• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    2016年朝陽區(qū)動物診療機(jī)構(gòu)犬狂犬病和A型流感的流行病學(xué)調(diào)查報告

    2018-01-05 03:18:28王雅琴張海云唐艷榮張曉梅許東保張長林曹院章
    中國畜牧獸醫(yī)文摘 2017年11期
    關(guān)鍵詞:檢測

    王雅琴 張海云 唐艷榮 楊 榮 張曉梅 許東保 張長林 曹院章

    (北京市朝陽區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心,北京 100018)

    2016年朝陽區(qū)動物診療機(jī)構(gòu)犬狂犬病和A型流感的流行病學(xué)調(diào)查報告

    王雅琴 張海云*唐艷榮 楊 榮 張曉梅 許東保 張長林 曹院章

    (北京市朝陽區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心,北京 100018)

    本文對動物診療機(jī)構(gòu)中因不同的原因前來就診的寵物進(jìn)行采樣調(diào)查,針對狂犬病和A-型流感病毒病開展檢測活動,動物診療機(jī)構(gòu)共計采樣84份,應(yīng)用 V8實(shí)時快速熒光PCR檢測設(shè)備,開展病原學(xué)檢測,未發(fā)現(xiàn)有攜帶以上兩個病毒的寵物犬。

    流行病學(xué)調(diào)查 寵物犬 狂犬病 A型流感病毒病 實(shí)時熒光PCR檢測

    城市生活中,寵物的飼養(yǎng)既是一種精神需求,也是一種生活方式。在人們關(guān)注身心健康的同時,不可避免的重視所飼養(yǎng)動物可能引發(fā)的人畜共患傳染病的可能。世界衛(wèi)生組織專家委員會認(rèn)定的人畜共患病中與寵物犬貓有直接或間接關(guān)系的有70 多種[1]。國家衛(wèi)生計生委疾病控制局官方網(wǎng)站發(fā)布信息表明,2016年全國共發(fā)生人感染狂犬病644例,感染H7N9型禽流感264例。所以,本次調(diào)研的目的旨在通過定點(diǎn)診療機(jī)構(gòu)中的就診病例,采集樣品,開展涉及狂犬病、A-型流感的實(shí)時熒光PCR檢測。調(diào)查臨床病例中可能攜帶的嚴(yán)重的人畜共患病可能。通過現(xiàn)場調(diào)查與實(shí)驗(yàn)室檢測相結(jié)合的方式,動物疫病進(jìn)行定期定點(diǎn)抽樣調(diào)查,經(jīng)對各類資料和數(shù)據(jù)綜合分析、有效評估免疫效果、病原污染程度等技術(shù)指標(biāo),從而提出防控建議和預(yù)測預(yù)警。提高寵物飼養(yǎng)帶來的健康危害、經(jīng)濟(jì)損失以及潛在的風(fēng)險意識。

    本項目的流行病學(xué)調(diào)查方法采取動物疫病定點(diǎn)流調(diào)的方法,結(jié)合實(shí)驗(yàn)室檢測相結(jié)合的方式,在朝陽區(qū)四個街道中的動物診療機(jī)構(gòu)中開展采樣,樣品采集的時間為2016年1月至12月,樣品冷鏈運(yùn)輸?shù)轿抑行膶?shí)驗(yàn)室,進(jìn)行V8實(shí)時熒光PCR檢測,相關(guān)數(shù)據(jù)處理。

    本項目的實(shí)施單位為北京市朝陽區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心,參加采樣的單位分別位于朝陽區(qū)南磨房街道、團(tuán)結(jié)湖街道、望京街道、奧運(yùn)村街道中的動物治療機(jī)構(gòu)共計四家。同時涉及朝陽區(qū)警犬巡防隊的警用犬只。

    1 材料和方法

    1.1 定點(diǎn)調(diào)查的原則和范圍

    1.1.1 定點(diǎn)流調(diào)的原則:每個定點(diǎn)的布局考慮到地域、交通、動物飼養(yǎng)量、動物診療機(jī)構(gòu)的工作能力以及所采樣品充分的代表性。

