雙參口服液中總黃酮和總皂苷的含量測定①

宋琳琳，胡曉艷，胡曉冬，馬麗文，駱宇鑫，張 潔

(佳木斯大學藥學院，黑龍江 佳木斯 154007)

雙參口服液中總黃酮和總皂苷的含量測定①

宋琳琳，胡曉艷，胡曉冬，馬麗文，駱宇鑫，張 潔

(佳木斯大學藥學院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：探討雙參口服液中總黃酮和總皂苷的最佳提取工藝，并測定雙參口服液中總黃酮和總皂苷的含量。方法：采用正交試驗法進行總黃酮和總皂苷的最佳提取工藝的研究，采用紫外分光光度法，以總黃酮和總皂苷含量為指標，在510nm波長和536nm波長處對雙參口服液中總黃酮和總皂苷進行含量測定。結(jié)果：雙參口服液中總黃酮的最佳提取工藝為：樣品比例為3:2:1(黨參：沙參：玉竹)，料液比1:5，乙醇濃度80%，提取溫度60℃，提取時間為50min時，總黃酮的平均含量最高可達為1.464mg·g-1；雙參口服液中總皂苷的最佳提取工藝為：樣品比例為3:2:1(黨參：玉竹：沙參)，料液比3:25，浸泡時間48h，乙醇濃度60%時，總皂苷的平均含量最高可達0.344mg·g-1。結(jié)論：雙參口服液中總黃酮和總皂苷采的提取工藝是可行的并且含量較高。

雙參口服液；總黃酮；總皂苷；含量測定

雙參口服液是由沙參、黨參和玉竹等藥材加工制成的復方制劑。玉竹為百合科黃精屬植物玉竹[1](Polygonatum odoratum(Mill)Druce)的干燥根莖，該植物含有各種豐富的多糖、黃酮、甾體皂苷[2,3]等化學成分，具有擴張血管、延緩衰老、提高免疫功能、降糖和降壓的作用[4～6]。黨參(Codonopsis pilosula(Franch) Nannf)為多年生草本植物，屬桔?？疲幱酶稍锔?。其主要成分為多糖、黃酮以及皂苷等成分，起到降低血壓、降低血糖血脂、抗衰老[7]、抗腫瘤[8]等多種作用。沙參(Adenophora stricta Miq)多年生草本植物，屬桔梗科，具有祛痰作用、抗真菌作用、強心作用。因此，通過前期研究得到啟發(fā)，繼續(xù)對它們的其他主要的活性成分黃酮和皂苷進行最佳工藝提取及含量測定，為雙參口服液復方制劑的進一步藥理作用的研究提供了一定的基礎(chǔ)。

1 實驗材料

1.1 藥材來源

玉竹、沙參、黨參等藥材購于黑龍江省佳木斯市藥店。

1.2 材料

儀器：KDM電加熱套；FA2004電子分析天平；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器；UV-765紫外可見分光光度計；試劑：化學試劑均為分析純；無水乙醇；冰乙酸；石油醚；正丁醇；香蘭素；高氯酸；蘆丁標準品(成都植標化純生物技術(shù)有限公司)；人參皂苷標準品(成都植標化純生物技術(shù)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 雙參口服液中總黃酮的提取工藝

為優(yōu)化提取工藝條件，制定正交實驗方案，本實驗采取正交實驗，以確定最佳工藝條件，選用因素及水平見表1，最佳工藝條件見表2。

表1 正交實驗影響因素水平表

表2 雙參口服液總黃酮正交實驗提取結(jié)果

對表2進行直觀分析可知，各因素對黃酮提取率影響的主次順序為料液比A>乙醇濃度B>超聲提取溫度C>超聲提取時間D。因此，可以得到最佳的提取工藝條件為A2B3C3D3，即料液比1:5，乙醇濃度80%，提取溫度60℃，提取時間為50min。

