ERCC1聯(lián)合TYMS檢測(cè)對(duì)晚期胃癌化療的指導(dǎo)意義

陸麗娜 蔣國法 李崗秀 李勝安 陳慧 黃偉

ERCC1聯(lián)合TYMS檢測(cè)對(duì)晚期胃癌化療的指導(dǎo)意義

陸麗娜 蔣國法 李崗秀 李勝安 陳慧 黃偉

目的 通過檢測(cè)胃癌組織中切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（ERCC1）、胸苷酸合成酶基因（TYMS）mRNA的表達(dá)水平，分析其對(duì)化療效果及預(yù)后的指導(dǎo)意義。方法 選取晚期胃癌患者60例，均給予氟尿嘧啶、亞葉酸鈣聯(lián)合奧沙利鉑進(jìn)行化療。采用分支DNA-液相芯片技術(shù)定量檢測(cè)胃癌組織ERCC1、TYMS mRNA表達(dá)水平，并將患者分為ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組、ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組、ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組。隨訪3年，觀察并比較3組患者的化療有效率及生存率。結(jié)果 3組患者化療有效率分別為62.86%（22/35）、35.71%（5/14）、36.36%（4/11），差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；中位生存時(shí)間分別為20、10、10.5個(gè)月，1年生存率分別為65.71%、38.46%、40.00%，2年生存率分別為37.14%、0.00%、10.00%，3年生存率分別為14.29%、0.00%、0.00%，ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組患者1、2、3年生存率均高于另外兩組（均P＜0.05）。結(jié)論 晚期胃癌患者應(yīng)用氟尿嘧啶、亞葉酸鈣、奧沙利鉑聯(lián)合化療，ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)的患者生存率優(yōu)于僅其中1個(gè)基因高表達(dá)的患者，而化療效果差異尚不明顯。

胃癌 液相芯片技術(shù)化療 ERCC1 TYMS

胃癌是最常見的消化道腫瘤之一，數(shù)據(jù)顯示國人胃癌發(fā)病率為31.38/10萬，病死率高達(dá)22.13/10萬[1]。多數(shù)胃癌患者確診時(shí)已是癌癥晚期，無法行根治性手術(shù)，全身化療成為其主要的治療措施。然而，晚期胃癌化療有效率低于50%，5年生存率低于7%，臨床療效十分有限[2]。如何預(yù)測(cè)化療效果，減少無效化療及不良反應(yīng)的發(fā)生是臨床關(guān)注的焦點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，胃癌化療效果除與藥物作用機(jī)制有關(guān)外，還與藥敏相關(guān)基因有密切關(guān)系[3]。切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1（excision repair cross complement 1，ERCC1）是核苷酸切除修復(fù)系統(tǒng)中的關(guān)鍵基因，是奧沙利鉑敏感性的生物標(biāo)志[4]，ERCC1低表達(dá)的胃癌患者對(duì)奧沙利鉑化療敏感[5-6]。胸苷酸合成酶基因（thymidylate synthase，TYMS）編碼的胸苷酸合成酶是腫瘤生長(zhǎng)的重要因子，與胃腸腫瘤均有密切關(guān)系[7]，TYMS高表達(dá)與患者對(duì)化療的敏感性及預(yù)后均存在負(fù)相關(guān)[8]?；诖?，本研究聯(lián)合檢測(cè)胃癌組織中ERCC1、TYMS mRNA的表達(dá)水平，分析其對(duì)化療效果及預(yù)后的指導(dǎo)意義，以期為晚期胃癌個(gè)體化化療提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取2013年1月至2014年3月本院消化內(nèi)科收治的晚期胃癌患者60例，其中男34例，女26例；年齡40～75歲，中位年齡65歲?；颊呔?jīng)胃鏡活檢病理確診為胃癌，腫瘤分期參照2010年美國腫瘤聯(lián)合會(huì)（AJCC）胃癌TNM分期標(biāo)準(zhǔn)。納入患者均無重要臟器功能損害，預(yù)計(jì)生存期≥6個(gè)月。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者及家屬知情同意并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1化療方案 患者均給予氟尿嘧啶、亞葉酸鈣聯(lián)合奧沙利鉑進(jìn)行化療[13]。奧沙利鉑（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字：H20000337）130 mg/m2靜脈滴注，第1天給藥；氟尿嘧啶（上海旭東海普藥業(yè)有限公司，國藥準(zhǔn)字：H31020593）750mg/m2靜脈滴注，第 1～5天給藥；亞葉酸鈣（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，國藥準(zhǔn)字：H20000584）200 mg/m2靜脈滴注，第 1～5 天給藥；3周為1個(gè)周期。每例患者至少完成2個(gè)周期。

