妥布霉素口服液的制備及質(zhì)量控制

孫慶玲

摘 要：本文制備妥布霉素口服液并研究其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。采用高校液相測(cè)定了妥布霉素口服液中妥布霉素的含量，固定相為USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（5μm，4.6mm×150mm），流動(dòng)相為0.1mol·L-1三氟乙酸溶液；霧化管溫度40℃，漂移管溫度80℃，載氣壓力0.35MPa；流速1.0mL·min-1。妥布霉素對(duì)照品在50～900μg/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。妥布霉素的平均回收率為99.5%，RSD為0.91% （n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于妥布霉素口服液的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：妥布霉素口服液；制備；質(zhì)量控制

妥布霉素中文別名安欣、抗普霉素、托霉素等，英文別名Brulamycin、Gernebcin、NebramycinFactor6、Obracin、Tobradistin。妥布霉素對(duì)革蘭陰性菌特別是對(duì)綠膿桿菌具有高效，其作用為慶大霉素強(qiáng)2～4倍。妥布霉素適用于綠膿桿菌、大腸桿菌、克雷伯菌屬、沙雷菌屬及葡萄球菌（包括耐青霉素G與耐甲氧西林菌株）所致的新生兒膿毒癥、敗血癥、膽道感染、腹腔感染（及腹膜炎）、骨骼感染、急性與皮膚、軟組織感染（包括燒傷）、慢性中耳炎、鼻竇炎等。本文制備妥布霉素口服液并研究其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

ZJ/FL2200高效液相色譜儀（等度）（北京中西遠(yuǎn)大科技有限公司）；HT/GDSJ-225北京交變高低溫濕熱試驗(yàn)箱（北京恒泰豐科試驗(yàn)設(shè)備有限公司）； 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器（北京恒奧德儀器儀表有限公司）；DBT-IV-20 DBT-IV-20高端型超純水機(jī)（杜伯特（北京）科技有限公司）； 高低溫試驗(yàn)箱（浙江巨為儀器股份有限公司）；超聲波清洗機(jī)（上?？缕顑x器設(shè)備有限公司）；RS-EA十萬(wàn)分之一電子天平（上海睿珊電子科技有限公司）。自制妥布霉素口服液批號(hào)為180101，180102，180103。妥布霉素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所提供）。乙腈（天津市康科德科技有限公司）、（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）、甲醇（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）、三乙胺（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）、三氟乙酸（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）、醋酸（北京市津同樂(lè)泰化工產(chǎn)品有限公司）。

2 制備妥布霉素口服液

取妥布霉素，加入防腐劑等，調(diào)節(jié)pH至5.8，加純化水定容至300L，濾過(guò)，灌封，滅菌，即得妥布霉素口服液。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀本品為無(wú)色液體，味甜

3.2 色譜條件

色譜柱為USA Agilent ZORBAXSB-C18柱（規(guī)格4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相為0.1mol·L-1三氟乙酸溶液；霧化管溫度40℃，漂移管溫度80℃，載氣壓力0.35MPa；流速1.0mL·min-1；柱溫：30℃[1-6]。

3.3 提取溶媒的選擇

在供試品溶液制備中，分別選用了水、20%甲醇、甲醇進(jìn)行超聲提取，結(jié)果表明20%甲醇分離效果、峰形及含量均為最好，所以選擇20%甲醇進(jìn)行超聲提取。

3.4 供試品溶液的制備

取妥布霉素口服液適量，精密量取1ml，置10mL量瓶中，加20%甲醇適量，超聲處理20min使溶解，放置至室溫，加20%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過(guò)，即得。

3.5 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取妥布霉素對(duì)照品約20mg，置50mL容量瓶中，用20%甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5mL至10mL容量瓶中，用20%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得（每1mL溶液中含妥布霉素200.0μg）。

3.6 陰性干擾試驗(yàn)

在處方中去妥布霉素，按方中比例和制備工藝方法制成陰性制劑，用供試品溶液制備的方法，制成陰性對(duì)照溶液，用以上選定的測(cè)定條件進(jìn)行吸收曲線(xiàn)繪制，觀察在與妥布霉素相同的保留時(shí)間處是否存在吸收峰，結(jié)果表明：在選定條件下測(cè)得的陰性液吸收曲線(xiàn)在與妥布霉素相同保留時(shí)間處不存在吸收峰，因此說(shuō)明選定的條件測(cè)定妥布霉素?zé)o干擾，具有較強(qiáng)的專(zhuān)屬性。

3.7 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備

將濃度為50μg/ml，100μg/ml，300μg/ml，500μg/ml，700μg/ml，800μg/ml，900μg/ml的對(duì)照品溶液分別吸取20μL注入HPLC，以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。試驗(yàn)表明，妥布霉素對(duì)照品在50～900μg/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

3.8 精密度試驗(yàn)

精密吸取妥布霉素對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.98%。

3.9 重現(xiàn)性試驗(yàn)

分別稱(chēng)取同批妥布霉素口服液樣品6份，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值為0.67%，此含量測(cè)定方法的重現(xiàn)性良好。

3.10 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液與同一供試品溶液，分別在0，4，8進(jìn)樣測(cè)定，樣品溶液的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明，室溫下8h內(nèi)測(cè)定峰面積基本一致；將樣品置棕色試劑瓶?jī)?nèi)，于4℃冷藏放置，24h內(nèi)測(cè)定峰面積基本一致。

3.11 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱(chēng)定，分別精密添加一定量的妥布霉素對(duì)照品，按供試品制備所述方法測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.5%，RSD為0.91%。

3.12 含量限度的確定

按本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)含量測(cè)定項(xiàng)下方法，測(cè)定了三批樣品，結(jié)果表明，樣品中妥布霉素的含量差異，含量為標(biāo)示量的95-105%。

4 討論

分別考察甲醇-水-三乙胺（25∶75：0.1），甲醇-0.1mol·L-1三氟乙酸溶液（5∶95），甲醇-0.1mol·L-1三氟乙酸溶液（2∶98），甲醇-2%醋酸水溶液（18∶82），0.1mol·L-1三氟乙酸溶液不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以0.1mol·L-1三氟乙酸溶液為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用0.1mol·L-1三氟乙酸溶液為流動(dòng)相。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于妥布霉素口服液的質(zhì)量控制；本制劑穩(wěn)定可靠。

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