貫葉連翹不同部位對(duì)肝損傷保護(hù)作用的研究

王燕

當(dāng)今社會(huì)，肝臟疾病嚴(yán)重影響著人類的健康。尤其是由藥物毒性引起的肝損傷--急性肝損傷，約占報(bào)告病例數(shù)的90%以上。急性肝損傷疾病，成為常規(guī)的一種肝臟疾病，正嚴(yán)重危害著人類的健康[1]。急性肝損傷可延展為慢性，表現(xiàn)為長(zhǎng)期的肝功能異常、肝硬化，最終可引起肝死亡，同時(shí)伴有其他臟器的明顯損害或肝外超敏反應(yīng)癥狀。部分患者可發(fā)生暴發(fā)性或重癥肝功能衰竭并成為肝纖維化，肝硬化、肝癌等疾病發(fā)生的重要因素[2]。研發(fā)抗肝臟疾病損傷的有效藥物，尤其從大自然中獲得服用安全、藥效穩(wěn)定的天然保肝藥成為國(guó)內(nèi)外政府及相關(guān)部門關(guān)注的熱點(diǎn)顯得尤為重要[4]。

貫葉連翹（St.john'swort），又名貫葉金絲桃，俗稱為圣約翰草，系藤黃科金絲桃屬多年生草本植物，其性平，味辛苦澀，具有清心明目、舒經(jīng)活血、止血生肌、解毒消炎、利濕之功效，抗菌消炎、收斂止血、調(diào)經(jīng)活血、消腫止痛之功效，在民間已有二千四百余年的藥用歷史。貫葉連翹富含多種有效成分如生物堿、黃酮類、多糖、氨基酸等[3]，具有抗菌、抗病毒、抗炎和免疫、保護(hù)心血管系統(tǒng)、抗腫瘤、保肝及神經(jīng)保護(hù)等廣泛的藥理作用，具有較好的臨床應(yīng)用價(jià)值[5]。研究表明，貫葉連翹提取物對(duì)小鼠急性肝損傷有較好的預(yù)防和保護(hù)作用，本研究采用動(dòng)物肝損傷模型，建立貫葉連翹不同部位對(duì)肝損傷保護(hù)的研究。為進(jìn)一步追蹤其活性成分提供實(shí)驗(yàn)參考。

1材料與方法

1.1 藥品 谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草谷丙轉(zhuǎn)氨酶等試劑盒（南京建成生物工程研究所）；聯(lián)苯雙酯（廣西星群藥業(yè)股份有限公司）、四氯化碳、95%乙醇等均為分析純。

1.2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為昆明種小鼠，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

2實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與結(jié)果

2.1 方法

2.1.1 藥液的處理 將粉碎的原藥材用95%乙醇和水回流提取， 濃縮蒸干得醇提物和水提物。醇提物用適量水懸浮后依次用石油醚、水飽和的乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，各部分萃取液濃縮得到不同極性部位浸膏。將浸膏處理成混懸液。

2.1.2 肝損傷模型的建立 將小鼠雌雄各半110只，常規(guī)飼養(yǎng)3天，隨機(jī)進(jìn)行分組，每組10只，分別為模型組（A）、正常組（B）1、聯(lián)苯雙酯對(duì)照組（C），石油醚高劑量組（ D） 、石油醚低劑量組（ E） 、醋酸乙酯高劑量組（ F） 、醋酸乙酯低劑量組（ G ） 、正丁醇高劑量組 （ H） 、正丁醇低劑量組（ I） 、水高劑量組（ J） 、水低劑量組（ K）。正常組和模型組以灌胃給予小鼠0.3 ml生理鹽水，其余各組分別按高低劑量（100mg·kg-1、300mg·kg-1）分別給予不同劑量灌胃和聯(lián)苯雙酯，每天1次，連續(xù)14 d。末次給藥后8h，實(shí)驗(yàn)時(shí)，正常組小灌胃生理鹽水溶液0.3 ml，其他各組均灌胃0.2%的四氯化碳溶液（橄欖油溶解）造模，一次性建立肝損傷模型。隨后所有小鼠禁食8 h，收集血液，分離血清檢測(cè)ALT、AST等指標(biāo)。