2.2 雙參口服液中總黃酮的含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取蘆丁對照品20.0mg，并于120℃干燥至恒重后備用。將干燥后的對照品置于100mL具塞容量瓶中，加入適量60%乙醇，并將其溶解，放冷后用60%乙醇稀釋至刻度，搖勻備用。

2.2.2 供試品液的制備

以黨參：沙參：玉竹=3:2:1的比例稱取12g藥材，在最佳提取工藝條件下制得供試品液。

2.2.3 吸收波長的選擇

吸取適量對照品溶液和供試品溶液，并將其分別置于25mL容量瓶中備用；加5%亞硝酸鈉溶液(m/v)1.0mL，搖勻，放置6min；加入10%硝酸鋁溶液(m/v)1.0mL，搖勻，放置6min；加1mol/L氫氧化鈉溶液10.0mL，加60%乙醇(v/v)至刻度，搖勻，放置15min。通過全波長掃描，結(jié)果在510nm處呈現(xiàn)最大吸收峰，故檢測波長為510nm。

2.2.4 標準曲線的繪制

精密吸取蘆丁對照品溶液0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL分別置于25mL容量瓶中；加5%亞硝酸鈉溶液(m/v)1.0mL，搖勻，放置6min；加入10%硝酸鋁溶液(m/v)1.0mL，搖勻，放置6min；加1mol/L氫氧化鈉溶液10.0mL，加60%乙醇(v/v)至刻度，搖勻，放置15min。于510nm處測定其吸光度，以蘆丁標準品質(zhì)量濃度C(mg/mL)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標，得到標準曲線的線性回歸方程為y=9.8679x- 0.00358，R2=0.9964。

2.2.5 總黃酮的含量測定

精密吸取供試品溶液5份，每份5.0mL于25mL容量瓶中，按照蘆丁對照品含量測定項下方法測定其吸光度，以蘆丁作參照物利用回歸方程求得濃度C。計算總黃酮的含量。經(jīng)計算，求得供試品中總黃酮的平均含量為1.464mg·g-1。

2.2.6 精密度試驗

按照標準曲線繪制方法，精密吸取供試品溶液5.0mL，測定吸光度A值，平行測定5次。測得RSD為0.51%<2%，表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗

按照供試品溶液的制備及標準曲線的繪制方法，精密吸取供試品溶液5mL，每隔10min測定一次，結(jié)果7次吸光度值基本不變，RSD=1.72%<2%，因此供試品在60min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3 雙參口服液中總皂苷的提取工藝

為優(yōu)化提取工藝條件，制定正交實驗方案，本實驗采取正交實驗，以確定最佳工藝條件，選用因素及水平見表3，最佳工藝條件見表4。

表3 正交實驗影響因素水平表

表4 雙參口服液總皂苷正交實驗提取結(jié)果

對表4進行直觀分析可知，各因素對皂苷提取率影響的主次順序為浸泡時間B>乙醇濃度C >料液比A最優(yōu)的提取工藝條件為A1B3C2，即料液比3:25，浸泡時間48h，乙醇濃度60%。

2.3.1 對照品溶液的制備

精密吸取人參皂苷對照品0.0026g，用60%的乙醇溶液溶解于10mL容量瓶中，搖勻備用。

2.3.2 供試品液的制備

以黨參：玉竹：沙參=3:2:1的比例稱取6g藥材，加入乙醇溶液浸泡，過濾，揮干溶劑，加蒸餾水使之約為10mL溶液，加入等量石油醚萃取3次(共約30mL)，下層用等量正丁醇萃取3次(共約30mL)，合并正丁醇萃取液，揮干正丁醇，用60%乙醇溶解定容于50mL容量瓶中，得樣品液。取樣品液0.1mL于試管中，揮干溶劑，精密吸取0.8mL高氯酸和0.2mL5%的香草醛-冰醋酸溶液，將兩種溶液置于60℃水浴加熱30min后，立即冷卻，加入5mL冰醋酸，室溫放置30min，以60%的乙醇溶液為空白對照。

