肺腺癌小活檢標(biāo)本EGFR表達(dá)及病理特征分析①

陳秀嬋，鄒陽(yáng)強(qiáng)

(貴州航天醫(yī)院，貴州 遵義 653000)

肺腺癌小活檢標(biāo)本EGFR表達(dá)及病理特征分析①

陳秀嬋，鄒陽(yáng)強(qiáng)

(貴州航天醫(yī)院，貴州 遵義 653000)

目的： 探討肺腺癌表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變的臨床病理特征及在免疫組織化學(xué)(IHC)中EGFR特異性抗體表達(dá)和實(shí)時(shí)熒光定量(PCR)之間的關(guān)系。方法：收集了病理明確確診的187例肺腺癌臨床病例資料，用IHC檢測(cè)EGFR特異性抗體表達(dá)及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)EGFR基因突變。結(jié)果：187例肺腺癌中EGFR基因突變女性高于男性，年齡大于>55歲者高于≤于55歲者，不吸煙者高于吸煙者，肺穿刺標(biāo)本高于纖支鏡活檢標(biāo)本，胸腔鏡下胸膜穿刺組織無(wú)區(qū)別。其中IHC陽(yáng)性69例(36.7%)，PCR C陽(yáng)性61例(32.6%)，有8例IHC陽(yáng)性患者PCR為陰性。以PCR結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)，IHC和PCR符合率為88.4%。結(jié)論：IHC檢測(cè)EGFR表達(dá)和PCR檢測(cè)EGFR基因突變?cè)谛詣e、年齡分布、有無(wú)吸煙史及標(biāo)本來(lái)源上的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。IHC檢測(cè)EGFR特異性抗體表達(dá)和PCR檢測(cè)EGFR基因突變具有較高的一致性，可以作為評(píng)估肺腺癌EGFR 基因突變的一個(gè)簡(jiǎn)單，低廉的篩選方法。

肺腺癌；表皮生長(zhǎng)因子受體；基因突變；免疫組織化學(xué)；實(shí)時(shí)熒光定量PCR

表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變是肺腺癌具有治療和預(yù)測(cè)作用的分子標(biāo)志物，我們總結(jié)了187例肺腺癌患者小活檢組織標(biāo)本中EGFR特異性抗體表達(dá)及基因突變狀態(tài)，并探討其臨床病理特征關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集了我院2013-03～2017-04病理科存檔187例肺腺癌。標(biāo)本源系CT引導(dǎo)下肺穿刺98例、纖支鏡活檢75例，經(jīng)胸腔鏡胸膜活檢14例。所選病例均為中晚期腺癌，且所有入選標(biāo)本均經(jīng)4%中性緩沖甲醛液固定，石蠟包埋，常規(guī)進(jìn)行病理組織學(xué)檢查確診。

1.2 免疫組織化學(xué)(IHC)檢測(cè)EGFR特異性抗體表達(dá)

采用手工操作，抗體編號(hào)RMA-0554(MX公司)，按0照抗體試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)：采用二元判讀法。即EGFR陽(yáng)性：腫瘤細(xì)胞中胞膜/胞質(zhì)中存在顆粒狀染色；EGFR陰性：腫瘤細(xì)胞胞膜/胞質(zhì)內(nèi)不存在強(qiáng)的顆粒狀染色。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR(ADx-ARMS)檢測(cè)EGFR基因突變

檢測(cè)儀器：ABI-7500,試劑盒：采用廈門艾德生物醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn)的人類EGFR基因21種突變檢測(cè)試劑盒，以熒光PCR法進(jìn)行檢測(cè)；質(zhì)量控制：DNA樣本OD值(260/280)=1.86。檢測(cè)EGFR基因的外顯子18、19、20和21，然后進(jìn)行PCR產(chǎn)物測(cè)序和基因突變分析突變。具體操作方法參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 IHC和EGFR檢測(cè)結(jié)果

