VICH血藥法生物等效性指導(dǎo)原則概述

蘇富琴，徐 倩，梁先明*，曹興元

(1中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 北京，100081；2中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 北京，100193)

VICH血藥法生物等效性指導(dǎo)原則概述

蘇富琴1，徐 倩1，梁先明1*，曹興元2*

(1中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 北京，100081；2中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 北京，100193)

VICH是指獸藥注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)合作組織。血藥法生物等效性試驗是獸藥等效性研究的重要方法。VICH血藥法生物等效性指導(dǎo)原則介紹了除多次采血困難的靶動物(如蜂、魚)的動物血藥法生物等效性的實驗試驗建議，使基本藥代動力學(xué)試驗、生物等效性試驗設(shè)計和統(tǒng)計分析原則等在VICH地區(qū)得到互認(rèn)。該指導(dǎo)原則2016年8月開始實施。

獸藥注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)合作組織；藥代動力學(xué)；生物等效性；獸藥

生物等效性(bioequivalence，BE)是指在相同試驗條件下，藥學(xué)等效制劑或給予相同摩爾數(shù)的藥物，其活性成分吸收程度和速度的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，臨床療效相等，臨床應(yīng)用上制劑可換。通常意義的BE 研究是指用生物利用度(Bioavailability，BA)研究方法，以藥代動力學(xué)參數(shù)為終點指標(biāo)，根據(jù)預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較研究。

為了避免不必要的重復(fù)試驗，統(tǒng)一獸藥注冊資料中生物等效性報告要求， VICH于2015年8月通過獸藥生物等效性(血藥法)指導(dǎo)原則[1]，2016年8月起實施。該指導(dǎo)原則包括適用范圍、制定BE試驗方案的因素/變量、統(tǒng)計學(xué)分析和術(shù)語四部分。

1 適用范圍

BE不僅適用于仿制藥與原研藥的比較，判斷仿制藥是否可與原創(chuàng)藥替換使用，還適用于新藥不同研發(fā)階段的橋接試驗，如處方工藝改變、劑型改變(如膠囊和片劑)、給藥途徑改變等的效果對比等。本指南不包括：①BE豁免情況；②微生物發(fā)酵產(chǎn)品；③治療用預(yù)混劑；④以藥理學(xué)為終點的研究；⑤以臨床為終點的研究；⑥體外溶出試驗；⑦食品安全；⑧血藥濃度與作用位點的藥物濃度無相關(guān)性的藥物(如乳房注入劑)；⑨支持性應(yīng)用研究(如適口性)；⑩多次采血困難的靶動物(如蜂、魚等)。

2 制定BE試驗方案的因素/變量

VICH要求BE的實施必須遵守良好實驗室操作規(guī)范(Good Laboratory Practices，GLP)。而我國獸藥將BE歸為良好臨床操作規(guī)范(Good Clinical Practices，GCP)。

試驗設(shè)計根據(jù)藥物和靶動物的不同特點而選擇科學(xué)合理的設(shè)計方案。

2.1 試驗設(shè)計方案要點 血藥法BE設(shè)計首選雙周期雙序列交叉試驗，不滿足首選條件時選擇平行試驗設(shè)計，其他設(shè)計如重復(fù)試驗設(shè)計、序貫試驗設(shè)計、3-處理交叉試驗設(shè)計或多個參比平行設(shè)計等。標(biāo)準(zhǔn)的雙周期雙序列交叉試驗設(shè)計(2×2)見表1。該試驗設(shè)計可以消除試驗變異的主要來源，如不同個體的藥物吸收速率差異、消除差異和分布容積差異。雙序列可以消除潛在的周期效應(yīng)干擾。兩個周期之間要保證足夠長的清洗期，周期1和周期2 的基線濃度應(yīng)基本相同。

表1 雙周期雙序列交叉試驗表Tab 1 Two-period, two-sequence, crossover test

平行試驗設(shè)計適用于①藥物原形和/或其代謝物導(dǎo)致動物的生理學(xué)特征改變(如肝藥酶被誘導(dǎo)，血流量改變)進(jìn)而導(dǎo)致周期2 的制劑生物利用度發(fā)生改變；②藥物原形和/或代謝產(chǎn)物的消除半衰期很長，或呈波動藥動學(xué)特征(如flip-flop動力學(xué))；③雙周期交叉試驗中清洗期過長導(dǎo)致動物生理狀態(tài)顯著改變；④動物的循環(huán)血量較少，采集血液檢測藥物濃度較難持續(xù)到周期2。

