相關(guān)[21]。另外，TGF-β1可減少乳腺上皮細胞中由PRL誘導的β-酪蛋白mRNA和蛋白表達水平，且對蛋白表達水平的抑制更明顯[22]。說明TGF-β1在動物乳腺退化過程中對抑制細胞生長起重要調(diào)控作用[23]。Vries等[24]指出TGF-β1含量表達在奶?；厝楹?周內(nèi)達到最高，本研究發(fā)現(xiàn)，在奶?；厝檫^程中，隨泌乳量逐漸下降，血清TGF-β1含量呈上升趨勢，與上述研究結(jié)果趨勢一致，可能是由于回乳期奶牛機體缺少擠奶刺激，促使乳腺表達TGF-β1，減少β-酪蛋白mRNA和蛋白表達水平，降低奶牛泌乳量。

張臻等[25]使用黃芩、太子參等組成的復方中藥提升了大鼠TGF-β1表達量，葛明曉等[26]利用熟地、山藥和白術(shù)等組成的復方中藥增加了婦女血清TGF-β1含量。本研究使用的復方中藥可使奶?？焖倩厝?，回乳期結(jié)束后，各中藥組TGF-β1含量均有一定程度的下降，縮短了TGF-β1高含量水平及回乳期持續(xù)時間，從而降低對細胞增殖的抑制作用[27]，間接促進胎犢生長發(fā)育。而對照組變化不明顯，可能是由于對照組奶?；厝槌掷m(xù)時間較長，致使TGF-β1還未達到降低期。

3.4 復方中藥對回乳期奶牛血清STAT5含量的影響

信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子（STATs）是一種獨特DNA結(jié)合蛋白，其家族成員較多。其中STAT5可被母體體內(nèi)多種生殖激素激活，參與乳腺細胞增殖、分化和泌乳[28]。乳腺發(fā)育各階段均可在其上皮細胞中檢測到STAT5，且其酪氨酸磷酸化狀態(tài)與乳腺發(fā)育及乳蛋白基因的活化密切相關(guān)。STAT5發(fā)揮泌乳功能主要受到由催乳素介導的JAK2/STAT5信號轉(zhuǎn)導通路調(diào)控[29-30]，從而促進乳腺上皮細胞增殖和表達[31]。藏長江等[32]研究結(jié)果表明，乳汁氨基酸和蛋白質(zhì)含量均與STAT5的mRNA表達量呈顯著正相關(guān)。因此，STAT5的活性是控制乳腺正常生長發(fā)育及泌乳的關(guān)鍵之一。本研究結(jié)果顯示，在奶?；厝檫^程中，各組STAT5含量均呈下降趨勢，可能是由于STAT5磷酸化量減少，負反饋抑制STAT5進一步分泌。

李立科等[33]發(fā)現(xiàn)大豆異黃酮可激活大鼠JAK2通路，加快STAT5磷酸化，促進乳汁分泌。于豐彥等[34]也表示黃芩苷對STAT5具有明顯調(diào)控作用。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在奶?；厝槠?，復方中藥組奶牛血清STAT5含量下降趨勢均比對照組明顯，且B組較C、D組慢，而C組和D組差異不顯著（P＞0.05）。可能是復方中藥降低PRLR-JAK2-STAT5信號轉(zhuǎn)導通路對乳腺細胞的作用。對照組STAT5含量在整個回乳期均未回升，可能是由于對照組奶牛仍繼續(xù)泌乳，抑制其分泌。而中藥組在回乳期后上升，可能是懷孕末期胎兒生長發(fā)育對JAK2/STAT5通路作用需求增加，促使STAT5含量快速回升，其機理有待進一步研究。

3.5 回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1和STAT5含量和產(chǎn)奶量間的相關(guān)性