    1.1.2 定點(diǎn)的范圍:指針對動物診療機(jī)構(gòu)中前來就診的寵物采樣。

    1.2 定點(diǎn)調(diào)查的內(nèi)容

    (1)開展項目的動物診療機(jī)構(gòu)的完整信息調(diào)研。

    (2)開展寵物樣品信息采集,內(nèi)容包括寵物主人姓名、病例號、寵物年齡、性別、品種、就診時臨床癥狀、采集樣品種類,采樣日期。

    (3)開展V8實(shí)時快速熒光PCR檢測,配套專用商品化試劑盒,對狂犬病、A-型流感病毒病進(jìn)行快速診斷。

    2 定點(diǎn)流行病學(xué)調(diào)查情況

    2.1 樣品采集及運(yùn)輸要求

    2.1.1 樣品采集標(biāo)準(zhǔn):

    咽、眼、鼻棉拭子的采集:選擇有臨床呼吸道癥狀的犬,采集樣品前要求潤濕棉簽,在黏膜部位捻轉(zhuǎn)3~5次。放置于含有1ml生理鹽水的離心管內(nèi)。

    唾液樣品的采集:隨機(jī)選擇可以采集唾液的犬,將唾液導(dǎo)入經(jīng)過高溫高壓消毒的一次性1.5ml離心管內(nèi)。2.1.2 樣品保存:樣品的適當(dāng)保存是有效檢測的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。棉拭子類樣品,可置于生理鹽水中保存。樣品如果在三日內(nèi)完成檢測,均可以再4℃冷藏保存,超過3日再做檢測的樣品,可于-20℃冷凍保存。血液類樣品,于-20℃冷凍保存。所有樣品都應(yīng)避免反復(fù)凍融。

    2.1.3 樣品運(yùn)輸:樣品要求保持冷鏈運(yùn)輸。

    2.2 試驗(yàn)方法和試劑來源

    2.2.1 檢測原理:實(shí)時熒光PCR檢測方法是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),通過特定探針和引物的設(shè)計和合成,模板的制備,利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

    2.2.2 實(shí)驗(yàn)使用儀器:

    (1)V8實(shí)時熒光PCR檢測儀器。特點(diǎn):快速變溫、收集熒光信號、自動設(shè)定閾值、自動計算Ct值。

    (2)移液器。試驗(yàn)中配備的eppendorf手動單道移液器10μl、20μl、100μl、200μl、1000μl的移液器各一把。

    (3)其他設(shè)備:配備電熱恒溫水浴鍋一臺、小型漩渦振蕩器一臺,計時器一臺,板架若干。

    2.2.3 實(shí)驗(yàn)使用的V8反應(yīng)試劑盒。共計引進(jìn)V8試劑盒10個,其中狂犬病V8反應(yīng)試劑盒5個,A-型流感V8反應(yīng)試劑盒5個。

    3 檢測方法V8實(shí)時熒光PCR檢測操作步驟

    3.1 RNA提取操作

    按照試劑盒內(nèi)操作說明開展提取操作,通過消化--吸附--洗滌--洗脫獲得相應(yīng)的核酸模板。

    3.2 核酸擴(kuò)增反應(yīng)操作

    (1)取V8實(shí)時熒光PCR反應(yīng)管,置于室溫融化,放置于反應(yīng)管架(溫度保持在2-10℃),加入核酸模板,用離心機(jī)離心30s,放入V8實(shí)時熒光PCR檢測儀器中,使用對應(yīng)的反應(yīng)程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

    (2)結(jié)果判定:根據(jù)自動分析,Ct值≤36并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線為陽性樣品;Ct值>36時,并出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線,需要重新取樣品提取核酸模板,擴(kuò)增后進(jìn)行結(jié)果判定,如仍出現(xiàn)特定的擴(kuò)增曲線,結(jié)果判定為陽性樣品;對于未能呈現(xiàn)特定的“s”型曲線的,即使Ct值≤36,應(yīng)為陰性。

    3.3 注意事項

    3.3.1 預(yù)防污染

    操作人員必須穿戴好工作服、口罩、手套;提取過程中,盡量避免手套接觸吸附柱管口和離心管管口;將液體吸入吸附柱中時,若離心管開蓋時液體粘在手上或?yàn)R出,應(yīng)立即更換手套;

    所有用于檢測的廢棄物都應(yīng)該收集放入消毒液的消毒缸中。

    反應(yīng)管放入儀器前,一定要蓋緊封口,放置在儀器內(nèi)崩開。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,用卡夾取出時,要卡到反應(yīng)管最后一道棱框內(nèi),放置取出過程中導(dǎo)致封口崩開,飛沫污染儀器。

