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    不同方法檢測(cè)布魯氏菌抗體的比較分析

    2018-01-05 03:19:28羅成群
    中國(guó)畜牧獸醫(yī)文摘 2017年11期
    關(guān)鍵詞:布病布魯氏菌符合率

    羅成群

    (重慶市涪陵區(qū)焦石鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,重慶 408000)

    不同方法檢測(cè)布魯氏菌抗體的比較分析

    羅成群

    (重慶市涪陵區(qū)焦石鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站,重慶 408000)

    隨機(jī)采集重慶市涪陵區(qū)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的規(guī)模養(yǎng)殖戶和散養(yǎng)農(nóng)戶14085份牛、羊血清,采用RBPT、SAT和ELISA 方法對(duì)布病非免疫抗體進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,采用RBPT方法檢測(cè)出陽(yáng)性81份,陽(yáng)性率為0.57%,SAT檢測(cè)出陽(yáng)性78份,陽(yáng)性率為0.55%,ELISA檢測(cè)出陽(yáng)性73份,陽(yáng)性率為0.52%。結(jié)果表明SAT和ELISA檢測(cè)方法具有較高的敏感性,在實(shí)際工作中,可采用RBPT方法對(duì)布病進(jìn)行初篩,SAT和ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行確診,本研究為本地區(qū)牛、羊布病防控、凈化工作提供了依據(jù)。

    布魯氏菌 檢測(cè)方法 RBPT SAT ELISA

    布魯氏菌病(brucellosis)以下簡(jiǎn)稱“布病”,是由布魯氏菌引起的一種廣泛分布于世界各地的人畜共患的傳染病,以生殖器官和胎膜發(fā)炎、母畜流產(chǎn)、不孕和公畜睪丸炎為主要臨床特征。據(jù)報(bào)道,在全世界現(xiàn)有的200多國(guó)家地區(qū)中,有布病報(bào)到的就有170個(gè),30多個(gè)國(guó)家尚未報(bào)告有布病發(fā)生,還有16個(gè)國(guó)家和地區(qū)宣布沒有或已經(jīng)控制布病,而美國(guó)目前人間發(fā)病率仍在1/10萬(wàn)以上,對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)和人類健康造成了很大危害。

    近年來(lái),國(guó)內(nèi)外對(duì)布病系統(tǒng)性的研究有近150年的歷史,其間開發(fā)了許多布病體外和體內(nèi)診斷方法,這些診斷方法服務(wù)于不同的應(yīng)用目的,例如:證實(shí)疫情發(fā)生、全國(guó)性普查、確診、國(guó)際貿(mào)易檢測(cè)以及“無(wú)布病”地區(qū)的布病監(jiān)測(cè)等等,如何選擇診斷策略取決于布病的流行狀況及檢測(cè)的目的。目前常用的檢測(cè)方法有:平板凝集試驗(yàn)(PAT)、虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)、試管凝集試驗(yàn)(SAT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、聚合酶鏈反應(yīng)試驗(yàn)(PCR)等。

    本研究采用虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)、試管凝集試驗(yàn)(SAT)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等常用的血清學(xué)檢測(cè)方法對(duì)布病非免疫抗體進(jìn)行檢測(cè),以明確不同方法檢測(cè)的敏感性和特異性,以便以后針對(duì)性地選擇使用檢測(cè)方法提供依據(jù),從而為我區(qū)布病的防控、凈化工作提供技術(shù)支撐。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    (1)試驗(yàn)試劑 布病虎紅平板凝集抗原、布病陽(yáng)性血清、布病試管凝集抗原,青島易邦生物工程有限公司生產(chǎn):布病競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)抗體檢測(cè)試劑盒,哈爾濱平河生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品。

    (2)血清來(lái)源14085份血清均為2014年~2016年5月采自重慶市涪陵區(qū)各鄉(xiāng)鎮(zhèn)規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)和散養(yǎng)農(nóng)戶。

    1.2 方法

    (1)虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)、試管凝集試驗(yàn)(SAT)