如果標(biāo)準(zhǔn)2×2 交叉試驗設(shè)計較難實施，可考慮采用3 周期重復(fù)(部分重復(fù)，如參比制劑在所有試驗動物處理兩次)或4 周期重復(fù)(完全重復(fù))試驗設(shè)計方案。

序貫試驗設(shè)計也適用于等效試驗。在實施序貫試驗時，可以先對一定數(shù)量的試驗動物進(jìn)行一次BE試驗并進(jìn)行期中分析，再采用一定數(shù)量的動物繼續(xù)進(jìn)行下一次BE試驗，最后匯總兩次BE試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析并判定是否等效。序貫試驗必須保證總的I 類錯誤符合要求，并在試驗開始前確定終止試驗的標(biāo)準(zhǔn)。在設(shè)計方案中需要預(yù)先定義每一階段BE試驗所用的動物數(shù)量及每次數(shù)據(jù)分析調(diào)整的顯著性水平α值。

2.2 藥物制劑的相關(guān)要點 藥物制劑包括受試制劑和參比制劑，均應(yīng)為官方批準(zhǔn)的合法生產(chǎn)的最終上市產(chǎn)品，應(yīng)含有相同的活性成分(API)。在實施BE前要進(jìn)行含量測定，不同批次間的受試制劑與參比制劑的含量差異應(yīng)在±5%之內(nèi)。實施BE前，應(yīng)明確受試制劑的關(guān)鍵質(zhì)量特征(如溶出度)。

2.2.1 給藥途徑及給藥部位 受試制劑和參比制劑應(yīng)采用相同的給藥途徑和給藥部位。參比制劑如果存在多種給藥途徑，應(yīng)分別實施不同給藥途徑的BE試驗。

2.2.2 給藥劑量 在交叉試驗中，每個受試動物接受的受試制劑和參比制劑的總劑量是相同的，極少數(shù)情況，由于動物生長過快導(dǎo)致個體間藥物的體內(nèi)過程差異過大，給藥劑量也可調(diào)整。BE試驗中動物給藥劑量不是采用API的含量實測值，而是標(biāo)簽用量。一般采用標(biāo)簽最高劑量，大多數(shù)藥物即可確定受試制劑和參比制劑之間的差異。如果在標(biāo)簽標(biāo)示范圍內(nèi)藥動學(xué)特征(PK)呈線性，也可采用標(biāo)簽低劑量。例外情況，如果某一批次的參比制劑與受試制劑含量差異超過5%，給藥劑量可以進(jìn)行歸一化，但歸一化需要在試驗方案中預(yù)先定義。血藥濃度低的藥物，為了達(dá)到有效的可測藥物濃度，允許超過標(biāo)簽最高劑量給藥，但一般不應(yīng)超過3倍，前提是藥物的安全范圍較寬且PK呈線性。對于標(biāo)簽范圍內(nèi)PK不呈線性的參比制劑，應(yīng)考慮：①如果有證據(jù)表明藥物存在飽和吸收過程，限制了API的吸收，則可能會出現(xiàn)標(biāo)簽高劑量等效而標(biāo)簽低劑量不等效，此時要優(yōu)先選擇標(biāo)簽低劑量，并提供低劑量選擇依據(jù)和PK的線性范圍。②如果API溶解性較低，超過標(biāo)簽劑量范圍后存在非線性PK，則標(biāo)簽高劑量和標(biāo)簽低劑量的BE試驗均應(yīng)實施。

2.2.3 單次給藥vs多次給藥 大多數(shù)情況，速釋制劑(immediate-release drug products，IR)和控釋制劑(modified-release drug products，MR)，均可選擇單次給藥藥動學(xué)試驗方案，因為單次給藥對于評價API從制劑中釋放進(jìn)入到循環(huán)系統(tǒng)的差異更為靈敏。對于重復(fù)給藥的緩釋制劑(extended release formulations，ER)，如果每次給藥無蓄積效應(yīng)或蓄積效應(yīng)可忽略不計，可進(jìn)行單次給藥的BE試驗。如果存在蓄積效應(yīng)(如穩(wěn)態(tài)血藥濃度超過單次給藥的2 倍)，BE試驗應(yīng)基于多次給藥試驗設(shè)計。存在衡量消除過程(即零級代謝動力學(xué))的藥物，單次給藥血藥濃度太低致使檢測方法無法獲得完整的AUC信息的藥物，也要采用多次給藥試驗設(shè)計。除了評價Cmax和AUC，還要重點評價谷濃度(Ctrough)。單次和多次給藥方案均可采用平行或交叉試驗設(shè)計。由于較長的試驗周期增加了試驗的復(fù)雜性，因此不建議序貫試驗設(shè)計和重復(fù)試驗設(shè)計用于多次給藥的試驗。