    實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,應(yīng)該用1%次氯酸鈉或75%酒精消毒工作臺。

    3.3.2 規(guī)范操作

    所有樣品必須進(jìn)行明確的標(biāo)記,編號,采樣單位制作完整的《V8項目檢測樣品采樣表格》,送樣品時上交《V8項目流行病學(xué)調(diào)查采樣登記表》。由實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測號碼的編制,并且進(jìn)行標(biāo)記,排序。

    所有樣品都需進(jìn)行充分的融化后進(jìn)行檢測,棉拭子以及唾液樣品檢測前需要進(jìn)行振蕩混勻。嚴(yán)禁樣品反復(fù)凍融(三次不可用)。

    實(shí)際操作中,所有試劑使用前需要認(rèn)真核對檢測試劑名稱。反應(yīng)管、蛋白酶K使用前,于室溫融化,隨用隨取,用后立即放回冰箱。

    所有實(shí)驗(yàn)操作完全按照操作說明書步驟操作,不得刪減。

    3.4 儀器設(shè)備計量、效驗(yàn)、維護(hù)

    參加由北京世紀(jì)元亨組織的V8快速實(shí)時熒光PCR能力驗(yàn)證比對實(shí)驗(yàn),依據(jù)ISO/IEC17043、GB/T 27043和SN/T2989運(yùn)作能力驗(yàn)證計劃,參與能力驗(yàn)證比對實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:比對實(shí)驗(yàn)中的四個盲樣,檢測結(jié)果均為滿意。計算中位值、標(biāo)準(zhǔn)IQR和Z比分?jǐn)?shù),均為滿意。

    3.5 影響調(diào)查研究結(jié)果和數(shù)據(jù)的條件和因素

    3.5.1 樣品采集的代表性意義:動物流行病學(xué)調(diào)查采樣工作,采樣人員的主觀因素影響比較嚴(yán)重,隨機(jī)性差,不具有完全的代表性。同時,也與動物診療機(jī)構(gòu)工作狀況相關(guān),在日常工作比較繁忙的季節(jié),采樣數(shù)量明顯較少。存在樣品采集的隨機(jī)誤差和選擇偏倚。

    3.5.2 檢測水平和檢測方法效驗(yàn)誤差:V8實(shí)時熒光PCR檢測系統(tǒng)雖然是成熟的檢測技術(shù),但是在實(shí)際操作過程中,對操作人員的要求較高,對各種試劑的存儲、使用都有著極為苛刻的規(guī)定,不可避免出現(xiàn)人員誤差和儀器誤差。

    3.5.3 項目設(shè)計中的目的性偏倚:本項目的主旨是寵物源性人畜共患病的快速診斷檢測的應(yīng)用,針對個體動物的疫病攜帶情況的檢測和分析,缺少對整個群體的大數(shù)據(jù)分析和考量。所以,檢測范圍小、采集樣品量少、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)少,社會意義有限。

    4 結(jié)果

    2016年1月至12月期間我實(shí)驗(yàn)室共計接收到動物診療機(jī)構(gòu)送檢樣品84份,犬唾液樣品50份,咽、眼、鼻棉拭子34份。共計開展實(shí)時熒光PCR檢測86項次,其中狂犬病檢測50項次、A-型流感檢測36項次。

    4.1 狂犬病調(diào)查結(jié)果

    共計收到50份犬唾液樣品,根據(jù)樣品的要求,46份犬唾液樣符合實(shí)驗(yàn)要求,46份樣品檢測結(jié)果均為陰性。

    4.2 A-型流感調(diào)查結(jié)果

    共計開展犬咽、眼、鼻棉拭子34份A-型流感檢測,結(jié)果均為陰性。

    5 結(jié)論

    在2016年1月至12月期間,在朝陽區(qū)的四個街道的診療機(jī)構(gòu)中采集的就診動物樣品的檢測中,其中病毒類傳染病狂犬病未檢出,A-型流感病毒病未檢出;