2.3.3 標準曲線的繪制

精密量取標準品溶液0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL于10mL試管中，精密吸取0.8mL高氯酸和0.2mL 5%的香草醛-冰醋酸溶液兩種溶液，60℃水浴加熱30min后，立即冷卻，加入5mL冰醋酸，室溫放置30min，以60%的乙醇溶液為空白對照。通過全波長掃描，結(jié)果對照品和供試品在536nm處呈現(xiàn)最大吸收峰，故檢測波長為536nm處測定吸光度A值。以人參皂苷標準品質(zhì)量濃度C(mg/mL)為橫坐標，吸光度(A)為縱坐標，得到標準曲線的線性回歸方程為y=18.801x- 0.0052，R2=0.9955。

2.3.4 總皂苷的含量測定

精密吸取供試品溶液0.1mL于試管中，平行5份，按人參皂苷標準品項下操作，測定其吸光度，計算總皂苷的含量。經(jīng)計算，求得供試品中總皂苷的平均含量為0.344mg·g-1。

2.3.5 精密度試驗

精密吸取供試品溶液0.1mL于試管中，按人參皂苷標準品項下操作，測定吸光度A值，平行測定5次。測得RSD為0.9%<2%，表明儀器精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗

精密吸取供試品溶液0.1mL于試管中，按人參皂苷標準品項下操作，每隔30min測定一次。結(jié)果5次吸光度值基本不變，結(jié)果為RSD%=1.2%<2%。因此供試品在120min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

3 討論

雙參口服液是由玉竹、沙參、黨參配伍而成，采用超聲等工藝提取，配制而成的中藥復方制劑口服液，具有降血壓、降血脂之功效，為了使產(chǎn)品的質(zhì)量得以保證，本論文采用正交實驗法，系統(tǒng)地考察了料液比、乙醇濃度、超聲溫度、以及超聲時間對口服液總黃酮和總皂苷提取率的影響，摸索出制備工藝的最佳條件為樣品比例為2:1:2(玉竹:沙參:黨參)，超聲時間為50min，超聲溫度為60℃時，多糖的提取率最高。雙參口服液中總黃酮的最佳提取工藝為：樣品比例為3:2:1(黨參：沙參：玉竹)，料液比1:5，乙醇濃度80%，提取溫度60℃，提取時間為50min時，總黃酮的平均含量最高可達為1.464mg·g-1；雙參口服液中總皂苷的最佳提取工藝為：樣品比例為3:2:1(黨參：玉竹：沙參)，料液比3:25，浸泡時間48h，乙醇濃度60%時，總皂苷的平均含量最高可達0.344mg·g-1。

綜上所述，雙參口服液多糖的提取采用超聲波提取法，工藝合理，含量較高，我們以總皂苷和總黃酮含量為指標，更科學地優(yōu)選雙參口服液的提取工藝，為其復方制劑的藥理作用研究提供一定的參考依據(jù)。

[1]國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典 (一部)[S]. 北京：化學工業(yè)出版社，2005:199

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[4]李海明, 白虹, 李巍, 等. 玉竹化學成分研究[J]. 食品與藥品, 2010，12(3):102-104

[5]張運良, 張艷軍, 朱琪. 玉竹黃酮超聲輔助提取工藝研究[J]. 廣東化工,2015, (17):78-86

[6]楊志輝, 劉仲華, 歐迪軍, 等. 玉竹總黃酮提取工藝研究[C]. 2010植物提取物與營養(yǎng)及應(yīng)用技術(shù)交流研討會論文集, 2010

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1.國家自然科學基金項目,編號：No.21271089；2.黑龍江省大學生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓練計劃項目，編號：201510222036；3.佳木斯大學科學技術(shù)研究項目，編號：13Z1201561。

宋琳琳(1982～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，講師。

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1008-0104(2017)06-0011-03

2017-03-15)