2.3 試驗動物和動物種屬的相關(guān)要點 動物種屬 BE試驗必須使用靶動物。為了注冊單獨用于特定靶動物的仿制藥，必須根據(jù)參比制劑標(biāo)簽中的每一種主要靶動物單獨進(jìn)行BE試驗，在主要種屬動物證實生物等效的結(jié)果可以外推到標(biāo)簽中的次要種屬動物，此時還應(yīng)有科學(xué)數(shù)據(jù)支持外推結(jié)果，例如，要考慮動物的解剖和生理特點，制劑API的性質(zhì)和劑型等。

2.3.1 分組 動物應(yīng)隨機(jī)分組，每個序列(交叉設(shè)計)或每個處理組(平行設(shè)計)的動物數(shù)應(yīng)相等。實施BE試驗應(yīng)采用健康動物。對于平行試驗設(shè)計，試驗動物潛在影響API藥動學(xué)特征的因素盡可能均衡，如體重、性別、營養(yǎng)、生理狀態(tài)、繁殖水平(如果相關(guān))等。

2.3.2 膳食狀態(tài) 所有種屬動物的膳食狀態(tài)和飼喂時間均應(yīng)符合動物福利(如反芻動物不能禁食)和API的藥動學(xué)特征。犬貓用的內(nèi)服制劑，均應(yīng)禁食空腹進(jìn)行BE試驗，除非參比制劑標(biāo)簽中明確標(biāo)示僅用于飼喂后動物。給藥前至少禁食8 h，給藥后禁食4 h。對于用于非反芻動物的口服速釋制劑，正常情況下，BE試驗應(yīng)在空腹和進(jìn)食兩種狀態(tài)下進(jìn)行，除非有其他證據(jù)。試驗方案和報告應(yīng)闡明在飼喂或禁食狀態(tài)下開展BE試驗的合理性，并且要描述飲食和飼料配方。

2.3.3 動物數(shù)量(樣本容量) 預(yù)實驗有助于估計正式BE試驗所需的合適樣本容量，樣本容量應(yīng)在試驗方案中預(yù)先說明，所計算的樣本容量是正式試驗的最少動物數(shù)量。對于普遍接受的BE試驗，每種制劑處理至少12只動物。對于交叉試驗，每個序列最少為6(n=6)只動物，因此總的數(shù)量至少為12(N≥12)只。對于平行試驗，每個處理組不少于12只，因此總數(shù)不少于24只?？紤]動物的脫落風(fēng)險(如嘔吐、給藥錯誤、受傷/死亡)，需要增加動物數(shù)，以保證統(tǒng)計學(xué)分析有效。

2.4 分析中的數(shù)據(jù)剔除 多種情況下，可能且有必要剔除一個試驗動物的全部或部分?jǐn)?shù)據(jù)。如果剔除，要在報告中說明剔除的充分理由，實驗方案應(yīng)制定好數(shù)據(jù)剔除規(guī)則，以避免偏差，剔除樣本可不進(jìn)行血樣分析。所有的有效數(shù)據(jù)均應(yīng)包含在統(tǒng)計學(xué)分析中，不能以統(tǒng)計學(xué)理由和藥動學(xué)理由剔除數(shù)據(jù)。例如，某頭動物周期2 的數(shù)據(jù)被剔除后，周期1 的數(shù)據(jù)不能對應(yīng)剔除，也應(yīng)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。