    6 分析與討論

    6.1 狂犬病檢測情況分析

    根據(jù)我國2000年以后狂犬病的死亡人數(shù)變化可以看出,自2007年以后,死亡人數(shù)持續(xù)下降。以2015年為例,截至2015年8月份,北京市報告本地狂犬病8例,發(fā)病率0.06/10萬,病死率100%。根據(jù)網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)2015年1~8月全市動物致傷120241人次,比2014年同期上升11.4%[2]。在政府大力度宣傳、全面開展門診狂犬病疫苗接種等工作的背景下,家庭飼養(yǎng)的犬只,開展狂犬病免疫的比例較大。加之北京市狂犬病強(qiáng)制免疫政策和注冊犬免費(fèi)免疫政策的實(shí)施以朝陽區(qū)為例,多年來能夠保證注冊犬的100%免疫。最重要的是在就診病例中,動物主人對待動物的態(tài)度和關(guān)注度都遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于一般動物飼養(yǎng)者,所以,未檢出狂犬病病毒攜帶符合社會現(xiàn)狀。

    關(guān)于犬唾液檢測的說明:唾液檢測狂犬病用于人類的狂犬病檢測方法。犬的唾液中發(fā)現(xiàn)的狂犬病病毒,是在多克隆的免疫球蛋白的乳膠凝聚中發(fā)現(xiàn)的。唾液中的病毒檢出低于直接從腦組織中檢測出來,唾液的陰性檢測仍然需要直接的腦組織檢測來驗(yàn)證。更加敏感和特異性的唾液檢測需要進(jìn)一步的病毒分離和基因檢測方法[4]。也就是說,犬唾液的檢測是可以檢測出狂犬病病原體的,但是易發(fā)生假陰性,如果需要進(jìn)行確定的診斷仍需要進(jìn)行腦組織的檢測,所以犬唾液檢測具有一定的局限性。

    6.2 A型流感病毒病情況分析

    A型流感病毒屬于是正粘病毒科,其最危險的特性是跨種間傳播,A型流感已經(jīng)在多種動物中分離到:如人、禽類、豬、馬、貓、犬等。其中流感病毒受體在犬體內(nèi)分布最為廣泛,可以作為流感病毒的中間宿主,使得病毒在體內(nèi)進(jìn)行重組,從而產(chǎn)生新的病毒威脅人類的生命安全[3]。根據(jù)A-型流感在犬類上的報道,犬貓的A型流感攜帶是由于人類感染,導(dǎo)致所飼養(yǎng)動物出現(xiàn)攜帶。根據(jù)2009年犬?dāng)y帶H3N8和國內(nèi)關(guān)于犬?dāng)y帶H1N1的報道,都沒有明確的證據(jù)證明犬所攜帶的A-型流感病毒可以感染人類[4]。由于A-型流感病毒的復(fù)雜情況,應(yīng)該在盡可能多的環(huán)節(jié),增加檢測動物品種和數(shù)量,盡可能地在最早的時刻,將流感的攜帶動物及時篩查出來。本次檢測采集樣品數(shù)量有限,對現(xiàn)實(shí)情況的指導(dǎo)意義有限。

    本表為書中節(jié)選部分犬?dāng)y帶流感情況的實(shí)驗(yàn)室分類調(diào)查情況,攜帶有H5N1和H3N8型流感的犬只已有報道,根據(jù)A型流感病毒的特性,其在不同動物體內(nèi)容易發(fā)生變異,所以應(yīng)該將A型流感病的檢測在動物臨床診療中盡快應(yīng)用,以降低新型流感病毒擴(kuò)散風(fēng)險。

    7 結(jié)語

    (1)加大對人畜共患病的宣傳力度,擴(kuò)大流行病學(xué)調(diào)查范圍,促進(jìn)對相關(guān)疾病的認(rèn)識,提高寵物飼養(yǎng)者的風(fēng)險意識。

    (2)開發(fā)建立以動物診療機(jī)構(gòu)為主體的動物人畜共患病平臺,及時通過平臺進(jìn)行系統(tǒng)上報數(shù)據(jù),既可以保護(hù)獸醫(yī)群體,同時保護(hù)公共衛(wèi)生安全。

    (3)指導(dǎo)轄區(qū)動物診療機(jī)構(gòu)開展相關(guān)人畜共患病監(jiān)測技術(shù)培訓(xùn),通過有效的檢測方法結(jié)合臨床病例的監(jiān)測,達(dá)到控制疫病的目的。

    [1] 侯加法,鄧譯峰.寵物犬貓常見人畜共患病[J].新獸醫(yī),2005,(7):34-36.