    (2)競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行

    2 試驗(yàn)結(jié)果

    2.1 布病陽(yáng)性檢測(cè)率

    14085份牛、羊血清樣品,采用RBPT方法檢測(cè)出陽(yáng)性81份,陽(yáng)性率為0.57%,SAT方法檢測(cè)出陽(yáng)性78份,陽(yáng)性率為0.55%,ELISA方法檢測(cè)出陽(yáng)性73份,陽(yáng)性率為0.52%。具體監(jiān)測(cè)結(jié)果見表1。

    表1 不同檢測(cè)方法對(duì)布病的陽(yáng)性檢測(cè)率

    2.2 不同檢測(cè)方法的符合率

    14085份血清樣品,采用RBPT、SAT、競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè),采用RBPT方法檢測(cè)出陽(yáng)性81份;SAT檢測(cè)出陽(yáng)性78份,其中3份為RBPT檢測(cè)的陽(yáng)性血清樣品;競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)出陽(yáng)性73份,其中8份為RBPT檢測(cè)的陽(yáng)性血清樣品,5份為SAT檢測(cè)的陽(yáng)性血清樣品。結(jié)果顯示SAT和RBPT檢測(cè)方法的結(jié)果符合率為96.3%,競(jìng)爭(zhēng)ELISAR和BPT結(jié)果符合率為90.1%,競(jìng)爭(zhēng)ELISA和SAT結(jié)果符合率為93.59%。

    3 討論

    本試驗(yàn)通過(guò)對(duì)14085份牛、羊血清布病非免疫抗體進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果發(fā)現(xiàn)三種檢測(cè)方法中,ELISA敏感性最高,而SAT檢測(cè)方法的敏感性也優(yōu)于PBPT。

    血清學(xué)試驗(yàn):主要檢測(cè)血清或乳中的布魯氏菌抗體。平板凝集試驗(yàn)(PAT)是布病血清學(xué)診斷的常規(guī)方法之一,通常用于布病普查的初篩,但PAT法有時(shí)可出現(xiàn)非特異性凝集,在基層獸醫(yī)檢測(cè)中已經(jīng)不適用PAT方法;目前RBPT是許多國(guó)家布病普查的常規(guī)方法之一,RBPT法檢出率與PAT基本一致,略低于SAT檢查感染動(dòng)物血清的陽(yáng)性率,但一般來(lái)說(shuō),RBPT 并不能與 SAT、PAT、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)等相互替代,最好采取綜合診斷,主要用于布病早期診斷。

    SAT一直是許多國(guó)家布病診斷的常規(guī)血清學(xué)方法,我國(guó)家畜布病檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)就是用SAT作為復(fù)核診斷方法。但單獨(dú)應(yīng)用SAT,可能出現(xiàn)假陽(yáng)性或假陰性反應(yīng),同時(shí)并不是所有感染動(dòng)物都出現(xiàn)具有診斷意義的抗體水平,因而易造成誤診和漏診。

    ELISA是目前比較通用的血清學(xué)檢測(cè)方法,特異性、敏感性強(qiáng),是國(guó)際貿(mào)易指定試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)證實(shí)ELISA試驗(yàn)較SAT敏感性高10~100倍,是布病診斷中不可缺少的方法之一。

    在實(shí)際操作過(guò)程中,RBPT操作簡(jiǎn)便并且用時(shí)短,SAT出現(xiàn)結(jié)果時(shí)間較長(zhǎng),是實(shí)驗(yàn)員肉眼觀察判定結(jié)果,具有很大的主觀性,ELISA方法監(jiān)測(cè)布病,操作便捷,敏感性高,結(jié)果更為準(zhǔn)確,因此在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)把三種方法結(jié)合起來(lái)運(yùn)用,互補(bǔ)優(yōu)劣。先用RBPT篩選,對(duì)疑似陽(yáng)性樣品再用SAT以及ELISA復(fù)檢進(jìn)行確診,從而達(dá)到布病防控和凈化的目的。

    [1] 黎銀軍.我國(guó)布魯氏菌病時(shí)空分布及風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)研究[D].中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院,2013.

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