1.2.2 檢測(cè)胃癌組織ERCC1、TYMS mRNA表達(dá)水平采用分支DNA-液相芯片技術(shù)定量檢測(cè)胃癌組織ERCC1、TYMS mRNA表達(dá)水平。具體方法：將患者病理活檢組織樣本置于勻漿緩沖液中混勻，對(duì)樣本進(jìn)行裂解處理，離心后吸取上清液。將配制的mRNA固定液加入雜交板，將上清液加入雜交板中后孵育，已便捕獲樣本mRNA。通過離心及真空抽濾裝置清理雜交板中多余液體并洗滌。將標(biāo)記探針工作液加入濾板并孵育，使mRNA信號(hào)放大，再次抽真空并洗滌后用Luminex200TM系統(tǒng)（美國Luminex公司）檢測(cè)，得出每個(gè)樣本的熒光值。將所得原始熒光值予以校正和均一化處理后得到netMFI值（以百分?jǐn)?shù)表示），根據(jù)netMFI值將ERCC1、TYMS mRNA表達(dá)水平分為高、中、低3類，低表達(dá)指netMFI值＜25%，中表達(dá)指25%≤netMFI值≤75%，高表達(dá)指netMFI值＞75%。根據(jù)ERCC1、TYMS mRNA表達(dá)水平將患者分為3組，分別為ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組、ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組、ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組。

1.3 療效評(píng)價(jià) 隨訪3年，觀察并比較3組患者的化療有效率及生存率。療效評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)：（1）完全緩解：所有靶病灶完全消失。（2）部分緩解：所有靶病灶長(zhǎng)徑總和減少≥30%。（3）疾病穩(wěn)定：變化介于完全緩解和部分緩解之間。（4）療效不佳或疾病進(jìn)展：所有靶病灶長(zhǎng)徑總和增加≥20%，并且長(zhǎng)徑總和增加的絕對(duì)值≥5mm，或出現(xiàn)新的病灶。完全緩解及部分緩解視為有效，疾病穩(wěn)定及療效不佳或疾病進(jìn)展視為未緩解。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SAS 9.3統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以頻數(shù)和構(gòu)成比表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法估計(jì)生存率并繪制生存曲線，生存率的比較采用log-rank檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 患者胃癌組織ERCC1、TYMS mRNA表達(dá)情況 本組患者胃癌組織ERCC1 mRNA高、中、低表達(dá)分別為11例（18.33%）、27例（45.00%）、22例（36.67%）；TYMS mRNA高、中、低表達(dá)分別為14例（23.33%）、32例（53.33%）、14例（23.34%）。ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組患者35例（58.33%），ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組14例（23.33%），ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組11例（18.33%）。

2.2 3組患者化療有效率比較 ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組化療有效率為62.86%（22/35），ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組化療有效率為35.71%（5/14），ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組化療有效率為36.36%（4/11）。3組患者化療有效率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

2.3 3組患者生存率比較 患者全部完成3年隨訪，無失訪病例。3組患者生存曲線比較見圖1。

圖1 3組患者生存曲線比較

由圖1可見，ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組、ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組、ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組患者的中位生存時(shí)間為20、10、10.5個(gè)月。該3組患者1年生存率分別為65.71%、38.46%、40.00%，2年生存率分別為 37.14%、0.00%、10.00%，3年生存率分別為 14.29%、0.00%、0.00%；ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組患者1、2、3年生存率均高于ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組、ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組（均P＜0.05），而ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組、ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組1、2、3年生存率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（均P＞0.05）。

3 討論

晚期胃癌患者最基本的治療方式為姑息性化療，但目前仍尚無標(biāo)準(zhǔn)的化療方案，二聯(lián)化療是常用的治療方案。鉑類化合物聯(lián)合氟尿嘧啶類是目前最常用的一線化療方案。近年來，聯(lián)用蒽環(huán)類或多西紫杉醇組成的ECF、EOX、DCF方案進(jìn)行的臨床試驗(yàn)研究中，患者有少許生存獲益[9]。然而，這些方案有可能會(huì)增加化療毒副反應(yīng)，所以通常推薦用于基礎(chǔ)狀態(tài)較好的患者。胃癌的病因復(fù)雜、異質(zhì)性大、患者生存時(shí)間短、化療有效率低，因此實(shí)現(xiàn)個(gè)體化化療將有助于進(jìn)一步提高化療療效，改善預(yù)后。