    [2] 李愛華.淺議當(dāng)前犬貓人畜共患病現(xiàn)狀及防控對策[A].北京畜牧獸醫(yī)學(xué)會五十周年慶典暨第八屆會員代表大會、學(xué)術(shù)研討會論文集[C].2004:195-196.

    [3] 張鳳霞.A型流感病毒HA受體在犬、貉子、藍(lán)狐和水貂主要器官的分布[D].山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

    王雅琴(1978-),女,獸醫(yī)師,從事多年人畜共患病研究及實(shí)驗(yàn)室檢測。

    張海云(1964-),女,高級獸醫(yī)師,從事多年人畜共患病研究。

    猜你喜歡
    檢測
    QC 檢測
    “不等式”檢測題
    “一元一次不等式”檢測題
    “一元一次不等式組”檢測題
    “幾何圖形”檢測題
    “角”檢測題
    “有理數(shù)的乘除法”檢測題
    “有理數(shù)”檢測題
    “角”檢測題
    “幾何圖形”檢測題
    麻豆一二三区av精品| 国产精品嫩草影院av在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲人成网站高清观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 精品一区二区免费观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 在线免费十八禁| 丝袜喷水一区| 永久网站在线| 日韩三级伦理在线观看| 麻豆成人午夜福利视频| 国产激情偷乱视频一区二区| 此物有八面人人有两片| 91久久精品国产一区二区三区| 国产精品一区www在线观看| 国产色婷婷99| 免费观看在线日韩| 久久久成人免费电影| 午夜亚洲福利在线播放| 午夜精品国产一区二区电影 | avwww免费| 免费观看人在逋| 免费在线观看成人毛片| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲av中文av极速乱| 色哟哟·www| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产在线精品亚洲第一网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 久久精品国产清高在天天线| 国产成人a∨麻豆精品| 中文字幕免费在线视频6| 一个人看视频在线观看www免费| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产一区二区激情短视频| 久久久久网色| 中文字幕av在线有码专区| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 免费av观看视频| 22中文网久久字幕| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 久久精品久久久久久久性| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲自拍偷在线| 欧美性感艳星| 精品久久久久久成人av| 日本成人三级电影网站| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 天堂av国产一区二区熟女人妻| ponron亚洲| 有码 亚洲区| 亚洲国产色片| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲欧美精品专区久久| 最近中文字幕高清免费大全6| 干丝袜人妻中文字幕| 国产午夜精品论理片| 日本五十路高清| 国产精品精品国产色婷婷| 99热这里只有是精品在线观看| 18+在线观看网站| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 精品日产1卡2卡| 色综合色国产| 五月玫瑰六月丁香| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 18+在线观看网站| 久久99精品国语久久久| 搡老妇女老女人老熟妇| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 伦理电影大哥的女人| 一区福利在线观看| 99久国产av精品国产电影| 免费观看精品视频网站| 欧美精品一区二区大全| 日韩成人av中文字幕在线观看| 性欧美人与动物交配| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产伦精品一区二区三区视频9| 中国美女看黄片| 国产乱人偷精品视频| 小说图片视频综合网站| 国国产精品蜜臀av免费| 91精品国产九色| 大香蕉久久网| 亚州av有码| 99在线视频只有这里精品首页| 免费人成在线观看视频色| 久久热精品热| 久久久精品94久久精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲第一区二区三区不卡| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 在线免费十八禁| 波多野结衣巨乳人妻| 国产av在哪里看| 亚洲av第一区精品v没综合| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 久久久a久久爽久久v久久| 1000部很黄的大片| 久久综合国产亚洲精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 亚洲av二区三区四区| 国产成人91sexporn| 午夜免费激情av| 国内精品久久久久精免费| 日本免费一区二区三区高清不卡| 日本av手机在线免费观看| 特大巨黑吊av在线直播| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 亚洲av免费高清在线观看| 成人欧美大片| 此物有八面人人有两片| 六月丁香七月| 国产在线男女| 日韩制服骚丝袜av| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产男人的电影天堂91| 青春草国产在线视频 | 