哺乳動物泌乳受神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)多種激素、乳腺外組織、自分泌的多種生長因子等因素的調(diào)控，相互間具有協(xié)同和拮抗作用，以內(nèi)分泌、旁分泌、自分泌等方式共同調(diào)節(jié)乳腺的生長發(fā)育和泌乳[10]。神經(jīng)內(nèi)分泌的多種激素與乳腺外組織及乳腺分泌的多種因子相互協(xié)同，以內(nèi)分泌、旁分泌和自分泌等方式共同調(diào)節(jié)乳腺的生長發(fā)育和泌乳[2]。有研究表明，IGF-1可間接調(diào)節(jié)乳腺和乳腺外營養(yǎng)競爭，使營養(yǎng)向乳腺轉(zhuǎn)移，促進乳腺發(fā)育和乳的合成，提高奶牛產(chǎn)奶量[35-36]。在乳腺發(fā)育和泌乳中，生殖激素介導的JAK2/STAT5對乳腺發(fā)育和乳蛋白表達有促進作用，激素與其受體結(jié)合，受體二聚化，JAK2激酶活化，導致STAT5磷酸化，調(diào)控乳蛋白合成，影響泌乳量及品質(zhì)。藏長江等[32]、苗培[37]和 Lo Y.H.等[38]也指出STAT5含量升高可促進乳汁生成、啟動和維持。在乳腺退化過程中，TGF-β1在轉(zhuǎn)錄水平及蛋白水平上均增加[39]，誘導乳腺導管快速退化[40]，從而抑制泌乳。而回乳期奶牛血清IGF-1、TGF-β1、STAT5含量與產(chǎn)奶量間的相關(guān)性還未見報道，本研究表示，在奶?；厝槠?，產(chǎn)奶量與IGF-1和STAT5含量均分別呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），而產(chǎn)奶量與 TGF-β1含量呈極顯著負相關(guān)（P＜0.01），IGF-1與 STAT5含量呈極顯著正相關(guān)（P＜0.01），而 TGF-β1 與 IGF-1、STAT5含量分別呈極顯著負相關(guān)（P＜0.01）。與上述學者研究結(jié)果一致。說明，IGF-1和STAT5是奶?；厝榈呢撜{(diào)控因子，TGF-β1是奶?；厝榈恼{(diào)控因子。

4 結(jié)論

復方中藥能顯著促進回乳期奶牛回乳，飼喂500 g/日復方中藥回乳效果即可達到最佳。IGF-1和STAT5對奶牛回乳起負調(diào)控作用，而TGF-β1對奶牛回乳起正調(diào)控作用。

［1］BACH L A.Insulin-like growth factor binding proteins—an update［J］.Pediatric Endocrinology Reviews Per，2015，13（2）：521-530.

［2］OGATA Y，YU G M，HIDAKA T，et al.Effective embryo production from Holstein Cows treatedwith gonadotropin-releasing hormone during early lactation［J］.Theriogenology，2016，86（6）：1421-1426.

［3］文靜，卜登攀，王建發(fā)，等.激素調(diào)控乳蛋白合成的作用及其分子機制［J］.華北農(nóng)學報，2012，27（s1）：111-115.

［4］王雄.回乳抑增一號治療高泌乳素血癥與乳腺增生藥效學研究［D］.武漢：湖北中醫(yī)藥大學，2012.

［5］郝振華，郭震兵.重用生麥芽治療高泌乳素血癥性不孕的臨床觀察［J］.新疆中醫(yī)藥，2016，34（1）：13-14.

［6］MACRINA A L，KAUF A C，KENSINGER R S.Effect of bovine somatotropin administration during induction of lactation in 15-month-old heifers on production and health［J］.Journal of Dairy Science，2011，94（9）：4566-4573.

［7］WANG J F，F(xiàn)U S P，LI S N，et al.Short-chain fatty acids inhibit growth hormone and prolactin gene transcription via Camp/Pka/Creb signaling pathway in dairy cow anterior pituitary cells［J］.International Journal of Molecular Sciences，2013，14（11）：21474-21488.

［8］HENDERSON A C，HUDSON C D，BRADLEY A J，et al.Prediction of intramammary infection status across the dry period from lifetime cow records［J］.Journal of Dairy Science，2016，99（7）：5586-5595.

［9］Zhao F R，Mao H H，Hu L M，et al.Antagonistic effects of two herbs in Zuojin Wan，a traditional chinese medicine formula，on catecholamine secretion in bovine adrenal medullary cells［J］.Phytomedicine International Journal of Phytotherapy&Phytopharmacology，2010，17（8-9）：659-668.

［10］王春璈.奶牛臨床疾病學［M］.北京：中國農(nóng)業(yè)科學技術(shù)出版社，2007.

［11］吳文英，周惠歡，吳秀娥.芒硝外敷治療產(chǎn)后回奶的觀察及護理［J］.醫(yī)學信息，2013，26（8）：375.

［12］鐘慧萍.炒麥芽泡茶飲用聯(lián)合芒硝外敷雙乳回奶的效果觀察［J］.中外醫(yī)學研究，2015，13（34）：157-159.

［13］楊強，陳晉，劉軍.卡麥角林治療泌乳素型垂體瘤的研究進展［J］.中國神經(jīng)精神疾病雜志，2016，42（5）：311-314.

［14］Nawathe A R，Christian M，Kim S H，et al.Insulin-like growth factor axis in pregnancies affected by fetal growth disorders［J］.Clinical Epigenetics，2016，8（1）：1-13.