藥物耐藥是導(dǎo)致晚期胃癌化療失敗的主要原因，隨著對(duì)腫瘤耐藥機(jī)制研究的深入，越來越多的耐藥基因受到關(guān)注。研究表明，ERCCl與奧沙利鉑耐藥相關(guān)[10]。TYMS是編碼氟尿嘧啶重要靶酶-胸苷酸合成酶的基因，因此腫瘤細(xì)胞內(nèi)TYMS表達(dá)水平影響氟尿嘧啶的敏感性[11]。本研究旨在通過聯(lián)合檢測(cè)晚期胃癌患者ERCC1、TYMS mRNA的表達(dá)水平，來探討基因檢測(cè)對(duì)制定個(gè)體化治療方案的指導(dǎo)意義。

本研究患者均給予氟尿嘧啶、亞葉酸鈣、奧沙利鉑聯(lián)合化療。結(jié)果顯示，ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組化療有效率為62.86%，ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組化療有效率為35.71%，ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組化療有效率為36.36%。3組患者化療有效率比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組、ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組、ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組患者的中位生存時(shí)間為20、10、10.5個(gè)月。該3組患者1年生存率分別為65.71%、38.46%、40.00%，2年生存率分別為 37.14%、0.00%、10.00%，3年生存率分別為14.29%、0.00%、0.00%；ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)組患者1、2、3年生存率均高于ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組、ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組，而ERCC1中低表達(dá)及TYMS高表達(dá)組、ERCC1高表達(dá)及TYMS中低表達(dá)組1、2、3年生存率比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。本研究結(jié)果與駱玉霜等[12]的研究結(jié)果基本一致，但筆者認(rèn)為可以擴(kuò)大樣本量做進(jìn)一步觀察。

本研究尚存在一些不足，首先樣本量偏?。黄浯?，尚有重要的腫瘤耐藥相關(guān)基因未進(jìn)行檢測(cè)，如與鉑類相關(guān)的BRCA1基因，與紫杉醇類藥物相關(guān)的TUBB3和STMN1基因[13]，以及與赫賽汀相關(guān)的HER-2基因[14]等；另外，本研究主要集中在mRNA水平的基因表達(dá)方面，而對(duì)基因蛋白水平尚未涉及。未來將進(jìn)一步對(duì)這些基因的結(jié)構(gòu)、蛋白功能以及耐藥相關(guān)機(jī)制等進(jìn)行研究，聯(lián)合其它靶基因檢測(cè)，尋找更有效的個(gè)體化化療方案。

綜上所述，晚期胃癌患者應(yīng)用氟尿嘧啶、亞葉酸鈣、奧沙利鉑聯(lián)合化療，ERCC1和TYMS共同中低表達(dá)的患者生存率優(yōu)于僅其中1個(gè)基因高表達(dá)的患者，而化療效果差異尚不明顯。這提示臨床或可根據(jù)多基因聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果制定晚期胃癌患者個(gè)體化化療方案，改善患者預(yù)后。

[1] 張思維,楊之洵,鄭榮壽,等.2013年中國胃癌發(fā)病與死亡分析[J].中華腫瘤雜志,2017,39(7):547-552.

[2] 劉芳,趙金波,楊曉燕,等.周劑量紫杉醇聯(lián)合低劑量5-Fu持續(xù)輸注二線治療晚期胃癌[J].大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2008,30(3):242-244.

[3] 帥曉明,韓高雄,陳俊華,等.胃癌體外藥敏試驗(yàn)與多藥耐藥基因、多藥耐藥相關(guān)蛋白表達(dá)的關(guān)系[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2006,23(10):1218-1220.

[4] Li P,Fang Y J,Li F.ERCC1,defective mismatch repair status as predictive biomarkers of survical for stageⅢcolon cancer patients receiving oxaliplatin-based adjuvant chemotherapy[J].Br J Cancer,2013,108(6):1238-1244.

[5] Kwon H C,Roh M,Oh S,et al.Prognostic value of expression of ERCC1,thymidylate synthase,and glutathione S-transferase P1 for 5-fluorouracil/oxaliplatin chemotherapy in advanced gastric cancer[J].Annals of Oncology,2007(18):504-509.

[6] Matsubara J,Nishina T,Yamada Y,et al.Impacts of excision repair cross complementing gene 1(ERCCl),dihydropyrimidine dehydrogenase,and epidermal growth factor receptor on the outcomes of patients with advanced gastric cancer[J].Br J Cancer,2008,98(4):832-839.