187例肺腺癌患者中，CT引導(dǎo)下穿刺標(biāo)本98例中(52.4%)，支氣管鏡標(biāo)本75例(40.1%)，胸腔鏡胸膜活檢14例(7.5%)。其中，原發(fā)灶來(lái)源173例(92.5%)，轉(zhuǎn)移灶14例(7.5%)。IHC陽(yáng)性69例(36.7%)，PCR C陽(yáng)性61例(32.6%)，有8例IHC陽(yáng)性患者PCR為陰性。以PCR結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)，IHC和PCR符合率為88.4%。

2.2 IHC檢測(cè)EGFR表達(dá)、PCR檢測(cè)EGFR基因突變與臨床病理特征的關(guān)系

IHC檢測(cè)EGFR表達(dá)和PCR檢測(cè)EGFR基因突變?cè)谛詣e、年齡分布、有無(wú)吸煙史及標(biāo)本來(lái)源上的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)：女性高于男性，年齡大于>55歲者高于≤于55歲者，不吸煙者高于吸煙者，肺穿刺標(biāo)本高于纖支鏡活檢標(biāo)本，胸腔鏡下胸膜穿刺組織無(wú)區(qū)別。IHC檢測(cè)EGFR特異性抗體表達(dá)和PCR檢測(cè)EGFR基因突變具有較高的一致性，可以作為評(píng)估肺腺癌EGFR基因突變的一個(gè)簡(jiǎn)單，低廉的篩選方法。見(jiàn)圖1～3。見(jiàn)表1。

圖1 肺腺癌H-E(× 100)

圖2 肺腺癌EGFR IHC陽(yáng)性(×100)

圖3 肺腺癌EGFR基因突變曲線圖

分組總例數(shù)187IHC陽(yáng)性陰性χ2值PPCR陽(yáng)性陰性χ2值P性別 男10231(30．4)71(69．6)4．08<0．0525(24．5)77(75．5)6．72<0．05 女8538(44．7)47(55．3)36(42．4)49(57．6)年齡(歲) <558324(28．9)59(71．1)4．09<0．0521(25．3)62(74．7)4．15<0．05 ≥5510445(43．3)59(56．7041(39．4)63(60．6)吸煙史 有8926(29．2)63(70．8)4．31<0．0522(24．7)67(75．3)4．23<0．05 無(wú)9843(43．9)55(56．1)38(38．8)60(61．2)標(biāo)本來(lái)源 纖支鏡7519(25．3)56(74．7)6．36<0．0516(21．3)59(78．7)7．4<0．05 CT9843(43．9)55(56．1)40(40．8)58(59．2)胸腔鏡145(35．7)9(64．3)5(35．7)9(64．3)

3 討論

相關(guān)研究顯示表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)基因突變是肺腺癌具有治療預(yù)測(cè)作用的分子標(biāo)志物，GEFR突變可致其信號(hào)傳導(dǎo)通路活性異常增強(qiáng)，使細(xì)胞表現(xiàn)出一系列的惡性表現(xiàn)，而EGFR酪氨酸激酶抑制劑(TKIs)可特異性地阻斷EGFR活化，因其較易通過(guò)血腦屏障，可競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合三磷酸腺苷，抑制 EGFR 細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶區(qū)域的自身磷酸化，阻斷下游信號(hào)傳遞，抑制腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移[1]，從而遏制腫瘤的惡性增殖，使得EGFR突變患者對(duì)EGFR-TKIs靶向藥物敏感而受益。

本組187例肺腺癌觀察中，EGFR基因突變?cè)谂?、年齡偏大、無(wú)吸煙史者中有關(guān)，這與文獻(xiàn)中EGFR基因突變?cè)谙侔⑴?、及非吸煙者占?yōu)勢(shì)[2]是相符合的。而肺穿刺標(biāo)本EGFR表達(dá)高于纖支鏡活檢，這與肺腺癌較高發(fā)生肺周圍部位有關(guān)。本組研究中肺腺癌EGFR基因突變率為32.6%，略低于文獻(xiàn)中國(guó)大陸 1195例患者評(píng)估肺腺癌 EGFR基因突變的檢出率(38.1%)[3]和李明娜等的研究中肺腺癌的突變率38. 2% ( 39 /102) ，較明顯低于國(guó)內(nèi)鄭軍等非小細(xì)胞肺癌EGFR基因突變的臨床意義研究，其肺腺癌EGFR突變率為50.3%(P<0.05) ，考慮本組病例標(biāo)本源為穿刺標(biāo)本，組織細(xì)小，細(xì)胞數(shù)不足及腫瘤組織僅代表局部有關(guān)，其統(tǒng)計(jì)學(xué)分析還需日后增加樣本及多樣化標(biāo)本來(lái)進(jìn)一步探討。