［15］MURNEY R，STELWAGEN K，WHEELER T T，et al.The effects of milking frequency on Insulin-like growth factor I signaling within the mammary gland of dairy Cows［J］.Journal of Dairy Science，2015，98（8）：5422-5428.

［16］HERNANDEZ H，F(xiàn)LORES J A，DELGADILLO J A，et al.Effects of exposure to artificial long days on milk yield，maternal insulin-like growth factor 1 levels and kid growth rate in subtropical goats［J］.Animal Science Journal，2016，87（4）：484-491.

［17］王昶.胰島素樣生長因子-1在肝纖維化大鼠中的表達及中藥的干預作用［D］.大連：大連醫(yī)科大學，2015.

［18］唐中生，呂明莊，賀志光，等.耳針聯(lián)合中藥對血管性癡呆大鼠記憶障礙及胰島素樣生長因子-1及乙酰膽堿酯酶表達的影響［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2008，23（3）：270-272.

［19］張弛，楊志偉，段小英.活血通絡法治療激素性股骨頭壞死兔胰島素樣生長因子1的變化［J］.中國組織工程研究，2012，16（52）：9787-9791.

［20］石寶明，單安山.促乳中草藥對泌乳大鼠內(nèi)分泌功能的影響［J］.東北農(nóng)業(yè)大學學報，2011，42（12）：45-50.

［21］YANG G，ZHOU J，TENG Y，et al.Mesenchymal Tgf-Β Signaling Orchestrates Dental Epithelial Stem Cell Homeostasis through Wnt Signaling［J］.Stem Cells，2014，32（11）：2939-2948.

［22］KLENBERG D L，F(xiàn)ELDMAN M，RUAN W.IGF-I：An essential factor in terminal end bud formation and ductal morphogenesis［J］.J Mammary Gland Biol Neoplasia，2000，5（1）：7-17.

［23］ZARZYNSKA J，GAJKOWSKA B，WOJEWODZKA U，et al.Apoptosis and autophagy in involuting bovine mammary gland is accompanied by up-regulation of TGF-beta1 and suppression of somatotropic pathway［J］.Pol J Vet Sci，2007，10（1）：1-9.

［24］VRIES L D，CASEY T，DOVER H，et al.Effects of transforming growth factor-β on mammary remodeling during the dry period of dairy cows［J］.J Dairy Sci，2011，94（12）：6036-6046.

［25］張臻，闕華發(fā)，朱元穎，等.益氣化瘀中藥對糖尿病皮膚潰瘍大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1的影響［J］.中西醫(yī)結(jié)合學報，2007，5（4）：416-420.

［26］葛明曉，張金玉，趙彥鵬，等.益氣血補肝腎中藥對體外受精-胚胎移植周期中卵泡液轉(zhuǎn)化生長因子β1和性激素水平的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2011，31（3）：327-330.

［27］YANG J W，HIEN T T，LIM S C，et al.Pin1 induction in the fibrotic liver and its roles in TGF-β1 expression and Smad2/3 phosphorylation［J］.J Hepatol，2014，60（6）：1235-1241.

［28］LINHER-MELVILLE K，HAFTCHENARY S，GUNNING P，et al.Signal transducer and activator of transcription 3 and 5 regulate system Xc-and redox balance in human breast cancer cells［J］.Mol Cell Biochem，2015，405（1-2）：205-221.

［29］IAVNILOVITCH E，GRONER B，BARASH I.Overexpression and forced activation of stat 5 in mammary gland of transgenic mice promotes cellular proliferation，enhances differentiation，and delays postlactational apoptosis［J］.Mol Cancer Res，2002，1（1）：32-47.

［30］IAVNILOVITCH E，EILON T，GRONER B，et al.Expression of a carboxy terminally truncated Stat5 with no transactivation domain in the mammary glands of transgenic mice inhibits cell proliferation during pregnancy，delays onset of milk secretion，and induces apoptosis upon involution［J］.Mol Reprod Dev，2006，73（7）：841-849.

［31］LI H M，WANG C M，LI Q Z，et al.Mir-15a decreases bovine mammary epithelial cell viability and lactation and regulates growth hormone receptor expression［J］.Molecules，2012，17（10）：12037-12048.

［32］臧長江，張養(yǎng)東，王加啟，等.脂多糖對泌乳奶牛乳中氨基酸組成及蛋白質(zhì)代謝相關(guān)基因表達的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2012，24（9）：1770-1777.

［33］李立科，羅啟慧，唐秀瑩，等.大豆異黃酮對肥胖大鼠腸道瘦素介導Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄激活因子信號轉(zhuǎn)導通路的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2016，28（8）：2448-2457.

［34］于豐彥，黃紹剛，張海燕，等.黃芩苷對潰瘍性結(jié)腸炎患者信號轉(zhuǎn)導和轉(zhuǎn)錄激活因子表達的影響［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2015，35（4）：419-424.