[7] 張鳳岐,沈燕,王珊珊,等.外周血中TYMS和ERCC1基因多態(tài)性對(duì)胃腸道腫瘤患者化療療效的評(píng)估[J].腫瘤防治研究,2014,41(8):906-911.

[8] Baroudi O,Baroudi T,Omrane I,et al.Thymidylate synthase-poly-morphism in sporadic colorectal and gastric cancer in Tunisian population:a predictive role in 5-fluorouracil based chemotherapy treatment[J].Med Oncol,2014,31(2):825.

[9] Yun J,Lee J,Park S H,et al.A randomised Phase 2 study of combi-nation chemotherapy with epirubicin cisplatin and capecitabine(ECX)orcisplatin and capecitabine(CX)in advanced gastric cancer[J].Eur J Cancer,2010,46(5):885-891

[10] Mo J,Luo M,Cui J,et al.Prognostic value of ERCC1 and ERCC2 gene polymorphisms in patients with gastric cancer receivingplatinum-based chemotherapy[J].Int J Clin Exp Pathol,2015,8(11):15065-15071.

[11] Matsusaka S,Lenz H J.Pharmacogenomics of fluorouracilbased chemotherapy toxicity[J].Expert Opin Drug Metab Toxicol,2015,11(5):811-821.

[12] 駱玉霜,格日力,沈存芳,等.晚期胃癌患者ERCC1 TUBB3 TYMS三基因聯(lián)合檢測(cè)指導(dǎo)的DCF方案?jìng)€(gè)體化化療的研究[J].中國腫瘤臨床,2012,39(22):1787-1791.

[13] 劉佳,任宏,呂衛(wèi)東,等.STMN 1m RNA在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)與紫杉醇類藥物化療效果和患者生存率的關(guān)系[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2016,24(19):3066-3069.

[14] 江澤飛,王濤,姚開泰.針對(duì)HER-2的乳腺癌分子靶向藥物赫賽汀治療新動(dòng)向[J].中國實(shí)用內(nèi)科雜志,2005,25(8):681-683.

Association of ERCC1 and TYMS expression with efficacy of adjuvant chemotherapy and prognosis in patients with advanced gastric cancer

LU Lina，JIANG Guofa，LI Gangxiu，et al.
Department of Gastroenterology,Jinhua Wenrong Hospital,Jinhua 321000,China

Objective To investigate the association of expression level of ERCC1 and TYMS mRNA with the efficacy of adjuvant chemotherapy and the prognosis in patients with advanced gastric cancer. Methods Sixty patients with advanced gastric cancer were treated with fluorouracil and leucovorin combined with oxaliplatin-based chemotherapy.The expressions of excision repair cross-complementation group 1(ERCC1)and thymidylate synthase(TYMS)genes in gastric cancer tissue were detected by branch DNA-liquid phase chip technique.According to the gene expression levels,the patients were grouped as moderate/low expression of both ERCC1 and TYMS (group 1),moderate/low expression of ERCC1 and high expression of TYMS(group 2),high expression of ERCC1 and moderate/low expression of TYMS(group 3).After three years of follow-up,the efficacy of chemotherapy and the survival of patients were observed and compared among 3 groups. Results The response rates to chemotherapy in group 1,group 2 and group 3 were 62.86%(22/35),35.71%(5/14)and 36.36%(4/11)(P＞0.05).The median survival time of 3 groups was 20,10 and 10.5 months,1-year survival rates were 65.71%,38.46%and 40.00%,2-year survival rates were 37.14%,0.00%and 10.00%,3-year survival rates were 14.29%,0.00%and 0.00%,respectively.Compared with other two groups,the 1-,2-and 3-year survival rates of patients with group 1 were significantly higher than those of other two groups(all P＜0.05). Conclusion Moderate or low expression of ERCC1 and TYMS is associated with higher survival rate in advanced gastric cancer patients with adjuvant chemotherapy,but not associated with the chemotherapy efficacy.

Gastric cancerLiquid chip technology Chemotherapy ERCC1 TYMS

10.12056/j.issn.1006-2785.2017.39.24.2017-2720

金華市科學(xué)技術(shù)研究計(jì)劃項(xiàng)目（2013-3-020）

321000 金華文榮醫(yī)院消化內(nèi)科

黃偉，E-mail：jhdene65@126.com

2017-11-09）

李媚）