通常，試驗方案中應(yīng)有剔除標(biāo)準(zhǔn)，如內(nèi)服制劑存在嘔吐風(fēng)險，因嘔吐導(dǎo)致丟失的部分或全部給藥劑量，因此，試驗方案中預(yù)先設(shè)定與嘔吐有關(guān)的數(shù)據(jù)剔除標(biāo)準(zhǔn)。如剔除標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)寫明①從給藥到發(fā)生嘔吐的可接受時間(如胃排空時間，動物的膳食狀態(tài)等)。②可接受的因嘔吐導(dǎo)致的藥物損失量。此外，試驗中可選擇在動物嘔吐后重復(fù)給藥，其標(biāo)準(zhǔn)也應(yīng)在試驗方案中預(yù)先說明。

2.5 血樣采集方案及PK參數(shù) 圍繞Tmax要有足夠的采樣點，以便對Cmax進(jìn)行可靠的估計。對于非靜脈途徑給藥的藥物，避免首個采樣點為Cmax，采樣時間范圍要保證AUC0-last大于AUC0-∞的80%。消除相對數(shù)線性回歸分析時要至少選擇3個采樣點，以準(zhǔn)確估計ke，并準(zhǔn)確估計AUC0-∞。對于具有較長終末消除半衰期的藥物，BE評價時的AUC值可能小于藥物系統(tǒng)暴露總量(AUC0-∞)的80%(Cmax除外)，此時應(yīng)保證在整個采樣時間內(nèi)，藥物已吸收完全。對于多次給藥的BE試驗，pre-dose樣本應(yīng)在給藥前立即采集，并且建議最后一個采樣點緊鄰給藥間隔末端，以便準(zhǔn)確估計AUCτ，采樣必須證明血藥濃度已達(dá)穩(wěn)態(tài)。

生物等效性中的PK 參數(shù)必須經(jīng)非房室模型分析方法計算獲得。在單次給藥的BE試驗中，應(yīng)給出Cmax、Tmax、AUC0-last和AUC0-∞藥動學(xué)參數(shù)。在多次給藥的BE試驗中，應(yīng)給出AUCτ、穩(wěn)態(tài)Cmax(Cmax ss)、穩(wěn)態(tài)Ctrough、穩(wěn)態(tài)Tmax(Tmax ss)。控釋制劑也要分析Ctrough。其他參數(shù)包括ke、終末消除半衰期和Tlag。如果API 為內(nèi)源性物質(zhì)，生物等效性PK 參數(shù)的計算應(yīng)包含基線濃度的修正。

2.6 檢測物質(zhì)

2.6.1 原形藥/代謝物 一般推薦僅測定原形藥物，因為原形藥物的Cmax比代謝產(chǎn)物能更靈敏地反映制劑間的差異。BE的等效判定基于API 的總藥物濃度(游離藥物+與蛋白結(jié)合的藥物)。

2.6.2 非活性前藥 前藥的BE 判定仍依據(jù)前藥，而不是代謝物，除非前藥在血漿中濃度過低幾乎無法檢測。如果前藥無法測定，則測定代謝產(chǎn)物。

2.6.3 外消旋體/對映體 外消旋體通常推薦用非手性的檢測方法進(jìn)行生物樣品測定。若同時滿足以下條件，則需分別測定各對映體：①對映體藥效動力學(xué)特征不同；②對映體PK特征不同；③藥效主要由含量較少的異構(gòu)體產(chǎn)生；④至少有一個異構(gòu)體在吸收過程呈現(xiàn)非線性特征(隨著藥物吸收速率的變化，對映體濃度比例發(fā)生改變)。手性輔料選擇性地改變的一種或全部異構(gòu)體的吸收過程，也必須采用手性分析方法。如果藥物為單一構(gòu)型，但在體內(nèi)存在手性轉(zhuǎn)化，也需要用手性分析方法。

2.7 生物分析方法的驗證 BE 試驗中的生物分析方法必須經(jīng)過驗證，方法學(xué)驗證部分要包括：濃度范圍和線性、基質(zhì)效應(yīng)、定量限、特異性(選擇性)、準(zhǔn)確度、精密度、分析物和內(nèi)標(biāo)物的穩(wěn)定性。

3 統(tǒng)計分析要點和等效標(biāo)準(zhǔn)