国产成年人精品一区二区| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产伦在线观看视频一区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 日韩欧美精品免费久久| 免费观看精品视频网站| 欧美bdsm另类| 最近手机中文字幕大全| 伦精品一区二区三区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 男人的好看免费观看在线视频| 99热精品在线国产| 最新中文字幕久久久久| 国产美女午夜福利| 一个人看的www免费观看视频| 爱豆传媒免费全集在线观看| 久久久久性生活片| 日本成人三级电影网站| av在线天堂中文字幕| 99热这里只有精品一区| avwww免费| 国产精品久久视频播放| kizo精华| 爱豆传媒免费全集在线观看| 国产精品伦人一区二区| 12—13女人毛片做爰片一| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 精品日产1卡2卡| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产黄a三级三级三级人| 性欧美人与动物交配| 亚洲经典国产精华液单| 变态另类丝袜制服| 成年av动漫网址| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| or卡值多少钱| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 身体一侧抽搐| 91久久精品国产一区二区成人| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 悠悠久久av| 在线观看美女被高潮喷水网站| 高清毛片免费看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 一级二级三级毛片免费看| 内地一区二区视频在线| 亚洲精品亚洲一区二区| 插阴视频在线观看视频| 久久久久免费精品人妻一区二区| 日韩欧美三级三区| 亚洲成a人片在线一区二区| 在线a可以看的网站| 少妇的逼好多水| 久久草成人影院| 成年女人看的毛片在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 69人妻影院| av在线老鸭窝| 日韩精品有码人妻一区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久人人爽人人爽人人片va| 久久久久久久久久久丰满| 成人毛片a级毛片在线播放| 日本爱情动作片www.在线观看| 十八禁国产超污无遮挡网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 国产美女午夜福利| 中文亚洲av片在线观看爽| 国国产精品蜜臀av免费| 国产色爽女视频免费观看| 免费看a级黄色片| 日韩高清综合在线| 亚洲国产精品合色在线| 有码 亚洲区| 成人亚洲精品av一区二区| 成人毛片60女人毛片免费| 午夜亚洲福利在线播放| 麻豆一二三区av精品| 日韩精品有码人妻一区| 美女高潮的动态| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 成人国产麻豆网| 美女国产视频在线观看| 插逼视频在线观看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 人妻少妇偷人精品九色| 色5月婷婷丁香| 国产高清激情床上av| 色播亚洲综合网| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 深夜a级毛片| 五月玫瑰六月丁香| 春色校园在线视频观看| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 在线天堂最新版资源| 久久久成人免费电影| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 岛国毛片在线播放| 少妇被粗大猛烈的视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 如何舔出高潮| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 美女大奶头视频| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲精品456在线播放app| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 久久久午夜欧美精品| 欧美一区二区国产精品久久精品| 国产视频内射| 成人永久免费在线观看视频| 最好的美女福利视频网| 最近视频中文字幕2019在线8| 国产淫片久久久久久久久| 国产综合懂色| 日本五十路高清| 毛片女人毛片| 人体艺术视频欧美日本| 男女视频在线观看网站免费| 国产伦在线观看视频一区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 亚洲人成网站在线播| 日韩一本色道免费dvd| 中国美女看黄片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日韩一本色道免费dvd| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品永久免费网站| 少妇人妻一区二区三区视频| a级毛色黄片| 国产精品一区二区性色av| 国产成人a∨麻豆精品| 在线播放无遮挡| 国产精品一区二区三区四区久久| 久久久久久久久久久丰满| 国产av在哪里看| 久久久色成人| 精品熟女少妇av免费看| 亚洲自偷自拍三级| 午夜精品在线福利| 丝袜喷水一区| 高清午夜精品一区二区三区 | 91精品一卡2卡3卡4卡| 亚洲国产欧美在线一区| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 色噜噜av男人的天堂激情| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 成年女人看的毛片在线观看| 一本久久精品| .