研究表明，超過(guò)半數(shù)以上的的非小細(xì)胞肺癌就診時(shí)也為中晚期[4]，傳統(tǒng)手術(shù)、放化療療效均較差而且缺乏特異性，患者中位生存期僅為7-8月，而EGFR基因在肺腺癌中有高的突變，這就使得肺腺癌EGFR基因突變患者在EGFR-TKIs靶向藥物治療中明顯獲益，部分患者生存期可達(dá)3年[5]。本組病例為中晚期腺癌，無(wú)明顯手術(shù)機(jī)會(huì)，預(yù)后差，生存率低的特點(diǎn)，其EGFR基因突變主要涉及18、19、20、21四種外顯子的共29種突變，其中包括27種敏感突變和2種耐藥突變，而本組EGFR基因突變的患者大部分從EGFR-TKI靶向藥中受益。值得一提的是，14例經(jīng)胸腔鏡胸膜活檢標(biāo)本中，EGFR抗體表達(dá)和基因突變的符合率為100%，在這組小數(shù)據(jù)中，EGFR在轉(zhuǎn)移性肺腺癌中的高表達(dá)是引人注目的，期待著更大數(shù)據(jù)的觀察。同樣有研究顯示，EGFR 蛋白在肺腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中高表達(dá)，可作為預(yù)測(cè)肺腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的指標(biāo)[6]，其在預(yù)后中起作重要的作用。

綜上所述， EGFR基因突變是肺腺癌具有治療預(yù)測(cè)作用的分子標(biāo)志物，更在女性、高年齡及無(wú)吸煙者中占有優(yōu)勢(shì)，對(duì)肺腺癌的靶向治療提供了有力的證據(jù)，使得肺腺癌患者在EGFR-TKI靶向藥中受益，避免了傳統(tǒng)放化療對(duì)正常細(xì)胞的傷害的治療模式，越來(lái)越受到腫瘤學(xué)術(shù)界和廣大患者的認(rèn)可，在預(yù)后方面能延長(zhǎng)患者的預(yù)期壽命，從而達(dá)到療效最佳，毒性最低的效果。

[1]劉萍．表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑聯(lián)合放療治療非小細(xì)胞肺癌腦轉(zhuǎn)移臨床觀察[J]． 中華實(shí)用診斷與治療雜志，2013，27(7)：693-694

[2]Yoshida T, Ishii G, Goto K, et al. Solid predominant histology predicts EGFR tyrosine kinase inhibitor response in patients with EG?FR mutation-positive lung adenocarcinoma[J]. Cancer Res ClinOncol, 2013, 139(10):1691-1700

[3]Huang YS, Yang JJ, Zhang XC, et al. Impact of smoking status andpathologic type on epidermal growth factor receptor mutations inlung cancer[J]. Chin Med J, 2011, 124(16):2457-2460

[4]Gyula O，Andras B，Zoltan B，et al． Basie prineiples for the prevention，diagnosis and therapy of lung cancer[J]．Magy Onkol，2012，56(2)：114-132

[5]李龍蕓，鐘巍，廖美琳，等． 中國(guó)易瑞沙擴(kuò)大用藥項(xiàng)目中晚期非小細(xì)胞肺癌長(zhǎng)期生存患者的研究[J]． 中國(guó)肺癌雜志，2012，15(6)：332-339

[6]陳瑚，肺腺癌 EGFR 基因突變與 EGFR 蛋白和 EGFR 突變特異性抗體表達(dá)情況及意義[D]. 福建：福建醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)與病理生理學(xué),2014

陳秀嬋(1975～)女，貴州遵義人，本科，副主任醫(yī)師。

R734.2

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1008-0104(2017)06-0092-02

2017-09-27)