［35］李蔚輝，魏學鑫.糖皮質(zhì)激素的信號轉(zhuǎn)導系統(tǒng)［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2007，3（12）：21-25.

［36］趙國麗，宮艷斌，韓元，等.激素和生長因子調(diào)控奶牛乳腺發(fā)育的研究進展［J］.中國奶牛，2011（6）：25-30.

［37］苗培.催乳素及其受體的研究進展［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2016，32（3）：55.

［38］LO Y H，CHEN Y J，CHUNG T Y，et al.Emoghrelin，a unique emodin derivative in Heshouwu，stimulates growth hormone secretion via activation of the ghrelin receptor［J］.J Ethnopharmacol，2015，159（5）：1-8.

［39］WU W J，LEE C F，HSIN C H，et al.TGF-beta inhibits prolactin-induced expression of beta-casein by a Smad3-dependent mechanism［J］.J Cell Biochem，2008，104（5）：1647-1659.

［40］SERRA R，CROWLEY M R.Mouse models of transforming growth factor beta impact in breast development and cancer［J］.Endocr Relat Cancer，2005，12（4）：749-760.

The Effects of Compound Traditional Chinese Medicine on Return Milk and Lactation Correlation Factors in Dairy Cows

XIAO Jin-bang，JIANG Si-xun，WU Xiao-feng，DENG Jun-liang，ZUO Zhi-cai，CAO Sui-zhong，YU Shu-min，ZHU Ying-kun，QIAN Bo-lin，SHEN Liu-hong*
（College of Veterinary Medicine，The Key Laboratory of Animal Disease and Human Health of Sichuan Province，The Medical Research Center for Cow Disease，Sichuan Agricultural University，Chengdu 611130，China)

【Objective】 In order to explore the impacts of compound traditional Chinese medicine on return milk and the levels of serum insulin-like growth factor 1(IGF-1)，signal transducers and activators of transcription 5(STAT5)and transforming growth factor β1(TGF-β1)expression levels in dairy cow during the period of milk with drawal.【Methods】80 healthy Chinese Holstein cows that in late pregnancy and gave(15.42±0.71）kg milk per day were selected.The cows were randomly divided into four groups:group A，B，C and D，with 20 in each group.Stop dairy cows'milk by quickly dry milk method and the day when cows begun to return milk was regarded as 0 d.Group A was a control group，did not feed compound traditional Chinses medicine and the group B，C and D were fed 400 g，500 g，600 g compound traditional Chinses medicine respectively at 8.00 am.from 1 d to the day of drying milk completely.We collected cows'venous blood from the tail on the 0，1，3，5，7，9 and 11 d and noted the daily milk production.ELISA was used to evaluate the expression levels of serum IGF-I，STAT5 and TGF-β1.【Results】During the period of milk with recovery，the milk production of all 4 groups was on the decline.Group A，B，C and D returned milk on the 11 d，7 d，5 d and 5 d respectively.The expression levels of serum IGF-1 and STAT5 had downward trend and raised after the period of milk with recovery，but the expression levels of TGF-β1 had rising trend and declined after the period of milk with recovery in all 4 groups.There was highly significant positive correlation between milk production and the content of IGF-1 and STAT5(P＜0.01)The milk production showed highly significant positive correlation with the expression levels of IGF-1 and STAT5 and showed highly significant negative correlation with the expression level of TGF-β1.(P＜0.01).There were highly significant positive correction between IGF-1 and STAT5(P＜0.01)while there were highly negative correction between TGF-β1 and IGF-1，STAT5.【Conclusions】Compound traditional Chineses medicine can help cows to recoverymilk significantly，and feeding 500 g/d can achieve the best results.During the period of milk with recovery，IGF-1 and STAT5 are negative regulation factors of returning milk，while TGF-β1 is a positive regulation factor.

cow；compound traditional Chineses medicine；transforming growth factor β1；signal transducers and activators of transcription 5；insulin-like growth factor 1

S823.91

A

1000-2650（2017）04-0587-07

10.16036/j.issn.1000-2650.2017.04.020

2017-05-30

四川省教育廳重點項目（15ZA0024）；四川農(nóng)業(yè)大學雙支計劃項目（03571303）；四川農(nóng)業(yè)大學本科科研興趣培養(yǎng)計劃項目（KY2016062）。

肖勁邦，碩士研究生。*責任作者：沈留紅，博士，副教授，主要從事反芻動物疾病及繁殖新技術(shù)的研究，E-mail：shenlh@sicau.edu.cn.com。

（本文審稿：石寶明；責任編輯：秦碧雯；英文編輯：劉益平）