国产精品久久| 国产精品女同一区二区软件| 97超碰精品成人国产| 黄片wwwwww| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产91av在线免费观看| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日韩av在线大香蕉| av在线老鸭窝| 中文字幕av成人在线电影| 一级毛片久久久久久久久女| 内地一区二区视频在线| 国产午夜福利久久久久久| 变态另类丝袜制服| 欧美丝袜亚洲另类| 欧美激情久久久久久爽电影| 99在线人妻在线中文字幕| 99热全是精品| 看免费成人av毛片| www.色视频.com| 在现免费观看毛片| kizo精华| 免费看a级黄色片| 我要搜黄色片| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲av二区三区四区| 久久人人爽人人爽人人片va| 夜夜夜夜夜久久久久| 三级经典国产精品| 五月玫瑰六月丁香| 美女高潮的动态| 九九在线视频观看精品| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产老妇女一区| 一级毛片电影观看 | 99久久精品国产国产毛片| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲成av人片在线播放无| 美女大奶头视频| 成人午夜高清在线视频| 国产av一区在线观看免费| 日本成人三级电影网站| 精品久久国产蜜桃| 亚洲欧美精品综合久久99| 免费观看在线日韩| 免费看美女性在线毛片视频| 亚洲第一电影网av| 日韩欧美 国产精品| 最近中文字幕高清免费大全6| 观看免费一级毛片| av在线观看视频网站免费| videossex国产| a级一级毛片免费在线观看| 少妇丰满av| 亚洲欧美清纯卡通| 18+在线观看网站| 午夜a级毛片| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲成av人片在线播放无| 国产伦精品一区二区三区视频9| 精品人妻熟女av久视频| 不卡视频在线观看欧美| 99热网站在线观看| 一本一本综合久久| 看黄色毛片网站| av免费观看日本| 久久国内精品自在自线图片| 欧美人与善性xxx| 免费观看在线日韩| 国产精品.久久久| 我的女老师完整版在线观看| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产高清不卡午夜福利| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 一级av片app| 国产一级毛片七仙女欲春2| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲人成网站高清观看| 26uuu在线亚洲综合色| 美女高潮的动态| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 99久国产av精品国产电影| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 99久久无色码亚洲精品果冻| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 丰满乱子伦码专区| 桃色一区二区三区在线观看| 国产精品1区2区在线观看.| 亚洲自偷自拍三级| 久久草成人影院| 亚洲成人久久性| 69av精品久久久久久| 青春草视频在线免费观看| 在线观看一区二区三区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 白带黄色成豆腐渣| 国产成人福利小说| 日本三级黄在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲在久久综合| 一边亲一边摸免费视频| 国产久久久一区二区三区| 此物有八面人人有两片| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲欧美日韩东京热| 五月玫瑰六月丁香| 特大巨黑吊av在线直播| 寂寞人妻少妇视频99o| 成人漫画全彩无遮挡| 久久精品国产亚洲av天美| 国产爱豆传媒在线观看| 91久久精品国产一区二区成人| kizo精华| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 亚洲av免费高清在线观看| 国产毛片a区久久久久| 久久久久久大精品| 久久久a久久爽久久v久久| 欧美日韩精品成人综合77777| 热99re8久久精品国产| 在线a可以看的网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 亚洲丝袜综合中文字幕| 国产成人91sexporn| 干丝袜人妻中文字幕| 久久热精品热| 成人无遮挡网站| 亚洲欧美成人精品一区二区| 在线免费观看的www视频| 秋霞在线观看毛片| 免费观看在线日韩| 国产黄色小视频在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| 国产精品三级大全| 亚洲,欧美,日韩| 成人午夜高清在线视频| 人体艺术视频欧美日本| 成人性生交大片免费视频hd| 国产极品天堂在线| 国产v大片淫在线免费观看| 少妇被粗大猛烈的视频| 最近最新中文字幕大全电影3| 黑人高潮一二区| 亚洲丝袜综合中文字幕| 日韩三级伦理在线观看| 成年av动漫网址| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲七黄色美女视频| 一级毛片aaaaaa免费看小| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 久久精品国产亚洲网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 午夜福利在线观看吧| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 国产精品久久久久久av不卡| av在线蜜桃| 少妇人妻精品综合一区二区 | 日韩 亚洲 欧美在线| 国产精品一区二区性色av| 