2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，定量資料以x ± s 表示；符合正態(tài)分布且方差齊性的資料采用兩獨(dú)立樣本的t 檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的資料采用秩和檢驗(yàn)。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

（與正常對(duì)照組比較*p < 0.05；與模型組比較**p < 0.01，***p < 0.05）

表1為貫葉連翹不同部位提取物對(duì)CCl4誘使的肝損傷小鼠血清ALT和AST活力的影響。由表可知，模型組中大鼠血清中 ALT 和 AST 的活性顯著升高，說明本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ秃艹晒ΑCl4造模后模型組A的血清中ALT和AST與正常對(duì)照組B相比均有顯著性差異。與模型組相比較， 動(dòng)物口服陽(yáng)性對(duì)照藥 （ C） 能非常明顯的抑制兩種轉(zhuǎn)氨酶的升高。動(dòng)物口服貫葉連翹醋酸乙酯（ F） 和正丁醇部位的高低劑量組（ H、I） 均可明顯抑制大鼠血清中 ALT 、AST 的升高，而且正丁醇部位的高低劑量組（ H、I）的抑制效果更為明顯 。因此初步判斷正丁醇部位為抑制CCl4誘使的肝損傷引起的轉(zhuǎn)氨酶升高的藥效活性部位。結(jié)果表明，貫葉連翹正丁醇部位能夠明顯降低肝損傷小鼠血清ALT和AST水平，其作用與聯(lián)苯雙酯相接近。

同時(shí)，在光鏡觀察下可見模型組肝小葉結(jié)構(gòu)破壞， 肝細(xì)胞索狀排列不明顯， 可見明顯淤血。肝細(xì)胞明顯腫脹， 點(diǎn)灶狀壞死多見。陽(yáng)性對(duì)照藥和紅絲線草正丁醇部位的高低劑量組所見病變較損傷組明顯減輕， 肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常， 細(xì)胞索狀排列較整齊，肝內(nèi)淤血及細(xì)胞腫脹明顯減輕， 可見少量點(diǎn)灶狀壞死。病理檢查結(jié)果亦表明動(dòng)物口服貫葉連翹正丁醇部位對(duì)肝損傷有一定的修復(fù)作用。

3 討論

本研究采用動(dòng)物肝損傷模型，建立貫葉連翹不同部位對(duì)肝損傷保護(hù)作用的研究，結(jié)果表明，貫葉連翹正丁醇部位能夠明顯降低肝損傷小鼠血清ALT和AST水平，其作用與聯(lián)苯雙酯相接近。因此表明貫葉連翹提取物對(duì)小鼠急性肝損傷有較好的預(yù)防和保護(hù)作用。為進(jìn)一步追蹤其活性成分提供實(shí)驗(yàn)參考。

參考文獻(xiàn)：

[1]朱云，成佳黛，王立福，楊慧銀，王仲霞，周坤，肖小河，李永綱.中醫(yī)藥治療藥物性肝損傷的研究概況[J]. 中西醫(yī)結(jié)合肝病雜志，2014，04：254-256.

[2]侯寶霞.藥物性肝損傷的臨床分析[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2014，16：125-126.

[3]符繼紅，張麗靜，胡西塔爾.高效液相色譜法測(cè)定貫葉連翹中氨基酸的含量[J]. 分析儀器，2007，01：27-30.

[4]余理紅，鄭清明，秦路平.貫葉連翹不同提取部位抗抑郁作用的藥理篩選[J].海軍醫(yī)學(xué)雜志，2004， 03：195-197.

[5]馬昆，劉燕玲. 中藥引起的藥物性肝損傷研究進(jìn)展[J].光明中醫(yī)，2015， 04： 907-91.