統(tǒng)計模型和隨機(jī)化過程應(yīng)在試驗方案中預(yù)先定義。根據(jù)不同的試驗設(shè)計采用合適的統(tǒng)計學(xué)方法。PK參數(shù)進(jìn)行LN 轉(zhuǎn)換用于滿足ANOVA 的假設(shè)條件，ANOVA 用于分析變異差異有無統(tǒng)計學(xué)意義。BE的最好評價方法為雙向單側(cè)t檢驗及90%置信區(qū)間法。提供AUC0-t、AUC0-∞、Cmax幾何均值、算術(shù)均值、幾何均值比值及其90%置信區(qū)間(CI)等。參數(shù)幾何均值比值的90%置信區(qū)間數(shù)值，AUC和Cmax 的接受標(biāo)準(zhǔn)為80.00%～125.00%，窄治療窗藥物應(yīng)根據(jù)藥物的特性適當(dāng)縮小90%置信區(qū)間范圍。緩釋制劑的多次給藥BE試驗且存在藥物蓄積時，Ctrough也適用80.00%～125.00% 的等效限標(biāo)準(zhǔn)。

4 結(jié) 語

VICH GL52(血藥法生物等效性指導(dǎo)原則)給出了獸藥血藥法BE的基本建議，其基本原則與WHO[2]、FDA/EMA等[3-6]以及CFDA[7]的相同，如試驗設(shè)計原則、數(shù)據(jù)剔除原則、生物樣本采集及處理、統(tǒng)計學(xué)原則、等效性判定標(biāo)準(zhǔn)等。特殊特點藥物的設(shè)計及要點可參考相關(guān)文獻(xiàn)，如高變異性藥物[8]、長半衰期藥物的截尾模型[9]。所不同的是，獸藥的復(fù)雜性在于靶動物的多樣性，并且每種靶動物有其獨特的解剖和生理特點，比如，反芻動物形成瘤胃前后生理差異明顯，反芻動物不能禁食，蜂蠶魚無法連續(xù)采血，這就使得動物BE因不同種屬靶動物特點而不同。其次，人的BE試驗認(rèn)為藥物有效性和安全性均等效，動物的BE結(jié)果只能說明藥物有效性等效，無法替代安全性，所以與食品安全有關(guān)的獸藥殘留消除試驗需要單獨實施。另外，支持性試驗研究如適口性、耐受性試驗也需要單獨進(jìn)行。再者，VICH要求使用健康靶動物，F(xiàn)DA/EMA和CFDA也要求首選健康志愿者，但在健康人群不能承受藥物不良反應(yīng)或者患者對藥物的耐受性更好時，要選者患者進(jìn)行BE試驗[10]。最后，實施BE難度，獸藥要相對簡單，因為靶動物可以標(biāo)準(zhǔn)化管理，也無自主行為，而人群的不受控因素例如吸煙、飲酒、自主服用藥物/保健品、使用避孕藥等，數(shù)據(jù)脫落的幾率更大。VICH血藥法生物等效性指導(dǎo)原則為我國獸藥仿制藥注冊和比對試驗的實施提供了參考。

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OverviewofVICHGuaidlineofBioequivalence:BloodLevelBioequivalenceStudyforVeterinaryPharmaceticalProducts

SU Fu-qin1，XU Qian1，LIANG Xian-ming1*，CAO Xing-yuan2*

(1.ChinaInstituteofVeterinaryDrugControl,Beijing100081,China; 2.ChinaAgricultureUniversity,Beijing100084,China)

LIANGXian-ming,E-mail：lxm990@163.com;CAOXing-yuan,E-mail：cxy@cau.edu.cn

VICH is the abbreviation of International Cooperation on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Veterinary Medicinal Products.Blood level bioequivalence study is one of the key methord in veterinary medical comparison test. We summerized the key points of the VICH Guaidline of Bioequivalence: blood level bioequivalence study for veterinary pharmacetical products. The basic pharmacokinetics (PK), study design considerations and statistical principles have been described in detail in order to unify the harmonized guideline in the global veterinary community. Animal species from which multiple blood sampling is difficult (e.g., fish, honeybee etc.) are outside the scope of this guideline which is implemented from August 2016.

International Cooperation on Harmonization of Technical Requirements for Registration of Veterinary Medicinal Products (VICH)； pharmacokinetics；bioequivalence(BE)；veterinary pharmacetical products

10.11751/ISSN.1002-1280.2017.12.11

2017-00-00

A

1002-1280 (2017) 12-0057-05

S851.66

蘇富琴，副研究員，從事藥理學(xué)及毒理學(xué)方面研究。

梁先明，E-mail：lxm990@163.com;曹興元，E-mail：cxy@cau.edu.cn。

(編輯：陳希)