午夜福利视频1000在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 麻豆乱淫一区二区| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲精品国产av成人精品| 边亲边吃奶的免费视频| 在线免费观看不下载黄p国产| 久久99蜜桃精品久久| 精品久久久久久成人av| 亚洲国产欧美在线一区| 国产伦理片在线播放av一区 | 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 久久久久久久久久久免费av| 好男人在线观看高清免费视频| 久久这里只有精品中国| 日本一二三区视频观看| 伦理电影大哥的女人| 国产黄色小视频在线观看| 国产探花在线观看一区二区| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 久久人人爽人人爽人人片va| 级片在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 中文字幕制服av| 久久99蜜桃精品久久| 在线免费观看不下载黄p国产| 91久久精品电影网| 午夜免费激情av| 成年版毛片免费区| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲性久久影院| 亚洲精品国产成人久久av| 亚洲在线自拍视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 久久精品夜色国产| 精品熟女少妇av免费看| 97热精品久久久久久| 伦理电影大哥的女人| 国产精品久久久久久av不卡| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 人妻系列 视频| 久久这里只有精品中国| 国产av麻豆久久久久久久| 精品免费久久久久久久清纯| 国产熟女欧美一区二区| 国产日本99.免费观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 国产老妇女一区| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 免费人成视频x8x8入口观看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 女人被狂操c到高潮| 我的女老师完整版在线观看| 中文字幕av在线有码专区| 亚洲国产精品成人综合色| av在线蜜桃| 国产单亲对白刺激| 黑人高潮一二区| 国产午夜精品论理片| 成人无遮挡网站| 亚洲精品自拍成人| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲精品粉嫩美女一区| 大香蕉久久网| 国产真实乱freesex| 婷婷色综合大香蕉| 中文字幕久久专区| 日日干狠狠操夜夜爽| 寂寞人妻少妇视频99o| 成人二区视频| 亚洲国产欧美在线一区| 国产成人freesex在线| 毛片女人毛片| 久久国产乱子免费精品| 99热这里只有是精品50| 天美传媒精品一区二区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 男人狂女人下面高潮的视频| 亚洲国产欧美在线一区| 久久鲁丝午夜福利片| 亚洲欧美日韩高清专用| 精华霜和精华液先用哪个| 黄色欧美视频在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 久久久久免费精品人妻一区二区| 最近手机中文字幕大全| 国产三级在线视频| 日本一本二区三区精品| 午夜亚洲福利在线播放| av在线蜜桃| 成人亚洲精品av一区二区| 国产成人福利小说| 看十八女毛片水多多多| 午夜激情福利司机影院| 高清日韩中文字幕在线| 欧美+日韩+精品| 99久久精品国产国产毛片| 深夜a级毛片| 成人综合一区亚洲| 日韩av在线大香蕉| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲最大成人av| 在线天堂最新版资源| 久久久国产成人精品二区| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 国产成人精品久久久久久| 亚洲精品456在线播放app| 久久人人爽人人爽人人片va| 伦理电影大哥的女人| 午夜激情欧美在线| 久久久成人免费电影| 中文资源天堂在线| 国内精品宾馆在线| 少妇丰满av| 国产午夜精品一二区理论片| 插阴视频在线观看视频| 亚洲国产精品sss在线观看| 联通29元200g的流量卡| av卡一久久| 蜜臀久久99精品久久宅男| 国产高清三级在线| 国产高清有码在线观看视频| 国产乱人视频| 又爽又黄a免费视频| 成人漫画全彩无遮挡| 不卡一级毛片| 国产精品久久电影中文字幕| 我要看日韩黄色一级片| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 欧美三级亚洲精品| 国产精品久久久久久久久免| 亚洲欧洲日产国产| 欧美日韩综合久久久久久| 桃色一区二区三区在线观看| 国产亚洲91精品色在线| 一个人看的www免费观看视频| 国产日本99.免费观看| 亚洲自偷自拍三级| 免费无遮挡裸体视频| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产精品一区二区三区四区久久| 亚洲性久久影院| 在线观看午夜福利视频| 身体一侧抽搐| 久久精品国产亚洲网站| 最新中文字幕久久久久| 99精品在免费线老司机午夜| 久久午夜福利片| 国产乱人视频| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 日韩一区二区视频免费看| 日韩av在线大香蕉| 国产亚洲5aaaaa淫片| 精品久久久久久久久久免费视频| 欧美激情在线99| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 欧美一级a爱片免费观看看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 亚洲乱码一区二区免费版| 欧美潮喷喷水| 在线观看午夜福利视频| 婷婷色综合大香蕉| kizo精华| 亚洲国产色片| 高清日韩中文字幕在线| www.av在线官网国产|